Тема 14.ЭНТЕРОБАКТЕРИИ
Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов бактерий, имеющих сходство по морфологическим, тинкториальным и культу-ральным свойствам и отличающихся по биохимическим признакам. Наиболее важное значение для ветеринарной практики имеют бактерии родов Escherichia и Salmonella, вызывающие у животных заболевания колибактериоз и сальмонеллез.
Возбудитель колибактериоза (кишечная палочка Escherichia colt). Колибактериоз — остропротекающее инфекционное заболевание молодняка разных видов животных (включая птиц и пушных зверей). Заболевание характеризуется, как правило, диареей (профуз-ным поносом), обезвоживанием, депрессией, нарастающей слабостью и летальным исходом. Колибактериоз протекает в трех формах: септической, энтеротоксемической и энтеритной. Последние две формы не сопровождаются сепсисом. Восприимчивы телята в первые часы и дни после рождения. Поросята заболевают как в период новорожденное™, так и после отъема. Ягнята заболевают с первых дней после рождения до 5...6-месячного возраста. Птицы поражаются в основном в первые 2...3 мес жизни. Взрослые животные колибактериозом не болеют, но являются бактерионосителями патогенных Е. соН. Кишечная палочка может быть также возбудителем мастита и эндометрита.
Бактериологическое исследование. В лабораторию направляют патологический материал: отрезок кишечника, кусочек печени, селезенки. При вскрытии трупа в лаборатории помимо патматериала исследуют также кровь из сердца и головной мозг. Если в лабораторию не представляется возможным в кратчайший срок доставить материал, его консервируют: фекалии — раствором стерильного глицерина с NaCl (глицерин — 250 мл, поваренная соль —5 г, дистиллированная вода — 750 мл), кусочки внутренних органов —30%-м водным раствором глицерина или 10%-м раствором NaCl. При бактериологическом исследовании учитывают особенности возбудителя.
Микроскопия. Е. coli — короткие палочки с закругленными краями, грамотрицательные, длиной 1...3мкм и шириной 0,8 мкм, споры не образуют. В мазках расположение одиночное. Бактерии подвижны, перитрихи или неподвижны. Капсулу не образуют, за исключением отдельных штаммов серогрупп (08, 09, 0101).
Выделение чистой культуры. Определение культурально-биохимических свойств. Посев производят на среды Эндо (или Левина), МПБ и МПА. По типу дыхания Е. coli •— аэроб. Растет на всех обычных питательных средах. Оптимальная температура 37...38 °С, рН среды 7,0...7,2. На МПА через 18...20ч вырастают влажные круглые колонии с ровными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост кишечной палочки проявляется равномерным помутнением с образованием осадка. Некоторые штаммы Е. coli обладают гемолитическими свойствами.
Для дифференциации Е. coli от других представителей семейства Enterobacteriaceae определяют ее биохимические свойства. На среде Эндо Е. coli образует три типа колоний: 1) малиновые с металлическим блеском; 2) малиновые с розовым блеском; 3) розовые. На среде Левина дает рост в виде колоний темно-фиолетового цвета. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа (некоторые лактозонегативные варианты не сбраживают лактозу, сбраживает маннит, дудьцит, арабинозу). Обесцвечивает ме-тиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Реакция с метилротом положительная, проба Фогеса — Проскауэ-ра — отрицательная.
Две последние реакции ставят с двухсуточными культурами на специальной среде Кларка следующего состава: пептон — 5 г, глюкоза — 5 г, К2НРО4 — 5 г, дистиллированная вода — 1000 мл. Среду стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 50 кПа в течение 15 мин. В одну пробирку с культурой после инкубирования в данной среде пипеткой добавляют 5 капель индикатора ме-тилрота (метилрот — 0,01 мл, 96%-й спирт-ректификат — 30 мл, дистиллированная вода — 20 мл), после чего пробирки встряхивают. Розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое окрашивание — как отрицательный, что связано с изменением рН культуры вследствие ферментации глюкозы. В другую пробирку с культурой в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-го раствора КОН и 0,5 мл 6%-го спиртового раствора а-на-фтола. Учет производят через З...5мин. При положительном результате появляется розовое окрашивание вследствие реакции индикатора и образовавшегося в среде ацетил метилкарбинола при расщеплении глюкозы. При отрицательном результате — желтое окрашивание.
На средах Козера (жидкая) и Симмонса (агаровая с индикатором бромтимолблау) Е. coli не растет, так как не усваивает цитратно-ам-монийные соли. Среда Козера синтетическая бесцветная, состоит из кислого фосфата натрий-аммония (NaNH4HPO4- 4Н2О) — 1,5 г, однозамещенного фосфата калия (КН2РО4) — 1 г, сульфата магния (MgSO4H2O)-0,2r, цитрата натрия (Na3C6H5O7 ■ 2Н2О) - 3 г, дистиллированной воды — 1000 мл. Раствор этой смеси пропускают через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, стерилизуют при 120 °С в течение 15...20 мин. Помутнение среды после двухсуточного культивирования в термостате указывает на рост бактерий; при отсутствии роста бактерий среда остается без изменений. На среде Симмонса цитрато-аммонийнопозитивные бактерии растут с изменением цвета среды в ярко-синий. Микроорганизмы, не усваивающие цитратные и аммонийные соли, на среде Симмонса не растут: цвет ее не изменяется.
Основываясь на морфологических и культурально-биохими-ческих свойствах, проводят межродовую дифференциацию. Но биологические свойства бактерий разных штаммов одного и того же вида могут быть неодинаковыми, что объясняется их различной вирулентностью и антигенной структурой, установление которых входит в комплекс микробиологических диагностических исследований. Выделенную чистую культуру типиру-ют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.
Антигенная структура. Клетка кишечной палочки имеет три типа антигенов —О (соматический), К (оболочечный, капсульный) и Н (жгутиковый). О-антиген — термостабильный, расположен в клеточной стенке, состоит из липидо-полисахари-до-протеинового комплекса: липид определяет токсичность (эндотоксин), полисахарид — серологическую специфичность, протеин — носитель антигенного свойства. К-антигены ~ поверхностные, оболочечные; это кислые полисахариды, редко протеины. По своим свойствам их подразделяют на три типа: В, L, А. Тип В — термолабильный: инактивируется при 100 °С в течение 1ч. Тип L — термолабильный: инактивируется при 60 "С в течение I ч. Тип А — термостабильный, имеется у слизистых капсулообразую-щих штаммов: разрушается при 120 °С в течение 2,5 ч. Н-анти-ген — белковой природы, термолабильный, представлен несколькими десятками серологических разновидностей. Антигенное строение принято выражать формулой — за буквенным обозначением каждого антигена следуют арабские цифры, отделенные двоеточием, например 0111: В4: Н2 или 055: В5: НЮ. Цифры обозначают порядковый номер антигена в диагностической антигенной схеме, созданной Кауффманом с сотр. Антигеном каждого типа гипериммунизируют кролика и получают специфические агглютинирующие сыворотки для диагностических целей. Биологическая промышленность выпускает сыворотки к О-антигенам, поэтому в лабораториях проводят серологическую типизацию серо-групп кишечной палочки. Наиболее частыми возбудителями ко-либактериоза служат бактерии серогрупп 078, 086, 015, 08, 09, 0119, 0137, 0115, 041, 0141, 0149 идр.
Патогенность. В лабораторных условиях определяют внутрибрюшинным заражением белых мышей. В большинстве случаев Е. colt, выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекцией животных, патогенны для мышей. Культуры Е. соН, выделенные от здоровых животных, обычно непатогенны. Патогенность для белых мышей зависит от вирулентности штамма, дозы вводимых бактерий, массы (возраста) мышей, метода заражения и индивидуальной иммунологической реактивности, условий их содержания и кормления. Белые крысы мало чувствительны к Е. colt, щенки, котята в 2...3-месячном возрасте восприимчивы при оральном заражении. Для биопробы можно использовать куриные эмбрионы, гибель которых наступает через 24...48 ч после заражения единичными бактериями Е. coli.
Одним из важных факторов вирулентности кишечной палочки является ее способность продуцировать токсины двух типов: термолабильный экзотоксин и термостабильный эндотоксин (полисахар идо-лип идо-протеиновый комплекс). Некоторые штаммы Е. coli продуцируют антибиотические вещества — колицины, подавляющие рост отдельных штаммов кишечной палочки и не действующие на бактерии других видов. Колицины термостабильны. Могут продуцироваться как патогенными, так и непатогенными штаммами.
Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагностики. Люминесцентно-серологтеский метод используют как ориентировочный для определения патогенных серотипов Е. coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот метод позволяет за короткий срок получить предварительные результаты.
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации и реакция нейтрализации—ускоренные методы, позволяющие обнаружить в фекалиях больных животных возбудителя и установить его концентрацию.
Биопрепараты. Вакцина поливалентная гидроксидалю-миниевая формолтиомерсаловая против колибактериоза (эшери-хиоза) поросят, телят и ягнят.
Вакцина поливалентная против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей.
Колипротектан ВИЭВ.
Сыворотка поливалентная против колибактериоза (эшерихио-за) сельскохозяйственных животных.
Сыворотки О-коли агглютинирующие.
Колиадгезин-тест: антиадгезивные коли-сыворотки К 88, К 99, 987 Р, А 20, F41.
Возбудители салъмонеллезов. У животных заболевания вызывают главным образом следующие виды рода сальмонелл: Salmonella enteritidis, S. choleraesuis (Suipestifer), S. typhimurium, S. pullorum, S. abortus equi, S. abortus ovis. Бактерии данного рода впервые описал Салмон (1885), в честь которого они получили родовое название Salmonella. Сальмонеллезы у молодняка разных видов животных протекают в острой септической форме: у телят в возрасте от 3...4 нед до 4...5 мес с явлениями лихорадки и профузного поноса; у поросят —до 4 мес; у овец всех возрастов (возможно внутриутробное инфицирование); у жеребят, как правило, происходит внутриутробное инфицирование. У конематок заболевание характеризуется абортами. Аборты отмечают и у овцематок.
Для бактериологического диагноза направляют от абортировавших овцематок и кобыл плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, органы плода. В остальных случаях (при септической форме) посылают труп целиком либо трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лимфоузлы. Для прижизненной диагностики исследуют фекалии больных (редко прибегают к получению гемокультуры). Порядок бактериологического исследования материала от разных видов животных: все виды рода Salmonella обладают многими общими свойствами, поэтому предварительно при исследовании выделенной культуры проводят родовую дифференциацию, а затем — видовую (внутри рода).
Микроскопия. Из тканей органов готовят препараты-отпечатки и окрашивают их по Граму. Сальмонеллы — грамотрица-тельные палочки величиной 2...4 мкм; споры и капсулы не образуют, располагаются одиночно, иногда попарно.
Выделение чистой культуры. Из патологического материала делают посевы на дифференциально-диагностические среды. Наиболее часто используют агар Эндо, среду Плоски-рева или висмут-сульфит агар (модифицированная среда Вильсона— Блера); оптимальный рН среды 7,2...7,4. На средах Эндо и Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний; на висмут-сульфит-агаре — черных колоний. При посевах из органов трупа используют МПБ и МПА в пробирках. В МПБ рост диффузный, на МПА сальмонеллы формируют гладкие бесцветные прозрачные колонии с ровными краями. Сальмонеллы ферментируют глюкозу, не сбраживают лактозу, сахарозу, не свертывают молоко, не редуцируют метиленовую синь в молоке. Не образуют индола. Отдельные виды образуют сероводород. Реакция с метил-ротом положительная, а Фогес — Проскауэра — отрицательная.
При дифференциации видов сальмонелл внутри рода используют среды Биттера и Штерна. В состав среды Биттера входят: рам-ноза — 5 г, двухосновный фосфат натрия —0,5 г, сульфат аммония — 1 г, цитрат натрия (трехосновный) — 2 г, NaCt — 0,5 г пептон — 0,05 г и дистиллированная вода — 1000 мл. Глицерин-фук-синовый бульон Штерна состоит из МПВ (100 мл) с насыщенным раствором основного фуксина (5...6 капель), глицерина (1 мл) и 10 %-го водного раствора сульфита натрия (2 мл). Среды стерилизуют текучим паром 10...15мин. Положительный результат на средах Биттера и Штерна проявляется покраснением; при отрицательном результате — желтое окрашивание.
Серологическую типизацию выделенной культуры проводят с культурой, выросшей на скошенном агаре с конденсатом. Применяют пластинчатый метод РА. У сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген. Поскольку по О-антигену, общему для нескольких видов сальмонелл, последние подразделяют на группы (обозначенные заглавными буквами латинского алфавита), то вначале исследуемую культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытание той же культуры с моноре-цепторными О-сыворотками тех рецепторов, которые входят в данную группу. Кроме того, эти культуры еще испытывают с мо-норецепторными Н-сыворотками. Если культура типична по биохимическим свойствам, но не агглютинирует с О- и Н-сыворотками. следует испытать ее отношение к сальмонеллезному бактериофагу, чувствительность к которому свидетельствует о принадлежности к роду сальмонелл.
Возбудитель сальмонеллеза телят (S. enteritidis) открыт Гертне-ром в 1888 г. Реже сальмонеллез телят может быть обусловлен S. typhimurium, по антигенной структуре входящего в группу В. Этот микроб часто вызывает сальмонеллез у водоплавающей птицы, а варианты S. enteritidis dublin, rostock — заболевание у человека в виде гастроэнтерита вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенному строению S. enteritidis (и варианты) относятся к группе D. В эту же группу входит и возбудитель пуллороза (тифа кур) S. pullorum gallinarum. Пуллороз протекает остро, септически, с большой смертностью (до 100 %). В лабораторию направляют свежий труп. Взрослая птица болеет бессимптомно, хронически. Для
выявления таких кур-бактерионосителей обследуют взрослую птицу в условиях хозяйства серологическим методом — кровяно-капельной РА с пуллорным антигеном.
Возбудители салшонеллеза поросят (S. typhisuis или S. choleraesuis) помимо заболевания у свиней могут вызвать пищевые токсикоинфекции у людей. Данная группа сальмонелл патогенна для белых мышей. По антигенной структуре принадлежит к группе С. Возбудителем сальмонеллеза у свиней может быть S. typhimurium. По О-антигену относят к группе В.
Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл (S. abortus equi) открыт в 1893 г. Сбраживает маннит, глюкозу, арабинозу, дулышт; среду Штерна не изменяет. По О-антигену входит в группу В. Для бактериологической диагностики посылают абортированный плод от больного животного, остальное поголовье лошадей обследуют серологически (РА), фекалии исследуют для выявления бактерионосителей. Показателем развития инфекционного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1: 400.
Лабораторный диагноз на сальмонеллез разных видов животных ставят на основании результатов бактериологического исследования патологического материала с обязательным изучением у выделенных бактерий морфологических, культурально-биохими-ческих и антигенных свойств.
Биопрепараты. Концентрированная формолквасцовая вакцина против сальмонеллеза телят.
Вакцина против сальмонеллеза поросят. Готовят из трех штаммов в следующем соотношении: S. choleraesuis— 50 %, iS". typhimuriun — 25 %, S. dublin — 25 %. Активность вакцины проверяют на голубях.
Ассоциированную (поливалентную) вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят готовят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четырех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины проверяют на голубях и белых мышах.
Формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и саль-монелллеза пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет собой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмо-калиевые квасцы и хлорид кальция.
Сухую живую вакцину против сальмонеллеза свиней из штамма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S. choleraesuis ТС-177, зависимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках.
Вакцина против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S. dublin № 6.
Вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы.
Вакцина против сальмонеллеза свиней из суттрессорного ревер-танта.
Вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против сальмонеллеза овец.
Поливалентная антитоксическая сыворотка против сальмонеллеза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, состоящим из четырех серотипов сальмонелл: S. dublin, S. lyphimurium, S. abortusovis, S. choleraesuis. Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность и активность.
Бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоза телят и бактериофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, выделенных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных.
Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 109/мл). Применяют для серологической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.
Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10 %-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных по-лисахаридно-полипептидной фракцией S. galiinarum-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.
Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представляет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формалином и окрашенных кристалл виол етом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц.
Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формалинизированными антигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом аммония глобулины и проводят люминесцентное мечение очищенных глобулинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыворотку.
Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для экспресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмонелл, выделяемых от животных, из продуктов животного происхождения и объектов внешней среды.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 796 | Нарушение авторских прав
|