АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Индукции мутаций под действием ультрафиолетового излучения

Прочитайте:
  1. А) обладает бактерицидным действием
  2. БРОСКИ С БОЛЕВЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ
  3. Взаимодействие рентгеновского излучения с веществом
  4. Виды и характер. ионизирующего излучения, исп-я в лучевой диагностике, ед. измерения, биолог. действие.
  5. Виды Мутаций
  6. ГИПОГЛИКЕМИЮ СВЯЗЫВАЮТ С ДЕЙСТВИЕМ ГОРМОНА
  7. ЕСТЕСТВЕННОГО ФОНА ИЗЛУЧЕНИЯ
  8. Закон электромагнитной индукции. Индуктивность. ЭДС самоиндукции. Энергия магнитного поля. Электрический контур.
  9. Запомните, что такое генетический груз, в чем заключаются ключевые моменты концепции генетического груза и разберитесь в основных причинах роста мутаций.

(УФИ). Воздействие УФИ индуцирует у бактерий, в частности Е. coli, предмутационные повреждения и широкий спектр мута­ций, включая замены оснований, образование делений и др.

В качестве источника УФИ используют бактерицидную лампу ВУФ-15, которую устанавливают на расстоянии 60 см от центра облучаемого объекта. Поскольку Е. coli обладает эффективными механизмами световой репарации УФ-поврсждений ДНК, то об­лучение желательно проводить в темноте или при красном свете. Предварительно определяют бактерицидную дозу УФ-облучения, на основании которой устанавливают оптимальную мутагенную дозу, равную 0,1... 1 % от числа выживших бактерий.

Для получения lac-мутантов Е. coli испытуемую культуру пред­варительно выращивают в питательном бульоне в течение 14...18 ч. При этом концентрация бактериальных клеток в 1 мл среды составляет примерно 2 ■ 108. Клетки осаждают центрифуги­рованием, ресуспендируют в 40 мл 0,1 М раствора MgSO4 и охлаж­дают во льду для прекращения деления клеток. Суспензию в объе­ме 50 мл помещают в стерильную чашку Петри и облучают в тече­ние 15... 150 с, после чего клетки осаждают центрифугированием, ресуспендируют в таком же объеме питательного бульона. Про­бирку с бульонной культурой инкубируют при 37 "С в течение 14...18ч. Затем из разведений 10~3...10~5 по 0,1мл высевают на плотную селективную питательную среду (среда Эндо) в чашки Петри и растирают шпателем.

Для выделения антибиотикорезистентных мутантов использу­ют штамм Е. coli В или К 12, который высевают после облучения на минимальный агар с определенной концентрацией антибиоти­ка. Например, ампициллин—10мкг/мл, левомицетин — 5мкг/мл, пенициллин — 100 мкг/мл.

На среде Эндо lac-мутанты Е. coli образуют бесцветные коло­нии. Клетки Е. coli, выросшие на среде с указанной концентраци­ей антибиотика, резистентны к нему. Параллельно ставят конт­рольные посевы.


Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 531 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)