АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Возбудитель туберкулеза.

Прочитайте:
  1. I. Возбудитель ботулизма.
  2. II. Возбудитель трихомоноза
  3. Возбудитель
  4. Возбудитель бешенства
  5. Возбудитель ботулизма
  6. Возбудитель ботулизма.
  7. Возбудитель бруцеллёза
  8. Возбудитель гонореи
  9. Возбудитель гонореи.
  10. Возбудитель дифтерии

Открыт Кохом (1882), принадлежит к порядку Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae, роду Mycobacterium. Микобактерии отличаются ветвистостью, располо­жением в виде буквы V и разнообразием видов, в том числе пато­генных (рис. 66).

Наибольшее значение в патологии сельскохозяйственных жи­вотных и человека имеют следующие виды микобактерии; М. tuberculosis — возбудитель туберкулеза человека, М. bovis — возбу­дитель туберкулеза крупного рогатого скота, М. avium — возбуди­тель туберкулеза птиц.

Туберкулез характеризуется образованием в различных тканях и органах специфических очагов — бугорков (туберкул), по мере

Рис. 66. Формы мхкобактернй

 

развития процесса подвергающихся творожистому перерождению. При разных формах течения туберкулеза отмечают повышение температуры, увеличение лимфатических узлов, прогрессирующее истощение организма, а при поражении органов дыхания —ка­шель.

Бактериологический диагноз. Основан на мик­роскопии мазков-препаратов из патологического материала, вы­делении чистой культуры возбудителя туберкулеза и заражении лабораторных животных. Исходя из того что туберкулез протекает преимущественно в скрытой форме (латентно), для своевремен­ного выявления больных применяют аллергический метод диагно­стики при помощи аллергена туберкулина.

Для бактериологического анализа направляют при жизни жи­вотного истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко (особен­но при увеличении надвыменных лимфоузлов) — не менее 100 мл, фекалий — 30...50, реже мочу — 200 мл. Посмертно или после убоя отправляют кусочки органов с изменениями и бронхиальные, заг­лоточные, средостенные, предлопаточные, надвыменные лимфо­узлы.

При взятии патологического материала необходимо соблюдать правила асептики и профилактические меры, технику безопаснос­ти. Материал в лабораторию лучше доставлять свежим. Если нет такой возможности, то лимфоузлы, кусочки органов консервиру­ют в 30...40 %-м водном растворе глицерина. Обсемененность ис­следуемого материала микобактериями туберкулеза может быть незначительной. Для большей достоверности результатов иссле­дования применяют специальные методы обработки и обогаще­ния, чтобы повысить концентрацию возбудителя в пробах.

Бронхиальную слизь (мокроту) собирают в пробирки с 6%-м раствором серной кислоты, закрывают резиновой пробкой, про­мывают 5...6 мин встряхиванием, центрифугируют, кислоту отса­сывают, к осадку добавляют физраствор, вновь встряхивают и центрифугируют. Так промывают 2...3 раза. Промытый осадок вы­севают на питательные среды и готовят мазки.

Молоко центрифугируют. Осадок обрабатывают также раство­ром серной кислоты, промывают физраствором, центрифугируют. Из осадка готовят препараты-мазки и производят посев на пита­тельные среды.

Масло (2...4 г) вносят в стерильную пробирку, заливают горя­чей водой, закрывают резиновой пробкой, встряхивают 5...10 мин, переворачивают пробирку вверх дном, ставят в штатив и оставля­ют в прохладном месте. Когда масло застынет, осторожно приотк­рывают пробку, жидкость выливают в центрифужные пробирки и далее исследуют как молоко.

Пораженные ткани нарезают мелкими кусочками и растирают в стерильной ступке с 6%-й серной кислотой в соотношении 1: 4, фильтруют через марлю и центрифугируют. Из осадка готовят мазки и производят посевы на питательные среды. Фекалии (50 г) растирают в стерильной ступке с 18 %-м раствором серной кисло­ты, фильтруют через марлю и центрифугируют, исследуют осадок, как в предыдущих случаях.

Содержимое туберкул дополнительно исследуют микроскопи-рованием препаратов, приготовленных из растертых кусочков тво­рожистой массы очажка между двумя предметными стеклами.

Возбудитель туберкулеза относится к группе кислого-, спирто-шелочеустойчивых бактерий, что обусловлено наличием стеари­новых кислот (миколовой, фтионовой) и Других воскоподобных веществ в оболочке микробной клетки. Эти вещества придают микробной клетке гидрофобность, то есть способность отталки­вать воду и водные растворы красителей, кислот и щелочей. В свя­зи с этим бактерии туберкулеза трудно воспринимают краску. Для окрашивания этой группы бактерий применяют специальные ме­тоды, среди которых наиболее распространенным является метод Циля — Нильсена, при котором микобактерии окрашиваются в розово-красный цвет (цв. рис. XII). Грамположительны. Для мик­роскопического исследования патологического материала реко­мендован также люминесцентный метод.

Возбудитель туберкулеза палочковидной формы, длиной 1,5...5мкм и шириной 0,5 мкм. М. tuberculosis — тонкая слегка изогнутая палочка, М. bovis — короткая и толстая, М. avium — мельче остальных видов, обладает полиморфизмом. Микобакте­рии туберкулеза неподвижные, не образуют капсулу и спору. В мазках из исследуемого материала располагаются одиночно и в виде небольших скоплений. В мазках из культур помимо одиноч­ных бактерий встречаются длинные нити с разветвлениями. Часто проявляются неравномерность в окрашивании, наличие в цитоп­лазме зернистости (грамположительные некислотоустойчивые «зерна Муха»), Микобактерии — аэробы. Растут только на специ­альных средах с добавлением глицерина.

Выделение чистой культуры. Для выделения возбудителя из патологического материала используют электив­ные (избирательные) среды — яично-крахмальные, картофельные с глицерином и краской (малахитовая зелень) для задержки роста посторонних микроорганизмов.

Для культивирования используют также синтетические среды, например Финна, Дорсе и Моделя.

Среда Дорсе представляет собой тщательно растертое яйцо с 10 мл раствора Рингера. Затем эту смесь взбалтывают в сосуде с бусами и разливают по пробиркам, стерилизуют дробно: 3 сут при 75 "С по 1 ч.

Среда Моделя: двухосновный фосфат калия — 5 г, цитрат аммо­ния — 10 г, сульфат магния — 0,5 г, сульфат железа — 0,05 г, глице­рин — 50 мл, дистиллированная вода — 1 л, рН среды 7,2. Стери­лизуют 20 мин при 115°С.

Культивировать можно и на обычном картофеле, пропитанном 3...4 %-м глицерином, в глицериновом МПБ и на глицериновом МПА. Срок инкубации при 37 °С от 3...4 нед до 2...3 мес. Рост учи­тывают каждые 5...7сут. Отдельные виды микобактерий могут проявить рост через 2...4 нед.

Культуральные свойства. М. tuberculosis в глице­риновом бульоне на поверхности среды растут в виде толстой складчатой пленки с широким пристеночным кольцом. На плот­ных средах рост обильный, колонии сухие бородавчатые или сморщенные, иногда в виде узелков цвета слоновой кости (цв. рис. XIII). М. bovis в бульоне образует пленку нежную, иногда сетчатую, не покрывающую всей поверхности среды. На плотных средах рост скудный, колонии сухие, мелкие, зернистые, серова­то-белого цвета. М. avium в жидких средах образует сначала сухую, затем ослизняющуюся пленку по всей поверхности среды. На плотных средах влажный и слизистый налет. Колонии серовато-белые или желтоватого цвета с пуговицеобразным круглым возвы­шением, иногда кратерообразным углублением. Растет быстрее, чем остальные виды микобактерий.

При исследовании масла следует учитывать возможность нали­чия кислотоустойчивых сапрофитов (М. phlei и др.), которые рас­тут на питательных средах очень быстро (4...7 сут) по сравнению с патогенными микобактериями.

Чистую культуру микобактерий определяют на видовую при­надлежность. Одним из распространенных методов дифференциа­ции является культивирование в глицериновом бульоне с 5 % жел­чи. Каждый вид микобактерий растет в присутствии желчи соот­ветствующего вида животного: М. avium —в присутствии только птичьей желчи, М. bovis — с добавлением желчи крупного рогатого скота. Наличие миколовой кислоты в клетках способствует тому, что патогенные штаммы растут на питательных средах в виде ко­сичек, хорд.

Биопробу используют для определения патогенности и диффе­ренциации видов бактерий туберкулеза. Заражают морских свинок, кроликов и при необходимости кур, предварительно проверенных аллергическим методом для исключения спонтанного туберкулеза. Для заражения применяют выделенную культуру или присланный в лабораторию материал. Последний предварительно обрабатывают по Гону серной кислотой, как указывалось выше, растирая в сте­рильной ступке. Затем к осадку после центрифугирования добавля­ют 15%-й раствор гидрокарбоната натрия (двууглекислой соды), ос­тавляют на 10...15 мин и вновь центрифугируют 5 мин. Образовав­шийся осадок дважды промывают стерильным физиологическим раствором NaCl с последующим центрифугированием, а затем оса­док вновь эмульгируют в физиологическом растворе, отстаивают 5... 10 мин. Надосадочную жидкость вводят в дозе 1...2мл: морским свинкам в паховую область, кроликам — внутривенно.

У морских свинок в положительных случаях через 2...3нед на месте введения образуется уплотнение, затем язва с одновремен­ным увеличением регионарных лимфоузлов. Далее этим свинкам через 2...3 нед подкожно вводят туберкулин, что приводит к бурной генерализации процесса и гибели животных. При вскрытии из ти­пичных туберкулов готовят мазки и делают посевы. М. bovis вызы­вает генерализованный процесс туберкулеза у кроликов и морских свинок. М. tuberculosis патогенны лишь для морских свинок, вызы­вая заболевание в период от 3 нед до 3 мес после заражения. М. avium, как правило, обусловливает у кроликов септический процесс без образования специфических бугорков и приводит к быстрой ги­бели животных (особенно при внутривенном заражении).

Дифференциация. Для дифференциации отдельных видов микобактерий лучше заражать животных суспензией выра­щенных культур. Если у выделенных культур слабая вирулент­ность и атипичный рост, то микобактерий необходимо дифферен­цировать от кислотоустойчивых сапрофитов. Для этого использу­ют следующие тесты:

1. Определение каталазной активности. В пробирку с вырос­
шей культурой на яичной среде вносят 50%-й раствор пергидро­
ля, чтобы вся поверхность среды с культурой была покрыта. С
момента появления пузырьков газа учитывают результат — стол­
бик пены измеряют в миллиметрах (мм). Каталазной активнос­
тью обладают все кислотоустойчивые бактерии, но у сапрофитов
она интенсивнее.

2. Определение лекарственной устойчивости. Осуществляют с
культурами, выращенными на питательных средах с добавлением
различных концентраций туберкулостатических препаратов
(стрептомицин, ПАСК и др.). Вирулентные штаммы М.
tuberculosis, M. bovis,
как правило, чувствительны к действию этих
препаратов. Между тем атипичные штаммы, кислотоустойчивые
сапрофиты и М. avium обладают устойчивостью в отношении ан­
титуберкулезных лечебных препаратов, особенно к фтивазиду и
ПАСК (парааминосалициловая кислота).

Аллергический метод используют в хозяйстве как метод массо­вой диагностики скрытых форм туберкулезного процесса. С этой целью применяют специфические препараты — туберкулин для крупного рогатого скота и отдельно для птиц.

Возбудитель паратуберкулезвого энтерита крупного рогатого ско­та (Mycobacterium paratubercutosis). Вызывает заболевание преиму­щественно у крупного рогатого скота, реже у овец, верблюдов и очень редко у коз и оленей. Паратуберкулез — хроническая ин­фекционная болезнь, характеризующаяся образованием отечно-воспалительных складок слизистого и подслизистого слоя пора­женного участка кишечной стенки под действием локализованно­го здесь возбудителя. Характерные клинические признаки болез­ни — профузный понос и прогрессирующее истощение.

Лабораторная диагностика. При жизни живот­ного посылают фекалии с комочками слизи и примесью крови, со-скобы со слизистой оболочки прямой кишки; посмертно (или при убое) исследуют пораженные участки кишечника, отрезок под­вздошной кишки, перевязанный с двух сторон, мезентериальные лимфатические узлы. Материал берут с соблюдением правил асеп­тики, консервируют в 30%-м растворе глицерина. Для гистологи­ческого исследования консервируют в 10%-м растворе формалина.

Бактериологический анализ. Включает в себя микроскопию мазков из патологического материала и выделение чистой культуры возбудителя паратуберкулеза. Основным ориен­тиром служит результат микроскопирования препаратов, так как выделение чистой культуры возбудителя сопряжено с большими трудностями. Биологическую пробу на паратуберкулез не ставят, т. к. лабораторные животные не восприимчивы. Можно использо­вать телят.

Подготовка материала. Учитывая загрязненность материала посторонней микрофлорой, его предварительно обрабатывают с целью очистки и концентрации возбудителя, как и при диагности­ке туберкулеза, а также применяют способы Венота и Моро или метод флотации.

Метод Венота и Моро: 2...4 г фекалий растирают в стерильной ступке, добавляют 25%-й раствор NaCl до жидкой консистенции и фильтруют через двойной слой марли. Фильтрат сливают в цент­рифужные пробирки, добавляют по 1 мл петролейного эфира (можно бензин или лигроин), взбалтывают, центрифугируют 15...20 мин при 3000 мин-'. Мазки готовят из нижней части надо-садочного слоя жидкости.

Микроскопия. M.paratuberculosis— мелкая палочка дли­ной 0,5... 1,5 мкм и шириной 0,2...0,5 мкм, неподвижная, споры и капсулы не образует, кислотоустойчивая, грамположительная. В препаратах из патологического материала располагается кучками, гнездами, редко одиночно или по 2...4 клетки. Отмечается поли-морфность: палочки могут иметь расширение, приобретая конту­ры бутылки, ручной гранаты, бесструктурных глыбок, мелких кок­ков. В мазках из культуры палочки длиннее, стройнее, скучен­ность меньшая, в некоторых видна зернистость.

В связи с тем что выделение возбудителя паратуберкулеза с фе­калиями происходит периодически, при сомнительном или отри­цательном результате микроскопии исследование повторяют.

Кроме обычной световой используют люминесцентную микро­скопию препаратов-отпечатков из патологического материала или полученной чистой культуры, используя специфические люми-несцирующие сыворотки.

Выделение чистой культуры. Осуществляют по­севом на специальные питательные среды, так как на обычных средах возбудитель паратуберкулеза не растет. Активный рост наблюдают при добавлении к питательным средам вытяжки из уби­тых бактерий туберкулеза или кислотоустойчивых сапрофитов. М. phlei выращивают на среде Данкинса: в 4%-м глицериновом бульо­не растирают 10 мл глицерина и 10 мл печеночного экстракта, ки­пятят, добавляют три свежих яйца, хорошо перемешивают, вносят спиртовой раствор генцианвиолета (2,5 % к общему объему сре­ды), фильтруют, разливают в пробирки, скашивают и стерилизуют в аппарате для свертывания сывороток дробно в течение 3 сут под­ряд при 80°С по 1 ч.

Патологический материал. Предварительно об­рабатывают 5%-м раствором серной кислоты, промывают физио­логическим раствором NaCl, растирают в ступке и высевают на среды. Посевы помешают в термостат при 38 °С; через 2 сут про­бирки парафинируют. Учет производят с помощью лупы через 15 сут, а затем каждые 5 сут. Первичный рост на казеиновой среде наблюдают к 18...20 сут при сильной обсемененности засеянной ткани; при слабой обсемененности — в более поздние сроки. На плотных элективных средах колонии плоские, сухие, серовато-бе­ловатые, с неровными краями. По мере роста края приобретают бугристость, не отличаясь от колоний других микобактерий. В жидких средах (МПБ с глицерином, синтетических средах) на по­верхности образуется нежная беловатая пленка, которая в силу собственной тяжести опускается на дно.

Дифференциация. Возбудитель паратуберкулезного эн­терита дифференцируют от возбудителя туберкулеза по следующим тестам: 1) культивирование микобактерий паратуберкулеза возмож­но только на средах с добавлением «фактора роста»; 2) лаборатор­ные животные невосприимчивы к возбудителю паратуберкулеза.

Серологическая диагностика. Пробы сывороток крови исследуют в РСК по общепринятой методике (с паратуберку-лезным антигеном — метаноловым экстрактом микробной массы М.paraluberculosis); реакция неспецифична. Помимо названных ме­тодов диагностики паратуберкулеза, широко используют аллерги­ческую диагностику в соответствии с действующей инструкцией.

Биопрепараты. Вакцина БЦЖ (BCG): представляет собой живую лиофильно высушенную культуру вакцинного штамма тубер­кулезных микобактерий бычьего типа. Вакцинный штамм BCG (Bacillus Calmette — Guerin) был получен в 1924 г. французскими уче­ными Кальметтом и Гереном путем длительного культивирования (в течение 18 лет) вирулентного штамма М. bovis на картофельно-гли-цериновой среде с добавлением бычьей желчи. Для приготовления противотуберкулезной вакцины штамм БЦЖ выращивают на специ­альных средах в течение 20 сут. В ветеринарной практике вакцину БЦЖ используют в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах для профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота.

Сухой очищенный туберкулин ППД для млекопитающих гото­вят из культуры микобактерий, которую выращивают в течение двух месяцев, а затем стерилизуют авто планированием. Белок из культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой. Преципитат белка, отделенный центрифугированием, растворяют в воде и вновь осаждают сульфатом аммония. Белок — это основ­ная фракция туберкулина ППД, содержание его составляет 73,4...90 %. Кроме того, в состав препарата входят полисахариды, липиды и нуклеиновые кислоты.

Альттуберкулин (АТК)для млекопитающих: стерильный филь­трат культуры микобактерий, выращенных в течение двух месяцев на мясогидролизатном картофельно-глицериновом бульоне. Буль­он концентрируют, выпаривая до 1/10 первоначального объема, и затем добавляют 20 % экстракта бактериальной массы микобакте­рий.

Туберкулин ППД для птиц: готовят, используя пять штаммов М. avium. Выделение белка из культуральной жидкости и приго­товление препарата проводят, как при получении АТК.


Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 817 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.006 сек.)