АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема 15. БРУЦЕЛЛЫ И ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУЛЯРЕМИИ

Прочитайте:
  1. I. Возбудитель ботулизма.
  2. II. Возбудитель трихомоноза
  3. Возбудитель
  4. Возбудитель бешенства
  5. Возбудитель ботулизма
  6. Возбудитель ботулизма.
  7. Возбудитель бруцеллёза
  8. Возбудитель гонореи
  9. Возбудитель гонореи.
  10. Возбудитель дифтерии

Возбудитель бруцеллеза. Впервые был открыт и описан Брюсом

(1886), в честь которого этот микроорганизм получил родовое на­звание Brucella, а семейство — Brucellaceae. В патологии животных имеют значение Brucella melitensis, В. abortus, В. suis. Названные виды бруцелл имеют культурально-морфологическое сходство, общие антигены. При гибели, разрушении бруцелл освобождают­ся эндотоксины. Бруцеллы являются возбудителями инфекцион­ного (контагиозного), хронически протекающего заболевания у животных и человека — бруцеллеза. Болезнь проявляется абортом, а также возможно воспаление суставов, орхиты. Чаще заболевание протекает бессимптомно. Особой патогенностью для человека (и мелкого рогатого скота) обладает В. melitensis. Основные методы диагностики бруцеллеза: бактериологический (особенно при на­личии абортов), серологический и аллергический.

Бактериологическое исследование. При жизни животного посылают абортированный плод (или перевя­занный с двух сторон желудок плода с содержимым), истечение из родовых путей, плодные оболочки или кусочек плаценты, около­плодную жидкость, молоко. Посмертно (после убоя) в лаборато­рию направляют трубчатую кость (костный мозг), кусочки пече­ни, почки, селезенки, молочной железы, лимфатические узлы, матку. По мере необходимости отправляют также пробы воды, по­чвы, подстилки. При взятии материала от животных необходимо соблюдать правила асептики и личной гигиены. Кусочки тканей можно консервировать в 30 %-м глицерине.

Микроскопия. Препараты из присланного материала фиксируют; часть из них окрашивают по Граму, часть — специ­альным методом (Козловского, Шуляка и др.). По методу Козлов­ского препараты, фиксированные над пламенем горелки, окраши­вают свежеприготовленным горячим 2%-м раствором сафранина (если раствор остыл, его наливают на препарат и подогревают снизу до появления паров в течение 3...5 мин. Затем краску слива­ют и докрашивают 1%-м водным раствором малахитовой (или бриллиантовой) зелени (около 1 мин). По методу Шуляка фикси­рованный мазок окрашивают 2 мин карбол-фуксином (1: 5), слег­ка промывают и докрашивают 2%-м водным раствором метилено-вой сини — 3...5 мин.

Морфология. Бруцеллы — мелкие палочковидной (кок-коподобной) формы бактерии, 0,6...1,5мкм длиной, 0,3...0,5 мкм в диаметре. Споры не образуют. Неподвижны. По Граму красятся отрицательно, по методу Козловского (или Шуляка) — в красный цвет; остальные микробы — в зеленый (или синий) цвет. В препа­рате располагаются изолированно или небольшими скоплениями.

Выделение чистой культуры. Культу-ральные свойства. Из различных участков патологичес­кого материала пипеткой производят посев на жидкие и плотные питательные среды: глюкозо-печеночные, сывороточные, на кар­тофельные среды с добавлением глицерина, глюкозы; рН среды 7,0...7,2. В первичных посевах рост бруцелл проявляется медленно при длительном инкубировании в термостате при 37 "С. Учитывая, что одни виды бруцелл аэробы, а другие — микроаэрофилы (В.abortus), для получения первичных культур посевы помещают в термостат в обычных условиях, другую часть — сначала в эксика­тор с повышенным содержанием диоксида углерода (до 10...20 %), а затем уже в термостат. Рост появляется спустя 30...40 сут, самое раннее —на 7... 10-е сутки. По мере адаптации к искусственным средам бруцеллы растут более быстро (1...2сут).

На МППА рост проявляется мелкими прозрачными колониями с ровными краями, с голубоватым оттенком, которые впослед­ствии сливаются и образуют сплошной мутный сероватый налет. Колонии — S- и R-формы. На картофеле нередко колонии пиг­ментированы (коричневого цвета). Типичные колонии пересева­ют па специальные питательные среды. Полученную чистую куль­туру проверяют на биохимическую активность, а также проводят серологическую идентификацию посредством РА на стекле со специфической сывороткой в разведении 1: 2...1: 50.

В МПБ рост вначале в виде равномерного помутнения, в дальнейшем образуются пристеночное кольцо и небольшой осадок. Для получения чистой культуры бруцелл из загрязнен­ного материала следует сделать посев на селективную среду Козловского (МППА с глюкозой, генцианвиолетом и малахито­вой зеленью).

Биохимические свойства выражены слабо. Же­латину и свернутую сыворотку бруцеллы не разжижают, индол не образуют. Сероводород и аммиак образуют лишь в зависимости от вида и штамма. В. suis обильно продуцирует сероводород, а В. abortus— менее интенсивно. Молоко не свертывают.

Биопроба осуществляется заражением морских свинок, которых предварительно подвергают серологическому контролю. В случае отрицательного результата животным инъецируют под­кожно 1...2мл суспензии из тканей присланного материала — свинка не погибает. Через 8...10 сут у зараженной свинки берут кровь (в случае отрицательного или сомнительного результата кровь берут повторно через 20...30 сут), исследуют в РА в разве­дении 1: 5...1: 10 (до 1: 80). Положительный результат РА в раз­ведении 1: 6... 1: 10 указывает на инфицированность морской свинки. По истечении 30...45 сут после заражения свинку убива­ют и исследуют бактериологически. При отрицательном резуль­тате РА морских свинок убивают спустя более длительный пери­од (6...8 нед) и бактериологически исследуют их ткани и органы. Обязательно делают посев из паховых, подчелюстных, шейных, брыжеечных лимфоузлов, печени, селезенки, почек, костного мозга.

Методы дифференциации видов бруцелл. Для дифференциации используют чистые культуры бруцелл, об­разующие S-форму колоний.

Проба с трипафлавином. Бактериологической петлей берут мик­робную массу 48-часовой агаровой культуры и эмульгируют на предметном стекле в капле трипафлавина, разведенного физиоло­гическим раствором NaCl 1: 500. Если культура диссоциирована, быстро наступает агглютинация с образованием хлопьев. Недис-социированная культура при эмульгировании в капле образует го­могенное помутнение; хлопья не выпадают.

Окраска колоний кристаллвиолетом. В культуру, выросшую в чашке Петри, пастеровской пипеткой вносят краску в разведении 1: 2000, приготовленную ex tempore. Через 5 мин после отсасыва­ния краски из чашки колонии просматривают под лупой. Диссо­циированные R-формы бруцелл окрашиваются от темно-фиоле­тового до светло-синего цвета, S-формы — в светло-желтый или светло-зеленый цвет.

Реакция термоагглютинации. В пробирке 2...3-миллиардную взвесь бруцелл (смыв с агаровой культуры) прогревают в водяной бане при 90 °С в течение 45 мин и оставляют при комнатной тем­пературе. Результат учитывают через 30 мин, затем через 1 ч и окончательно через 24 ч. В диссоциированной культуре четко за­метна агглютинация. Если колонии типичны (S-формы), их пере­севают в пробирки на скошенный МПА. Выросшую культуру идентифицируют по следующим показателям: 1) отношение к ди­оксиду углерода — В. abortus для своего роста нуждается в повы­шенном содержании СО2 (до 10 %.), Br. melitensis и В. suis хорошо растут в обычных условиях; 2) образование сероводорода — наибо­лее интенсивно и более продолжительное время проявляется у В. suis, в меньшей степени — у В. abortus. В. melitensis, как правило, не продуцирует сероводород.

Бактериостатический метод. Дифференциация видов бруцелл основана на отношении к растворам красок, добав­ленных к питательным средам.

В пробирки с красками (каждой в отдельности) — фуксин (1:25 000), тионин (1:50 000...!: 100 000), добавленными к МППА,— высевают чистую культуру бруцелл. На среде с фукси­ном не растет В. suis, на среде с тионином не растет В. abortus. В. melitensis хорошо растет в присутствии этих красок.

Серологическая диагностика. В лабораторию направляют сыворотку крови. Последнюю исследуют с бруцеллез­ным антигеном методами РА и РСК. В производственных услови­ях в настоящее время используют методику исследования сыворо­ток по методу Кумбса. Все шире используют метод флуоресциру­ющих антител.

Аллергическая диагностика. В хозяйствах осно­вана на применении аллергенов — бруцеллизата, бруцеллогидро-лизата, бруцеллина. Последние в дозе 0,2 мл вводят внутрикожно и через 24...48 ч учитывают местную реакцию.

Биопрепараты, Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82: отличается слабым серо­логическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций диф­ференцировать вакцинированных животных.

Высокоэффективна новая вакцина 75/79 АВ.

Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК и РДСК из культу­ры вакцинного штамма № 19.

Антиген для кольцевой реакции с молоком: микробную массу культуры В. abortus (штамм № 19) готовят, как для единого бру­целлезного антигена, инактивируют, устанавливают необходимую концентрацию микробных клеток, протравливают сульфатом же­леза, окрашивают в синий цвет гематоксилином, контролируют на стерильность, специфичность и активность.

Роз-бенгал антиген представляет собой суспензию бруцелл в буферном растворе (рН 3,6), инактивированных нагреванием и фенолом, окрашенных бенгальским розовым в малиново-розовый цвет.

Флуоресцирующая бруцеллезная сыворотка: готовят из пози­тивной бруцеллезной сыворотки, глобулины которой метят флуо-ресцеинизотиоцианатом.

Позитивная бруцеллезная сыворотка: получают гипериммуни­зацией животных-продуцентов. Используют для контроля при по­становке серологических реакций (РА, РСК и др.), а также серо­логической идентификации бруцелл.

Диагностический аллерген бруцеллин представляет собой сте­рильную, прозрачную, желтоватого цвета жидкость, содержащую продукты жизнедеятельности бруцелл и вещества, извлеченные из них

Возбудитель туляремии (Francisella tularensis). Открыт Мак-Коем и Чепиным (1912) в районе Туляре (Калифорния). Подробно изу­чен Френсисом (1921), в честь которого дано родовое название возбудителю. Относится к семейству Brucellaceae, роду Francisella. F. tularensis вызывает острое инфекционное заболевание животных и человека. Туляремия характеризуется септическим течением, поражением лимфатических узлов (набухание, творожистое пере­рождение), лихорадкой.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию при жизни животного посылают пунктат из увеличенных (мягких) лимфоузлов, абортированный плод (или органы плода), мочу, кал; после гибели животного — печень, почку, селезенку, увеличенные лимфоузлы от крупных животных. Трупы грызунов и других мелких животных направляют целиком.

Следует учитывать, что обнаружить возбудитель туляремии в препаратах-отпечатках возможно лишь при обильном обсемене­нии исследуемого материала.

Микроскопия. F. tularensis — мелкая коккоподооная бак­терия в мазках из культуры и тонкая палочка — в препаратах из органов. Величина 0,3 мкм. Споры не образует, неподвижная. В макроорганизме образует нежную капсулу. Грамотрицательна. По Романовскому — Гимза окрашивается в розово-голубой цвет, час­то биполярно.

Культуральные свойства. Аэроб. Оптимальная температура роста 37 °С, рН среды 6,7...7,4. На средах с кровью через 1...2сут появляются мелкие колонии беловатого цвета с го­лубоватым оттенком, круглые, выпуклые, с ровными краями, гладкие, блестящие. На жидких средах растет плохо. При культи­вировании следует учитывать, что для колоний типична гладкая S-форма, обладающая Vi- и О-антигенами, вирулентная и иммуно-генная. R-форма F. tularensis содержит лишь О-антиген. Авирулен-тна. При серологической диагностике учитывают наличие в бакте­рийной клетке антигенов, общих с бруцеллами. Для культивирования F. tularensis применяют специальные питатель­ные среды, такие, как желточная среда Мак-Коя, шоколадный агар Фрэнсиса, кровяная среда Емельяновой и др.

Среда Мак-Коя: на 60 частей куриных желтков добавляют 40 ча­стей стерильного физиологического раствора (дистиллированную воду для физраствора подщелачивают до рН 7,0...7,2). Для сверты­вания среду выдерживают при 80 °С 1 ч. Посев на среду произво­дят методом отпечатков: кусочек органа обжигают, разрезают сте­рильными ножницами и поверхность разреза прикладывают к по­верхности среды. Рост наблюдают уже через 18...24ч, максималь­ный рост —через 2...3сут. При слабом посеве отмечают редко расположенные колонии на З...6-е сутки.

Среда Фрэнсиса: к МПА с 1 % пептона и 0,5 % NaCl <pH 7,3) добавляют 0,1 % цистина и 1 % глюкозы. Кипятят несколько ми­нут, затем охлаждают до 50 °С и добавляют 10 % дефибринирован-ной стерильно полученной крови кролика.

Среда Емельяновой: в рыбно-дрожжевой агар вносят ОД % цис­тина и 1 % глюкозы. Затем агар расплавляют, охлаждают до 45 "С, добавляют 10 % дефибрированной крови и разливают по чашкам Петри или в пробирки. Данная среда более чувствительна, при­годна для получения изолированных колоний возбудителя туляре­мии.

Биохимические свойства. Выражены слабо, но на специальных питательных средах с пониженным содержанием белка F. tularensis ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, маннозу, глицерин, декстрин. Обладает проте-олитическими свойствами — расщепляет белки с образованием сероводорода. Индол не образует.

Биопроба. Белых мышей и морских свинок заражают сус­пензией растертых тканей патологического материала подкожно, в брюшную полость (в дозе 0,5 мл) или втиранием в кожу. Белые мыши погибают на 3...4-е сутки (иногда на 8...12-е сутки), морс­кие свинки — через 4...5 сут. Если материал инфицирован незна­чительно, гибель возможна на 8...15-е сутки. При вскрытии у павших лабораторных животных отмечают некротические очаги в легких, селезенке, печени, лимфатических узлах; их исследуют бактериологически.

Выделенную культуру идентифицируют пробирочным методом РА. В качестве антигена используют двухсуточную культуру, выра­щенную на среде Мак-Коя. Микробную массу снимают петлей (смывать нельзя), суспендируют в физиологическом растворе, дово­дят концентрацию до 5 млрд микробных клеток в 1 мл по стандарту для туляремийного микроба. Микробную взвесь в дозе 0,5 мл вносят в пробирки со специфической сывороткой в разных разведениях (не менее чем до 1:2000), встряхивают, помещают на 2 ч в термостат, за­тем оставляют при комнатной температуре на 20...22 ч. Положитель­ным результатом считают четко выраженную агглютинацию при полной прозрачности жидкости над агглютинатом.

Серологическая диагностика. Применяют РСК, как очень чувствительную, и РП для быстрой диагностики заболевания грызунов и пушных зверей. Антигеном служит экст­ракт из измельченных тканей поступившего в лабораторию трупа.


Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1080 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.006 сек.)