АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Количественное определение лизоцима в сыворотке крови.

Лизо-цим — гидролитический фермент, расщепляющий высокомолеку­лярные полисахариды бактерий (пептидогликан), находится в тка­нях, секретах, экскретах (за исключением пота и мочи), действуя бактерицидно на многие бактерии. Присутствие и активность ли-

зоцима определяют по его способности вызывать лизис бактерии Micrococcus lysodeicticus.

Готовят 1%-й агаровый гель (Дифко) на 1/15 М фосфатно-со-левом буферном растворе (ФСБР). В расплавленный агар при тем­пературе 6О...7О°С вносят ацетоновый порошок биомассы М. lysodeicticus из расчета 10 мг на 100 мл геля. Компоненты переме­шивают и разливают в чашки Петри (толщина слоя 4 мм). В зас­тывшем агаре делают лунки диаметром 5 мм.

Параллельно определяют активность стандартного лизоцима, кристаллизованного из яичного белка. Для этого лизоцим разво­дят в 1/15 М ФСБР, чтобы получить разведения с концентрацией 0,5, 1, 3, 5, 10, 20, 40 и 70 мг/мл. Затем по 0,05 мл каждого разведе­ния лизоцима вносят в лунки. Чашки Петри выдерживают 48 ч во влажной камере при 37 "С и измеряют диаметр зоны лизиса М. lysodeicticus вокруг лунок.

Далее на основании полученных данных строят калибровочную кривую, откладывая на осях координат значения концентрации лизоцима и диаметра зоны лизиса. Сыворотку крови разводят в ФСБР в соотношении 1: 5, вносят по 0,03 мл в лунки и далее по­ступают, как при определении активности стандартного лизоци­ма. Измерив диаметр зоны лизиса, по калибровочной кривой вы­числяют содержание лизоцима в исследуемой пробе.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 769 | Нарушение авторских прав