АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема 14.ЭНТЕРОБАКТЕРИИ

Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов бактерий, име­ющих сходство по морфологическим, тинкториальным и культу-ральным свойствам и отличающихся по биохимическим призна­кам. Наиболее важное значение для ветеринарной практики име­ют бактерии родов Escherichia и Salmonella, вызывающие у живот­ных заболевания колибактериоз и сальмонеллез.

Возбудитель колибактериоза (кишечная палочка Escherichia colt). Колибактериоз — остропротекающее инфекционное заболевание молодняка разных видов животных (включая птиц и пушных зве­рей). Заболевание характеризуется, как правило, диареей (профуз-ным поносом), обезвоживанием, депрессией, нарастающей слабо­стью и летальным исходом. Колибактериоз протекает в трех фор­мах: септической, энтеротоксемической и энтеритной. Последние две формы не сопровождаются сепсисом. Восприимчивы телята в первые часы и дни после рождения. Поросята заболевают как в период новорожденное™, так и после отъема. Ягнята заболевают с первых дней после рождения до 5...6-месячного возраста. Птицы поражаются в основном в первые 2...3 мес жизни. Взрослые жи­вотные колибактериозом не болеют, но являются бактерионосите­лями патогенных Е. соН. Кишечная палочка может быть также воз­будителем мастита и эндометрита.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию направляют патологический материал: отрезок кишечни­ка, кусочек печени, селезенки. При вскрытии трупа в лаборатории помимо патматериала исследуют также кровь из сердца и голов­ной мозг. Если в лабораторию не представляется возможным в кратчайший срок доставить материал, его консервируют: фека­лии — раствором стерильного глицерина с NaCl (глицерин — 250 мл, поваренная соль —5 г, дистиллированная вода — 750 мл), кусочки внутренних органов —30%-м водным раствором глице­рина или 10%-м раствором NaCl. При бактериологическом иссле­довании учитывают особенности возбудителя.

Микроскопия. Е. coli — короткие палочки с закруглен­ными краями, грамотрицательные, длиной 1...3мкм и шириной 0,8 мкм, споры не образуют. В мазках расположение одиночное. Бактерии подвижны, перитрихи или неподвижны. Капсулу не об­разуют, за исключением отдельных штаммов серогрупп (08, 09, 0101).

Выделение чистой культуры. Определе­ние культурально-биохимических свойств. Посев производят на среды Эндо (или Левина), МПБ и МПА. По типу дыхания Е. coli •— аэроб. Растет на всех обычных питательных средах. Оптимальная температура 37...38 °С, рН среды 7,0...7,2. На МПА через 18...20ч вырастают влажные круглые колонии с ров­ными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост ки­шечной палочки проявляется равномерным помутнением с обра­зованием осадка. Некоторые штаммы Е. coli обладают гемолити­ческими свойствами.

Для дифференциации Е. coli от других представителей семей­ства Enterobacteriaceae определяют ее биохимические свойства. На среде Эндо Е. coli образует три типа колоний: 1) малиновые с ме­таллическим блеском; 2) малиновые с розовым блеском; 3) розо­вые. На среде Левина дает рост в виде колоний темно-фиолетово­го цвета. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа (некоторые лактозонегативные варианты не сбраживают лак­тозу, сбраживает маннит, дудьцит, арабинозу). Обесцвечивает ме-тиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Ре­акция с метилротом положительная, проба Фогеса — Проскауэ-ра — отрицательная.

Две последние реакции ставят с двухсуточными культурами на специальной среде Кларка следующего состава: пептон — 5 г, глю­коза — 5 г, К2НРО4 — 5 г, дистиллированная вода — 1000 мл. Сре­ду стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 50 кПа в течение 15 мин. В одну пробирку с культурой после инкубирова­ния в данной среде пипеткой добавляют 5 капель индикатора ме-тилрота (метилрот — 0,01 мл, 96%-й спирт-ректификат — 30 мл, дистиллированная вода — 20 мл), после чего пробирки встряхива­ют. Розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое окрашивание — как отрицательный, что связано с изменением рН культуры вследствие ферментации глюкозы. В другую пробирку с культурой в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-го раствора КОН и 0,5 мл 6%-го спиртового раствора а-на-фтола. Учет производят через З...5мин. При положительном ре­зультате появляется розовое окрашивание вследствие реакции ин­дикатора и образовавшегося в среде ацетил метилкарбинола при расщеплении глюкозы. При отрицательном результате — желтое окрашивание.

На средах Козера (жидкая) и Симмонса (агаровая с индикатором бромтимолблау) Е. coli не растет, так как не усваивает цитратно-ам-монийные соли. Среда Козера синтетическая бесцветная, состоит из кислого фосфата натрий-аммония (NaNH₄HPO₄- 4Н₂О) — 1,5 г, однозамещенного фосфата калия (КН2РО4) — 1 г, сульфата магния (MgSO₄H₂O)-0,2r, цитрата натрия (Na₃C₆H₅O₇ ■ 2Н₂О) - 3 г, дистиллированной воды — 1000 мл. Раствор этой смеси пропуска­ют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, стерилизу­ют при 120 °С в течение 15...20 мин. Помутнение среды после двухсуточного культивирования в термостате указывает на рост бактерий; при отсутствии роста бактерий среда остается без изме­нений. На среде Симмонса цитрато-аммонийнопозитивные бак­терии растут с изменением цвета среды в ярко-синий. Микроорга­низмы, не усваивающие цитратные и аммонийные соли, на среде Симмонса не растут: цвет ее не изменяется.

Основываясь на морфологических и культурально-биохими-ческих свойствах, проводят межродовую дифференциацию. Но биологические свойства бактерий разных штаммов одного и того же вида могут быть неодинаковыми, что объясняется их различной вирулентностью и антигенной структурой, установ­ление которых входит в комплекс микробиологических диагно­стических исследований. Выделенную чистую культуру типиру-ют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.

Антигенная структура. Клетка кишечной палочки имеет три типа антигенов —О (соматический), К (оболочечный, капсульный) и Н (жгутиковый). О-антиген — термостабильный, расположен в клеточной стенке, состоит из липидо-полисахари-до-протеинового комплекса: липид определяет токсичность (эн­дотоксин), полисахарид — серологическую специфичность, про­теин — носитель антигенного свойства. К-антигены ~ поверхнос­тные, оболочечные; это кислые полисахариды, редко протеины. По своим свойствам их подразделяют на три типа: В, L, А. Тип В — термолабильный: инактивируется при 100 °С в течение 1ч. Тип L — термолабильный: инактивируется при 60 "С в течение I ч. Тип А — термостабильный, имеется у слизистых капсулообразую-щих штаммов: разрушается при 120 °С в течение 2,5 ч. Н-анти-ген — белковой природы, термолабильный, представлен несколькими десятками серологических разновидностей. Антигенное строение принято выражать формулой — за буквенным обозначе­нием каждого антигена следуют арабские цифры, отделенные дво­еточием, например 0111: В4: Н2 или 055: В5: НЮ. Цифры обо­значают порядковый номер антигена в диагностической антиген­ной схеме, созданной Кауффманом с сотр. Антигеном каждого типа гипериммунизируют кролика и получают специфические аг­глютинирующие сыворотки для диагностических целей. Биологи­ческая промышленность выпускает сыворотки к О-антигенам, по­этому в лабораториях проводят серологическую типизацию серо-групп кишечной палочки. Наиболее частыми возбудителями ко-либактериоза служат бактерии серогрупп 078, 086, 015, 08, 09, 0119, 0137, 0115, 041, 0141, 0149 идр.

Патогенность. В лабораторных условиях определяют внутрибрюшинным заражением белых мышей. В большинстве случаев Е. colt, выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекцией животных, патогенны для мышей. Культуры Е. соН, выделенные от здоровых животных, обычно непатоген­ны. Патогенность для белых мышей зависит от вирулентности штамма, дозы вводимых бактерий, массы (возраста) мышей, метода заражения и индивидуальной иммунологической реак­тивности, условий их содержания и кормления. Белые крысы мало чувствительны к Е. colt, щенки, котята в 2...3-месячном возрасте восприимчивы при оральном заражении. Для биопро­бы можно использовать куриные эмбрионы, гибель которых наступает через 24...48 ч после заражения единичными бакте­риями Е. coli.

Одним из важных факторов вирулентности кишечной палочки является ее способность продуцировать токсины двух типов: тер­молабильный экзотоксин и термостабильный эндотоксин (поли­сахар идо-лип идо-протеиновый комплекс). Некоторые штаммы Е. coli продуцируют антибиотические вещества — колицины, по­давляющие рост отдельных штаммов кишечной палочки и не дей­ствующие на бактерии других видов. Колицины термостабильны. Могут продуцироваться как патогенными, так и непатогенными штаммами.

Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагно­стики. Люминесцентно-серологтеский метод используют как ори­ентировочный для определения патогенных серотипов Е. coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот ме­тод позволяет за короткий срок получить предварительные ре­зультаты.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации и реакция нейт­рализации—ускоренные методы, позволяющие обнаружить в фе­калиях больных животных возбудителя и установить его кон­центрацию.

Биопрепараты. Вакцина поливалентная гидроксидалю-миниевая формолтиомерсаловая против колибактериоза (эшери-хиоза) поросят, телят и ягнят.

Вакцина поливалентная против сальмонеллеза и колибактери­оза пушных зверей.

Колипротектан ВИЭВ.

Сыворотка поливалентная против колибактериоза (эшерихио-за) сельскохозяйственных животных.

Сыворотки О-коли агглютинирующие.

Колиадгезин-тест: антиадгезивные коли-сыворотки К 88, К 99, 987 Р, А 20, F41.

Возбудители салъмонеллезов. У животных заболевания вызыва­ют главным образом следующие виды рода сальмонелл: Salmonella enteritidis, S. choleraesuis (Suipestifer), S. typhimurium, S. pullorum, S. abortus equi, S. abortus ovis. Бактерии данного рода впервые описал Салмон (1885), в честь которого они получили родовое название Salmonella. Сальмонеллезы у молодняка разных видов животных протекают в острой септической форме: у телят в возрасте от 3...4 нед до 4...5 мес с явлениями лихорадки и профузного поноса; у поросят —до 4 мес; у овец всех возрастов (возможно внутриут­робное инфицирование); у жеребят, как правило, происходит внутриутробное инфицирование. У конематок заболевание харак­теризуется абортами. Аборты отмечают и у овцематок.

Для бактериологического диагноза направ­ляют от абортировавших овцематок и кобыл плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, органы плода. В остальных случаях (при септичес­кой форме) посылают труп целиком либо трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лим­фоузлы. Для прижизненной диагностики исследуют фекалии больных (редко прибегают к получению гемокультуры). Порядок бактериологического исследования материала от разных видов животных: все виды рода Salmonella обладают многими общими свойствами, поэтому предварительно при исследовании выделен­ной культуры проводят родовую дифференциацию, а затем — ви­довую (внутри рода).

Микроскопия. Из тканей органов готовят препараты-от­печатки и окрашивают их по Граму. Сальмонеллы — грамотрица-тельные палочки величиной 2...4 мкм; споры и капсулы не образу­ют, располагаются одиночно, иногда попарно.

Выделение чистой культуры. Из патологическо­го материала делают посевы на дифференциально-диагностичес­кие среды. Наиболее часто используют агар Эндо, среду Плоски-рева или висмут-сульфит агар (модифицированная среда Вильсо­на— Блера); оптимальный рН среды 7,2...7,4. На средах Эндо и Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний; на висмут-сульфит-агаре — черных колоний. При посевах из органов трупа используют МПБ и МПА в пробирках. В МПБ рост диф­фузный, на МПА сальмонеллы формируют гладкие бесцветные прозрачные колонии с ровными краями. Сальмонеллы ферменти­руют глюкозу, не сбраживают лактозу, сахарозу, не свертывают молоко, не редуцируют метиленовую синь в молоке. Не образуют индола. Отдельные виды образуют сероводород. Реакция с метил-ротом положительная, а Фогес — Проскауэра — отрицательная.

При дифференциации видов сальмонелл внутри рода использу­ют среды Биттера и Штерна. В состав среды Биттера входят: рам-ноза — 5 г, двухосновный фосфат натрия —0,5 г, сульфат аммо­ния — 1 г, цитрат натрия (трехосновный) — 2 г, NaCt — 0,5 г пеп­тон — 0,05 г и дистиллированная вода — 1000 мл. Глицерин-фук-синовый бульон Штерна состоит из МПВ (100 мл) с насыщенным раствором основного фуксина (5...6 капель), глицерина (1 мл) и 10 %-го водного раствора сульфита натрия (2 мл). Среды стерили­зуют текучим паром 10...15мин. Положительный результат на сре­дах Биттера и Штерна проявляется покраснением; при отрица­тельном результате — желтое окрашивание.

Серологическую типизацию выделенной куль­туры проводят с культурой, выросшей на скошенном агаре с кон­денсатом. Применяют пластинчатый метод РА. У сальмонелл раз­личают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген. Поскольку по О-антигену, общему для нескольких видов сальмонелл, последние подразделяют на группы (обозначенные заглавными буквами латинского алфави­та), то вначале исследуемую культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыво­ротками в РА на стекле. При положительном результате с группо­вой сывороткой проводят испытание той же культуры с моноре-цепторными О-сыворотками тех рецепторов, которые входят в данную группу. Кроме того, эти культуры еще испытывают с мо-норецепторными Н-сыворотками. Если культура типична по био­химическим свойствам, но не агглютинирует с О- и Н-сыворотка­ми. следует испытать ее отношение к сальмонеллезному бактерио­фагу, чувствительность к которому свидетельствует о принадлеж­ности к роду сальмонелл.

Возбудитель сальмонеллеза телят (S. enteritidis) открыт Гертне-ром в 1888 г. Реже сальмонеллез телят может быть обусловлен S. typhimurium, по антигенной структуре входящего в группу В. Этот микроб часто вызывает сальмонеллез у водоплавающей пти­цы, а варианты S. enteritidis dublin, rostock — заболевание у человека в виде гастроэнтерита вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенному строению S. enteritidis (и варианты) относятся к груп­пе D. В эту же группу входит и возбудитель пуллороза (тифа кур) S. pullorum gallinarum. Пуллороз протекает остро, септически, с большой смертностью (до 100 %). В лабораторию направляют све­жий труп. Взрослая птица болеет бессимптомно, хронически. Для

выявления таких кур-бактерионосителей обследуют взрослую птицу в условиях хозяйства серологическим методом — кровяно-капельной РА с пуллорным антигеном.

Возбудители салшонеллеза поросят (S. typhisuis или S. choleraesuis) помимо заболевания у свиней могут вызвать пищевые токсикоинфекции у людей. Данная группа сальмонелл патогенна для белых мышей. По антигенной структуре принадлежит к груп­пе С. Возбудителем сальмонеллеза у свиней может быть S. typhimurium. По О-антигену относят к группе В.

Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл (S. abortus equi) от­крыт в 1893 г. Сбраживает маннит, глюкозу, арабинозу, дулышт; среду Штерна не изменяет. По О-антигену входит в группу В. Для бактериологической диагностики посылают абортированный плод от больного животного, остальное поголовье лошадей обследуют серологически (РА), фекалии исследуют для выявления бактерио­носителей. Показателем развития инфекционного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1: 400.

Лабораторный диагноз на сальмонеллез разных видов живот­ных ставят на основании результатов бактериологического иссле­дования патологического материала с обязательным изучением у выделенных бактерий морфологических, культурально-биохими-ческих и антигенных свойств.

Биопрепараты. Концентрированная формолквасцовая вакцина против сальмонеллеза телят.

Вакцина против сальмонеллеза поросят. Готовят из трех штам­мов в следующем соотношении: S. choleraesuis— 50 %, iS". typhimuriun — 25 %, S. dublin — 25 %. Активность вакцины проверя­ют на голубях.

Ассоциированную (поливалентную) вакцину против сальмо­неллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят гото­вят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четы­рех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины про­веряют на голубях и белых мышах.

Формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и саль-монелллеза пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет собой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмо-калиевые квасцы и хлорид кальция.

Сухую живую вакцину против сальмонеллеза свиней из штам­ма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S. choleraesuis ТС-177, зависимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках.

Вакцина против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S. dublin № 6.

Вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы.

Вакцина против сальмонеллеза свиней из суттрессорного ревер-танта.

Вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против сальмо­неллеза овец.

Поливалентная антитоксическая сыворотка против сальмонел­леза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, со­стоящим из четырех серотипов сальмонелл: S. dublin, S. lyphimurium, S. abortusovis, S. choleraesuis. Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность и активность.

Бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоза телят и бактериофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, вы­деленных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных.

Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 10⁹/мл). Применяют для серо­логической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.

Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10 %-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных по-лисахаридно-полипептидной фракцией S. galiinarum-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.

Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представля­ет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формалином и окрашенных кристалл виол етом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц.

Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формалинизированными ан­тигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом аммония глобулины и проводят люминесцентное мечение очищенных гло­булинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыворотку.

Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для эксп­ресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмо­нелл, выделяемых от животных, из продуктов животного проис­хождения и объектов внешней среды.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 790 | Нарушение авторских прав