Определение подвижности микроорганизмов.
Для определения подвижности бактерий применяют методы «висячая капля» и «раздавленная капля».
Метод «висячая капля». Каплю 18...20-часовой бульонной культуры или каплю конденсата агаровой культуры наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с углублением (луночкой), края которого слегка смазывают вазелином, накрывают каплю культуры так, чтобы покровное стекло прилипло к предметному стеклу. Препарат перевертывают покровным стеклом вверх, и капля «висит» над луночкой (рис. 14).
Микроскопируют препарат в сухой системе объективов при слегка затемненном поле зрения (пользуются диафрагмой и опущенным конденсором). Под малым увеличением находят край капли, затем, приподняв тубус, переводят в рабочее состояние объектив среднего увеличения (40...60), осторожно, под контролем глаза (смотреть сбоку) опускают тубус до соприкосновения фронтальной линзы объектива с покровным стеклом. Затем, глядя в окуляр, осторожно поднимают макрометрическим винтом тубус и находят в поле зрения каплю. Далее микрометрическим винтом настраивают микроскоп до оптимальной видимости микробов. Рис. 14. Препарат «висячая капля.
Метод «раздавленная капля». На обычное предметное стекло наносят каплю суточной бактериальной культуры, осторожно накрывают покровным стеклом так, чтобы между стеклами не образовались пузырьки воздуха, а капля культуры не растеклась за края покровного стекла. Осторожно опускают объектив среднего увеличения и микроскопируют.
В обоих случаях на сероватом фоне поля зрения хорошо заметно движение микробных клеток.
Приготовление красителей и окраска мазков-препаратов. Методы пересева микроорганизмов.
Микроскопируют микробы в живом и неживом состоянии. Для изучения морфологических и тинкториаль-ных свойств микроорганизмов готовят специально окрашенный препарат, применяя для этого различные анилиновые красители.
Краски и красящие растворы. Наиболее часто в микробиологической практике используются следующие анилиновые краски: фуксин (основной), метиловый красный, нейтральный красный — в растворе имеют красный цвет; карболовый кристаллвиолет, ме-тилвиолет, генцианвиолет, готовая жидкая краска Гимза (азур-эозин) фиолетового цвета; метиленовая синь, бриллиантовая и малахитовая зелень.
Из сухих кристаллических или порошкообразных красителей готовят водные или спиртовые растворы красок. Последние обычно готовят впрок, так как они хорошо сохраняются в темноте (посуда из темного стекла, темное помещение). Для усиления действия красящих растворов на микробную клетку используют различные протравители, которые добавляют в раствор красителя (фенол, едкий калий) или ими обрабатывают препарат перед окрашиванием (слабые растворы соляной, серной или хромовой кислот). Также с целью протравливания препарат с налитой на него краской прогревают или заливают предварительно подогретым раствором краски. Краски, нестойкие в растворе, не сохраняющиеся длительное время, готовят только непосредственно перед употреблением в виде 1...2%-го раствора.
Спиртоводные растворы. Карболовый фуксин (фуксин Циля). Кристаллы основного фуксина предварительно растворяют в 96%-м этиловом спирте. Сначала готовят насыщенный спиртовой раствор (на 5...10 г краски 100 мл спирта). Для лучшего и более быстрого растворения кристаллы краски предварительно растирают в фарфоровой ступке в небольшом количестве спирта с добавлением нескольких капель глицерина. Чисто спиртовой раствор для окраски непригоден, поэтому готовят спиртоводный раствор: к 10...20 мл насыщенного спиртового раствора фуксина добавляют 100 мл дистиллированной воды с 5 % фенола (протрава). Полученный раствор фуксина фильтруют через фильтровальную бумагу. В ряде случаев фуксин Циля перед использованием разбавляют еще раз дистиллированной водой (1:10) и получают его рабочий раствор (фуксин Пфейффера).
Карболовый кристаллвиолет, метипвиолет, генцианвиолет. Первые два красителя в растворе очень быстро выпадают в осадок и при окрашивании могут исказить микроскопическую картину. Чаще используют генцианвиолет, который получают смешением метил- и кристаллвиолета с добавлением декстрина; он дает более ровное окрашивание. Для приготовления спиртоводного раствора 1 г сухого генцианвиолета растворяют в 10 мл спирта, растирая в ступке с глицерином и кристалликами фенола (2 %), затем добавляют дистиллированную воду. Чтобы избежать образования осадка при хранении раствора, листы фильтровальной бумаги пропитывают насыщенным спиртовым раствором краски, высушивают их на воздухе, нарезают мелкими полосками или квадратиками и сохраняют в темной банке с притертой пробкой.
При окраске препарата на него накладывают высушенную полоску с генцианвиолетом, сверху наливают несколько капель воды, выдерживая 2...3 мин.
Раствор метиленовой сини (щелочная синь Леффлера). Для приготовления раствора 3 г краски настаивают длительное время (3...4 мес) в 100 мл 96%-го спирта, затем 30 мл насыщенного раствора разбавляют в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 1 мл!%-го раствора едкого калия (протрава). Фильтруют.
Водные растворы. 2%-й сафранин: 2 г сухого красителя заливают 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр и сразу используют свежий раствор для окрашивания.
1%-й раствор малахитовой зелени: 1 г кристаллической краски растворяют в 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют ее, остужают и используют для окрашивания.
Готовую жидкую краску азур-эозин (краска Гимза) применяют при специальных методах окрашивания бактерийных препаратов. Перед употреблением ее необходимо разбавить дистиллированной водой (1:10), но при этом сразу образуется осадок. Чтобы последний не влиял на препарат, окрашивание проводят, по рекомендации Романовского, следующим образом: на дно чашки Петри кладут стеклянные палочки или спички с обломанными головками, на них помещают препарат мазком вниз, раствор краски подливают под препарат (метод Романовского—Гимза).
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1482 | Нарушение авторских прав
|