АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Реакция преципитации (РП).

Основана на том, что при соедине­нии антигена (преципитиногена) со специфическими антителами (преципитинами), находящимися в соответствующей сыворотке, образуется осадок — преципитат. В РП используют растворимые антигены, получаемые путем экстракции из разрушенных бакте­рий или извлеченные из тканей. Преципитиногены резистентны к воздействию высокой температуры (кипячению, автоклавирова-нию) и гниению. Постановка РП может осуществляться в пробир­ках в жидкой среде и в чашках Петри (или на предметном стекле) в плотной агаровой среде (диффузионная преципитация).

Для диагностики сибирской язвы в ветеринарии наиболее рас­пространена реакция кольцепреципитации по Асколи (1910). Для постановки реакции кольцепрецилитации не нужна специфичес­кая преципитирующая сыворотка биофабричного производства. Антигеном в РП служит фильтрат живой или убитой нагреванием микробной культуры или экстракт из исследуемого материала. Экстрагирование производят либо кипячением, либо длительным (18...24 ч) воздействием физиологического раствора NaCl при комнатной температуре. Экстракт фильтруют через асбестовую вату до полной прозрачности.

В узкие пробирки Уленгута диаметром 4 мм пастеровской пи­петкой вносят 0,3...0,4 мл сыворотки. Одновременно ставят в 6 пробирках контрольные реакции. Антиген (другой пи­петкой) осторожно добавляют (наслаивают) по стенке пробирки, не касаясь пипеткой сыворотки. Пробирку держат вертикально. Если же в пробирку сначала внести антиген, то сыворотку нужно подслаивать под антиген. Для того чтобы предотвратить смешение компонентов, пипетку с сывороткой опускают на дно пробирки и осторожно выпускают сыворотку в том же объеме, что и антиген (сыворотка имеет большую плотность). В том и другом случае при положительном результате на границе двух жидкостей почти сразу или в течение 1...2мин образуется резко ограниченное беловатое кольцо или диск — преципитат.

Реакция диффузионной преципитации. Осуществляют путем наслаивания антигена на поверхность агара, содержащего специфическую сыворотку, или путем внесения сы­воротки в специальные лунки в агаре, содержащем антиген (по Аухтерлони, 1948) (рис. 51).

Широкое использование получил метод диффузионной преци­питации. В застывшем в чашках Петри или на предметном стек­ле агаровом геле делают углубления (луночки) на некотором расстоянии друг от друга. В одну из них вносят специфическую сыворотку, в другие, расположенные вокруг первой, — разные пробы антигена (исследуемый материал). Оба компонента в лу­ночках (сыворотка и исследуемый материал) диффундируют во встречном направлении в слое агарового геля. На месте встречи специфических антиген — антитело выпадает сероватый преци­питат.

Рнс. 51. P1I в геле по Аухтерлони:

/ — лунки со сравниваемыми антигена­ми (периферические); 2— полосы пре­ципитации; 5 —пластинка агарового геля; 4 — лунка с иммунной сывороткой

Полосы преципитации образуются только в зоне эквивалентности, т. е. там, где все антитела связаны с антигеном. (Если в жидкой среде соединить эквивален­тные количества реагентов,

то в надосадочной жидкости после формирования преципитата не будет свободных антигена и антител.)

При изучении в РДП различных антигенов возможны три ва­рианта результата (рис. 52...54).

1. Реакция идентичности: слияние линий преципитации, относящихся к двум соседним антигенам (у сравниваемых антигенов гомологичные детерминанты — антигены оценивают как идентич­
ные).

2. Реакция не идентичности: пересечение линий преципитации (у сравниваемых антигенов гомологичные антигенные детерми­нанты отсутствуют).

3. Реакция неполной идентичности: неполное пересечение лиий преципитации с формированием так называемой «шпоры» (у одного из антигенов помимо гомологичных есть и специфические детерминанты, которые второй антиген в составе своей молекулы не несет).

С помощью реакции диффузионной преципитации можно об­наруживать антитела в сыворотке крови и определять их титр. В этом случае в центральную лунку вносят известный растворимый антиген (бактериальный, вирусный), а в периферические — раз­личные разведения исследуемой сыворотки крови {рис. 55).

Для того чтобы полосы преципитации были более выраженны­ми, пластины обрабатывают солями кадмия: пластины с готовым гелем отмывают в физиологическом растворе и заливают 0,65%-м раствором сульфата кадмия. В результате через несколько минут полосы преципитации становятся ярче в несколько раз.

Для постановки РП среда должна быть нейтральной. В кислой среде образуется неспецифический осадок; щелочная среда тор­мозит проявление специфической РП.

Реакция флокуляции. Используют для выявления токсинов и определения активности антитоксических сывороток. В пробир­ки, содержащие по 10 мл определенного токсина, добавляют убы­вающие количества специфической токсину антитоксической сы­воротки (1,0; 0,9; 0,8... 0,3 и т.д.), полученной от гипер-иммунизированного живот­ного (например, лошади). Пробирки встряхивают, ос­тавляют при комнатной температуре, а через неко­торое время в них наблюда­ют опалесценцию, перехо-

Рис. 55. РДП. Обнаружение анти­тел и исследуемой сыворотке крови: С — разведения исследуемой сыворотки крови (1: 2...1: 256); АГ— известный микробный антиген; ЛП— линия пре­ципитации

дящую в четко выраженное помутнение, затем образуются хлопья и выпадает осадок. Это инициальная флокуляция, появляющаяся первоначально в отдельных пробирках, а затем и в соседних с ними, служит показателем эквивалентности антигена (токсина) и антитела (антитоксина), при котором происходит полное взаимо­связывание антигена и антитела (токсина и антитоксина), полная нейтрализация токсина. В пробирках, где нет полного насыще­ния, флокуляция наступает позднее.

Реакция нейтрализации (РН). Используют только для определе­ния видовой принадлежности бактерийных токсинов в исследуе­мом материале и для установления активности антитоксических сывороток. В пробирки с равным количеством антигена (в 1 мл, например, 1000 смертельных доз столбнячного токсина) добавля­ют равный объем убывающего количества (убывающей концент­рации) специфической гипериммунной антитоксической сыво­ротки; пробирки помещают в термостат на 1...2 ч. Затем из каждой пробирки смесь токсин—антитоксин вводят лабораторным живот­ным (по два животных на каждую дозу антитоксина). Животные, которым ввели смесь, где произошла нейтрализация токсина, ос­таются живыми. Наименьшее количество сыворотки, нейтрализо­вавшее токсин, принимается за единицу активности антитокси­ческой сыворотки (АЕ).

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1420 | Нарушение авторских прав