Тема 20. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
Возбудитель сибирской язвы {Bacillus anthracis) выделен и изучен отечественным ученым Брауэлем (1857). Сибирская язва —- заразная остропротекающая болезнь многих видов животных и человека. Возбудитель сибирской язвы принадлежит к порядку Eubacteriales, семейству Bacillaceae.
Лабораторное исследование. У павших животных отрезают ухо с той стороны, на которой лежал труп. Прежде чем ухо отрезать, на него накладывают две лигатуры: одну ближе к голове, у основания уха, другую — отступя на 1 см от первой, затем между ними делают разрез. Поверхность разреза на трупе прижигают раскаленным металлическим предметом (шпателем) или химическими средствами — кристаллическим пермарганатом калия, фенолом, формалином. Отрезанное ухо завертывают в пергаментную бумагу или целлофан, упаковывают в непротекающий деревянный или железный ящик (пенал, коробку).
Помимо уха патматериалом может служить кровянисто-пенистое истечение из естественных отверстий трупа (носовое истечение, из глаз, рта, анального отверстия). Истечения наносят на чистое стекло в виде толстого мазка, сверху накрывают другим стек-
лом, завертывают в пергаментную бумагу или целлофан, упаковывают в коробку. Кровянистые истечения можно взять путем пропитывания кусочка мела.
В случаях, когда труп вскрыт или подозрение на сибирскую язву появилось при разделке туши после убоя животного, для бактериологического исследования направляют кровь из сердца, кусочки паренхиматозных органов, лимфоузлы. Патологический материал помещают в банки с притертой пробкой или целлофановые мешки, обертывают тканью, смоченной дезинфицирующим раствором, упаковывают и срочно с нарочным и сопроводительным письмом отсылают в лабораторию.
Бактериологическое исследование. Соблюдая правила личной профилактики, в лаборатории ухо животного фиксируют в кюветке, подрезают и отпрепаровывают в виде треугольника кожу снаружи уха, где она более подвижна. Лоскут кожи откидывают и к подкожной клетчатке прикладывают предметные стекла— готовят препараты-отпечатки. Кляч-препараты фиксируют и окрашивают по Граму и специально по Михину (или по Романовскому — Гимза азур-эозином или по Ольту сафранином). Подкожную клетчатку мелко нарезают маленькими стерильными ножницами и растирают в стерильной ступке с песком и физиологическим раствором. Данную тканевую взвесь используют для посева на питательные среды и заражения лабораторных животных. В пастеровскую пипетку капли межтканевой жидкости подкожной клетчатки, кровь и приготовленную взвесь набирают с помощью резиновой груши. Аналогично исследуют и другой материал.
Микроскопия. В. anthracis — неподвижный, грамполо-жительный, палочковидной формы; в препаратах из патологического материала располагается короткими цепочками по нескольку клеток или одиночно. Длина 4...8 мкм, ширина 0,5... 1 мкм. Прилегающие друг к другу концы бацилл кажутся обрубленными, наружные — закругленные. В организме формирует капсулу (цв. рис. X). В препаратах-мазках из культуры характерно расположение длинными нитевидными цепочками (стрептобациллы). В культурах, почве, воде, кормах формирует стойкую форму — спору. Для спорообразования необходим доступ кислорода, температура в пределах 12...42 "С.
Культуральные свойства. К питательным средам неприхотлив. Аэроб. Оптимальная температура роста 35.„37 °С. Из приготовленной тканевой взвеси пипеткой делают посев в МПБ, МПА. В МПЖ засевают в столбик среды уколом. В жидкой среде рост возбудителя характеризуется образованием на дне пробирки рыхлого ватообразного осадка при сохранении прозрачности бульона. На МПА через 24...48 ч В. anthracis образует шероховатые колонии R-формы с краями волнистыми, локоноподобными. В МПЖ возбудитель ближе к поверхности (больше доступ кислорода) растет обильнее в виде ответвлений от места укола. По мере углубления рост ослабляется, ответвления становятся короче. Рост возбудителя в МПЖ напоминает перевернутую вершиной вниз елочку: через 2...3 сут желатина медленно разжижается в виде воронки (пептонизируется). На кровяном агаре гемолиз не вызывает. Молоко свертывает через 2...4 сут; сгусток казеина пептонизируется.
Патогенность. Ставят биопробу на белых мышах, морских свинках или кроликах. Животных заражают подкожно непосредственно тканевой взвесью или выросшей культурой: дозой 0,1мл —мышей, 0,2 мл — морских свинок и 6,3 мл—кроликов. Гибель наступает через 1...Зсут. Павших животных вскрывают и исследуют бактериологически.
Для того чтобы обнаружить В, anthracis в исследуемом материале и идентифицировать выделенную культуру, используют также сибиреязвенные фаги (гамма-фаг, фаг ВИЭВ). На засеянную поверхность исследуемой культуры (на поверхность агара) наносят каплю сибиреязвенного фага и инкубируют при 37 °С. В случае гомологичное™ культуры и фага по следу капли уже через 6...8 ч образуется прозрачная дорожка лизиса; по краям дорожки отмечается рост засеянной культуры.
Для идентификации В. anthracis прибегают к феномену «ожерелья»: под действием малых концентраций пенициллина в агаровой среде (0,01...0,5 ЕД/мл) бациллы сибирской язвы приобретают форму сферопластов в виде шаров, напоминающих ожерелье.
Для дифференцирования В. anthracis от спорообразующих сапрофитных бацилл применяют МФА.
Серологическая диагностика. В несвежем, разложившемся патологическом материале бактериологическая диагностика неосуществима. В таких случаях применяют реакцию преципитации. Антигеном (преципитиногеном) для реакции служит вытяжка из тканей органов павшего животного (в том числе ухо). Экстрагируемый растворимый антиген разрушенных, лизи-рованных при гниении (или кипячении) бактерий термоустойчив. Поэтому преципитиноген готовят кипячением кусочков ткани в физиологическом растворе. Реакцию преципитации ставят в маленьких пробирках Уленгута или методом диффузии в агаровом геле.
Особое практическое значение реакция преципитации имеет при исследовании кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву. Кусочки проб данного сырья доставляют в лабораторию в герметической упаковке. Пробы сразу обеззараживают автоклавирова-нием, измельчают, экстрагируют «холодным способом» при 12...14°С в физиологическом растворе (1: 10) в течение 16...18 ч. Экстракт фильтруют через нейтральную асбестовую вату. Постановка реакции осуществляется, как указано выше.
Из мокросоленого сырья предварительно (после автоклавиро-вания) удаляют соль (диализ). Для этого полученные экстракты фильтруют, разливают в коллодийные мешочки и помещают на 45...60 мин в кристаллизатор с дистиллированной водой. После диализа мешочки переносят на! ч в кристаллизатор с 1 %-м раствором NaCl, а затем ставят реакцию, как обычно.
Биопрепараты. Вакцина СТИ — живая вакцина из эталонного штамма, представляет собой споровую (95...100 %) агаровую культуру в виде суспензии в 30%-м стерильном растворе глицерина; содержит (2Д...З,5)107 жизнеспособных спор в 1 мл.
Вакцина ГНКИ — сухая живая вакцина из эталонного штамма ГНКИ: содержит 5-107 жизнеспособных спор в 1мл. Вакцина против сибирской язвы из штамма № 55.
Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.
Лечебно-профилактическая сибиреязвенная сыворотка: получают гипериммунизацией лошадей инактивированной сибиреязвенной культурой.
Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка: предназначена для исследования материала на сибирскую язву в реакции преципитации. Сыворотку получают гипериммунизацией лошадей.
Сибиреязвенный стандартный антиген для РП: выпускают для контроля активности преципитируюшей сыворотки. Представляет собой экстракт из инактивированной бактериальной массы В. anthracis.
Сибиреязвенные люминесцирующие сыворотки: готовят из сибиреязвенной преципитируюшей сыворотки. Предназначены для ускоренного обнаружения некапсулированных клеток возбудителя в первичных посевах.
Сибиреязвенные диагностические бактериофаги: представляют собой освобожденную от бактерий путем фильтрования жидкость бульонной культуры возбудителя, зараженную бактериофагом. Титр бактериофага 10.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 734 | Нарушение авторских прав
|