АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

А. Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные сыворотки для определения групп крови изготавливаются учреждениями службы крови (отделе­ниями, станциями и институтами переливания крови). Они готовятся из сыворотки крови человека и содержат в различных комбинациях и в достаточном количестве груп­повые изоагглютинины α и β, которые вступают в реакцию антиген - антитело с антигенами системы АВ0 исследуе­мых эритроцитов, склеивая (агглютинируя) их.

В нашей стране при определении групп крови обяза­тельно использование стандартных сывороток четырех групп: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV). Последняя не содержит групповых изоагглютининов и не должна давать реакции агглютинации (изосерологически нейтральна). Сыворотки окрашены и имеют в перечисленной последовательности следующую цветовую маркировку: бесцветная, синяя, красная, желтая. При нанесении стандартных сывороток на плоскость, где определяется группа крови, необходимо соблюдать такую же последовательность расположения цветов (контроль верности нанесения на плоскость стандартных сывороток). Стандартные сыворотки выпускают­ся учреждением-изготовителем в герметически закрытых флакончиках (как для инсулина) или ампулах. Этикетка на этих сосудах со стандартной сывороткой имеет надписи: наиме­нование учреждения, выпустившего сыворотку; групповая принадлежность данной сыворотки приведенным выше шифром - 0 (I), A (II) и т. д.; титр антител, количество (обычно по 2-5 мл) сыворотки, дата истечения срока годности; серия, обозначающая порядковый номер изгото­вления в текущем году. Помимо этого на этикетках нане­сены цветные полосы, число и цвет которых соответствуют обозначению групповой принадлежности сыворотки.

Например, сыворотка 0 (I) не окрашена и поэтому полос не имеет, сыворотка А (II) имеет две полосы синего цвета, сыворотка В (III) — три красные и АВ (IV) — четыре желтые полосы. Титром сыворотки считается ее максимальное разведение, при котором невооруженным глазом видна реакция агглютинации; его величина гарантируется учреждением — изготовителем сыворотки.

Определение групп крови производится в хорошо осве­щенном помещении при температуре +15... +25 "С.

Используются любые белые пластинки (тарелки, пластик) со смачиваемой поверхностью (на которых не растекаются капли сывороток) или специальные планшеты. На верхнем крае пишется фамилия и инициалы человека, у которого определяется группа крови. Специальные пластины имеют над лунками обозначения, согласно которым наносятся стандартные сыворотки. На приспособленных для определения группы крови пласти­нах по верхнему краю слева направо наносят надписи: О (I), А (II), В (III) и при необходимости - АВ (IV). Под соответствующими обозначениями в два ряда наносятся разные серии стандартных сывороток. В верхнем и нижнем рядах одногруппные сыворотки должны быть различных (не совпадающих) серий. То есть, используются по две серии сывороток каждой группы. Каждая сыворотка наносится отдельной пипеткой (чаще всего используют глазные пипетки), поэтому пипетки должны маркироваться (0, А, В, АВ) и нахо­диться только в своих флакончиках (ампулах). Для каждого флакончика сыворотки выделяется отдельная маркированная пипетка, которая после нанесения сыворотки на пластинку сразу же опускается в ту ампулу с сывороткой, из которой была взята. На плоскости, рядом с каплями стандартной сыворотки, палочкой (или уголком предметного стекла) наносятся капельки исследуе­мой крови; соотношение «сыворотка — кровь» должно быть 10:1. Ориентировочно капля стандартной сыворотки должна быть равна величине копеечной монеты, капелька крови — величине головки портняжной булавки (кровь для исследования может быть взята из пальца, вены, взвеси эритроцитов (со дна пробирки), из запаянной трубки контейнера с гемотрансфузионной средой.

Капля крови должна быть примерно в 10 раз меньше капли стандартной сыворотки (соотношение 1:10), с которой она смешивается сухой стеклянной палочкой (уголком предметного стекла). После размешивания капель в равномерно красный цвет пластинку покачивают, оставляют на 1 —2 мин в покое, а затем снова периодически покачивают. Не ранее чем через 3 мин в капли, в которых наступила агглютинация (невооружённым глазом видны «песчинки», «зёрнышки»), добавляют по 1 капле (0,05 мл) физиологического раствора NaCl. После внесения физиологического раствора ложная агглютинация исчезает, истинная — остается без изменения или усиливается. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10 — 30 секунд, наблюдение следует продолжать до истечения 5 минут, после чего делается заключение о группе крови.

Реакция гемагглютинации может быть положительной (наличие агглютинации) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Результаты в каплях с сыворотками двух разных серий одной и той же группы крови должны совпадать. Результаты определений могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций:

1) если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к группе 0(I);

2) если сыворотки групп 0αβ(I) и Вα(III) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аβ(II) — отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе А(II);

3) если сыворотки групп 0αβ(I) и Аβ(II) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вα(III) — отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе В(III);

4) если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, для исключения неспецифической агглютинации, необходимо провести дополнительное исследование с сывороткой (одной серии) AB0 (IV). Если реакция с этой сывороткой будет отрицательная, то исследуемая кровь действительно относится к группе AB(IV).

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток приведена в таблице:

Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток

Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.

Ошибки при определении групп крови системы АВО возникают в результате нарушения инструкции.

Основные причины ошибок:

■ нарушение порядка нанесения стандартных сыворо­ток, что может привести к неправильной трактовке полу­ченных результатов;

■ изменение активности или специфичности сыворо­ток вследствие того, что при нанесении их на планшет из флакончиков (ампул) пользуются одной пипет­кой или смешивают капли сыворотки и крови одной стеклянной палочкой (одним уголком предметного стекла);

■ снижение активности сывороток в результате наруше­ния режима хранения (необходима средняя температура хранения +4...+6 °С);

■ потеря специфичности вследствие инфицирования или повышение вязкости сывороток от высыхания при хранении их в открытых флакончиках (ампулах);

■ нарушение пропорции сыворотка — кровь (10:1);

■ исключение из методики определения групп крови физиологического раствора или стандартной сыворотки АВ (IV) группы;

■ преждевременный или, наоборот, поздний учет результатов определения групп крови (учет должен произ­водиться по истечении 5 мин с момента перемешивания капель).

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1842 | Нарушение авторских прав