АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема 18. ВОЗБУДИТЕЛИ РОЖИ И ЛИСТЕРИОЗА

Возбудитель рожи свиней {Erysipelothrix rhusiopathiae). Открыт Па-стером и Тюйе (1882). Принадлежит к семейству Corynebacteria-сеае, роду Erysipelothrix. Заболевание у свиней отмечают в возрасте от 3 мес до! года, у ягнят — старше 3...4 нед. Другие виды живот­ных болеют редко. К возбудителю восприимчив и человек. Рожа свиней протекает в септической форме, внешне проявляется обра­зованием красных пятен на коже (крапивница), лихорадкой.

Бактериологическое исслед о в а н и е. Патоло­гическим материалом служит труп животного или кусочки орга­нов—печени с желчным пузырем, селезенки, почки, трубчатая кость. При подозрении на хроническую форму исследуют кровь из сердца и эндокарда, а при наличии артритов — суставную жид­кость. Кусочки органов консервируют в 30...40 %-м водном ра­створе глицерина или насыщенном растворе поваренной соли. Трубчатую кость, очищенную от мягких тканей, обертывают мар­лей, пропитанной 2...3 %-м раствором фенола.

Препараты-отпечатки из патологического материала окраши­вают по Граму. Для люминесцентной микроскопии из паренхима­тозных органов готовят суспензию (взвесь растертой ткани) на физиологическом растворе NaCl. Тонкие мазки из этой суспензии красят флуоресцирующей сывороткой. Пастеровской пипеткой делают посев на МПБ, МПА, МПЖ; инкубируют при 37 °С. Вы­росшую в бульоне культуру исследуют на подвижность и исполь­зуют для определения биохимических свойств. Смыв агаровой культуры применяют в качестве антигена для РА. Суспензией из тканей органов заражают голубя или белую мышь. Павших живот­ных вскрывают и исследуют бактериологически (рис. 62).

Морфология. Бактерия рожи свиней — тонкая прямая или слегка изогнутая палочка длиной 2...2,5 мкм. Бактерии распо­лагаются одиночно, попарно или в виде скоплений. При хрони­ческом течении болезни в мазках с пораженных сердечных клапа­нов (эндокарда) или других органов возбудитель имеет вид длин­ных нитей, иногда переплетающихся, но не ветвящихся. По Граму окрашивается положительно, споры и капсулы не образует. Не­подвижен.

При люминесцентной микроскопии возбудителя рожи опреде­ляют по наличию специфического свечения морфологически ти­пичных микробных клеток интенсивностью не ниже чем на три креста. При сомнительном или отрицательном результате диагноз уточняют люминесцентной микроскопией выросших на средах культур, выделенных из патологического материала.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель рожи неприхотлив к питательным средам. Для опти­мальных условий роста нужны среды, содержащие 1...2 % глюкозы или кровяную сыворотку с рН 7,2...7,6; температура культивирования 37 °С. Бактерии — аэробы или факультативные анаэробы. В жидкой питательной среде через 24...48 ч образуется едва заметное помутнение, незначительный осадок, который при встряхивании напоминает муаровую ткань (ленту).

На МПА возбудитель растет в виде очень мелких росинчатых прозрачных колоний. Типичной является гладкая колония с ров­ными краями, но встречаются измененные О- и R-формы, осо­бенно при хроническом течении болезни. Для патогенных штам­мов характерна S-форма колоний. В МПЖ по уколу посева через несколько дней появляется рост в виде «ершика» без разжижения среды.

Пышный рост наблюдают в полужидком агаре (0,1...0,15 %). Элективной средой для выделения рожистого микроба служит среда Сент-Иваньи. Полученную культуру микроскопируют как в обыч­ном световом микроскопе, так и люминесцентным методом, иденти­фицируют по культурально-биохимическим свойствам, пластинча­тым методом РА с позитивной сывороткой в разведении 1: 50.

Бактерия рожи свиней обладает слабовыраженной биохими­ческой активностью — не сбраживает салицин, не образует ката-лазы. С образованием кислоты и газа сбраживает глюкозу, лакто­зу, галактозу. Образует сероводород. По антигенной структуре бактерии рожи свиней относят к трем серологическим типам: А, В и N. Серотип N обладает общим видовым антигеном, серотипы А и В отличаются своими гаптенами. На основании серологических исследований (РА, РП, РГА) штамм бактерии рожи свиней отно­сят либо к серотипу А (более вирулентному), либо к менее виру­лентному для свиней серотипу В, обладающему выраженными иммуногенными свойствами.

Патоген н ость. Определяют заражением выделенной культуры возбудителя голубей и белых мышей. Голубей заражают внутримышечно (чаще в грудную мышцу) в дозе 0,2...0,3 мл, ги­бель наступает через З...6сут; белых мышей — подкожно в дозе 0,2 мл, гибель наступает через 2...4сут. Наблюдение за заражен­ными животными ведут 6...7сут. При заражении белых мышей следует исключить Erysipelothrix murisepticum — возбудителя сеп­тицемии мышей, по морфологическим и культуральным свой­ствам сходного с бактериями рожи свиней. Е. murisepticum непа­тогенна для голубей. При бактериологических исследованиях на рожу свиней следует учитывать возможность обнаружения возбу­дителя листериоза, имеющего морфологические, тинкториаль-ные и культуральные свойства, сходные со свойствами бактерии рожи свиней.

Биопрепараты. Концентрированная гидрокидалюми-ниевая формолвакцина против рожи свиней: содержит возбуди­теля серовара В, выращенного в бульоне Хоттингера, инактиви-рованного формалином, сорбированного на гидроксиде алюми­ния.

Депонированная вакцина против рожи свиней представляет собой живую культуру матрикса Конева, сорбированную на гид­роксиде алюминия.

Сухая живая вакцина против рожи свиней ВГНКИ из штамма ВР-2 представляет собой лиофильно высушенную культуру вак­цинного штамма ВР-2.

Лечебно-профилактическая сыворотка против рожи свиней: получают гипериммунизадией свиней; контролируют на стериль­ность, безвредность и активность на белых мышах и признают ак­тивной, если она предохраняет от гибели мышей в дозах 0,01...0,02 и 0,03 мл.

Сухие рожистые люминесцирующие сыворотки для прямого метода иммунофлуоресценции: предназначены для серологичес­кой идентификации возбудителя непосредственно в материале и в культуре.

Возбудитель листериоза (Listeria monocytogenes). Возбудитель от­крыт Марреем (1926). Назван в 1940 г. в честь Листера. Принадлежит к семейству Corynebacteriaceae, роду Listeria. Вызывает заболе­вание грызунов, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, ло­шадей, некоторых видов пушных зверей, птицы. Восприимчив к листериозу и человек. Болезнь протекает в септической форме, но нередко характеризуется проявлением расстройства центральной нервной системы.

Лабораторная диагностика листериоза осуществляется, как правило, бактериологическими и серологическими методами.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию посылают свежий труп мелкого животного целиком. От трупов крупных животных (лошадь, крупный рогатый скот, овца) — головной мозг и кусочки паренхиматозных органов, а в случае аборта — абортированный плод или его органы. При нали­чии мастита пробы молока берут из пораженных долей вымени.

Бактериологическое исследование включает в себя микроско­пию мазков-отпечатков, окрашенных по Граму, и люминесцент­ную микроскопию с применением флуоресцирующей сыворотки. Посевы для выделения культуры производят из всех присланных тканей и органов на МПА, МПБ, МППБ, МППАс 1 % глюкозы и 2...3 % глицерина, переваром Мартена. Заражают морских свинок, белых мышей, голубей.

Морфология. Возбудитель — мелкая полиморфная па­лочка длиной 0,5...2,0 мкм. Хорошо окрашивается всеми анилино­выми красками. Грамположительна, подвижна, споры и капсулы не образует.

Культуральные свойства. Аэроб или факультатив­ный анаэроб; оптимальные рН 7,2..,7,4, температура 37 °С. Рост отмечают через 24...48 ч. В жидкой среде рост характеризуется едва заметным помутнением с образованием слизистого осадка. На плотных средах образуются мельчайшие росинчатые колонии. На кровяном агаре вокруг колоний узкая зона гемолиза. Типич­ные колонии на плотных средах пересевают для получения чистой культуры.

Биохимическую активность культуры изучают на средах с угле­водами. Возбудитель листериоза сбраживает с образованием кис­лоты без газа глюкозу, рамнозу и салицин. Не сбраживает дуль-цит, инулин, сорбит. Индикаторные среды с лакмусом, метилро-том обесцвечивает.

Листерии представлены двумя основными серотипами: «грызу­нов» и «жвачных». Они имеют соматические О- и жгутиковые Н-антигены. О-антиген содержит 4 термолабильных (I, II, IV, V) и вариабельный (III) антигены; Н-антиген содержит антигены А, В, C,D.

Биопроба. К листериозу восприимчивы белые мыши мас­сой не менее 18 г, морские свинки и голуби. Заражают их подкож­но выделенной культурой или взвесью растертой ткани органов, присланных в лабораторию. При заражении у морских свинок используют конъюнктивальную пробу: на конъюнктиву глаза нано­сят две капли испытуемой культуры, затем слегка массируют веки ватным тампоном. Вирулентные штаммы листерий на 2...4 сут вы­зывают гнойный кератоконъюнктивит. При подкожном зараже­нии инъецируют суспензию тканей органов в дозе 0,3...0,5 мл. Обязательно используют суспензию головного мозга. При поло­жительной биопробе животные гибнут через 2...6 сут. Для повы­шения эффективности биопробы белым мышам за 2...3 ч до зара­жения внутрибрюшинно в дозе 5 мг вводят кортизон. При вскры­тии обнаруживают множественные некротические очажки в пече­ни, селезенке, почках. Срок наблюдения за зараженными животными 8 сут.

Паренхиматозные органы павших животных исследуют бакте­риологически. Выделенную чистую культуру идентифицируют. Для идентификации культуры используют также серологический метод — РА на стекле со специфической антилистериозной сы­вороткой в разведении 1: 50. Антигеном в реакции служит сус­пензия (смыв с агара) суточной культуры на физиологическом растворе (около 10...15 млрд микробных тел в 1 мл). На чистое обезжиренное предметное стекло наносят одну каплю полива­лентной сыворотки и отдельно каплю физиологического раство­ра (контроль). К ней добавляют одну каплю антигена, быстро пе­ремешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, затем плавно покачивают круговыми движениями. Учет реакции в течение 3 мин: положительный ре­зультат—появление хлопьев в капле с сывороткой, отрицатель­ный — в контроле (в капле с физиологическим раствором без сы­воротки): равномерное помутнение без хлопьевидного агглюти-ната. Запоздалую реакцию не учитывают. Серотип идентифици­руют при использовании типовых сывороток. Видовую принадлежность возбудителя устанавливают также просматрива­нием препаратов-мазков из культуры или непосредственно из патологического материала, обработанных флуоресцирующей специфической сывороткой.

Для серологической диагностики направляе­мые в лабораторию пробы крови (или сыворотки) от животных из хозяйств со специфическим антигеном исследуют методом РСК.

Биопрепараты. Сухая живая вакцина против листериоза сельскохозяйственных животных из штамма АУФ: представляет собой культуру лиофильно высушенного аттенуированного штам­ма листерий первого серотипа. Вакцину контролируют на чистоту роста, безвредность и иммуногенность (на кроликах).

Листериозные диагностические агглютинирующие сыворотки.

Листериозные флуоресцирующие сыворотки.

Вакцина из двух серотипов листерий.

Тема 19. ПСЕВДОМОНАДЫ

Возбудитель сапа (Pseudomonas mallei). Открыт Леффлером и Шютцем (1882). Принадлежит к семейству Brucellaceae. Вызывает заболевание у непарнокопытных животных (лошадь, осел, мул, лошак), а также отмечены случаи у хищных животных — львов, тигров, рысей. К сапу восприимчив и человек.

Сап протекает чаще в хронической форме и характеризуется развитием сапных узелков, склонных к казеозному распаду. Кли­нически может проявляться серозно-гнойным истечением из но­совых отверстий, образованием язв на слизистой оболочке носо­вой перегородки, увеличением подчелюстных лимфоузлов. При кожной форме сапа образуются язвы с ровными краями и сало-видным дном. Заражение происходит контактным путем. При по­дозрении на сап следует строго соблюдать правила личной профи­лактики и техники безопасности, как положено в работе с особо опасными материалами.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию при жизни животного посылают гнойный экссудат из язв, истечения из носа, посмертно — кусочки легких, печени, лимфоузлов, селезенки, пораженные сапными узелками. Гной из язв берут стерильным ватным тампоном и помещают его в про­бирку. Из присланного материала готовят препараты-мазки, окра­шивают их по Граму, а также синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза. Для выделения возбудителя делают посевы на МПА, МПБ с 2,5 % глицерина (рН 7,0...7,2), а также на глицери-низированный картофель. Культивируют при 37 X. Аэроб. Для биологической пробы используют морскую свинку (самца) или кошку.

Микроскопия. В препаратах-отпечатках или мазках об­наруживают одиночно расположенные полиморфные грамотрица-тельные палочки. При окраске синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза в клетках хорошо видна зернистость. Бактерия сапа неподвижна, споры и капсулу не образует.

Рост на питательных средах появляется на 1...2-е сутки, иногда позже.

На МПА с глицерином вырастают слизистые, вязкие колонии серовато-белого цвета с перламутровым оттенком. В глицерино­вом МПБ растет в виде равномерного помутнения, по мере даль­нейшего роста культуры образуется осадок, который при встряхи­вании пробирки поднимается штопорообразно. Встречаются штаммы, растущие в жидкой среде с образованием пленки.

На глицеринизированном картофеле P. mallei растет характер­но: сначала появляются мелкие колонии в виде капелек с желтова­тым оттенком, которые, разрастаясь, сливаются и образуют соч­ный слизистый «медовый» налет. В первые три дня цвет микроб­ной массы янтарно-желтый, затем он становится буро-коричневым. В мазках из культуры часто наблюдают наряду с короткими палочками цепочки, состоящие из 4...8 клеток.

Биопроба. Основана на внутрибрюшинном заражении морской свинки взвесью в физиологическом растворе растертого патологического материала. На 3...4-е сутки после заражения раз­вивается характерный для сапного процесса клинический при­знак — гнойный орхит (и периорхит). На месте инъекции развива­ется и воспалительный процесс с образованием язвы. В случаях возможного загрязнения исследуемого материала посторонней микрофлорой заражение проводят подкожно в дозе 3...5 мл. Ги­бель животных наступает на 8... 15-е сутки.

При развитии орхита, не ожидая гибели, свинку убивают, вскрывают, бактериологически исследуют, выделяют чистую культуру из очагов поражения внутренних органов и семенников.

К сапному микробу чувствительны кошки, но с ними работать опасно, так как при развитии сапного процесса у них поражаются верхние дыхательные пути и при чихании, фырканьи воспали­тельный экссудат распространяется в окружающую среду и пред­ставляет опасность заражения работающего персонала. Поэтому кошек заражают в исключительных случаях, имея на это специ­альное разрешение.

При отсутствии клинических признаков сапа массовое обсле­дование лошадей осуществляют методом РСК, а в условиях хозяй­ства—аллергическим методом. РСК. выявляет активную форму течения сапного процесса. Все формы инфекционного процесса (инкапсуляция, обызвествление очагов) выявляются аллергичес­кой пробой, обычно глазной маллеинизацией.

Биопрепараты. Маллеин — диагностический сапной ал­лерген: культуру возбудителя выращивают в гл и церинизирован­ном бульоне в течение 4мес, стерилизуют автоклавированием, фильтруют через фильтр Зейтца, контролируют на стерильность, безвредность — на белых мышах, специфичность — на здоровых лошадях, стандартизуют по активности в единицах действия на лабораторных животных.

Сапной антиген для РСК: агаровую культуру возбудителя смы­вают фенолизированным физиологическим раствором, стерилизу­ют автоклавированием, отстаивают. В качестве антигена исполь­зуют свободную от клеток культуральную жидкость, проверенную на стерильность, специфичность и активность.

Позитивная сапная сыворотка: предназначена для определения активности антигена (РСК) и в качестве контроля при постановке РСК. Получают гипериммунизацией лошадей.

Возбудитель мелиоидоза (Pseudomonas pseudomallei). Принадле­жит к семейству Pseudomonaceae, роду Actinobacillus. Вызывает са-пополобное заболевание, встречающееся нечасто, но зарегистри­рованное во многих странах различных континентов. К мелиоидо-зу восприимчивы мелкий рогатый скот, свиньи, обезьяны, собаки, кошки, кролики, морские свинки, а также человек. Из организма больного возбудитель выделяется во внешнюю окружающую среду с носовым гнойно-слизистым истечением, с отделениями при кожных поражениях, с мочой и фекалиями. Переносчиками воз­будителя могут быть кровососущие насекомые. Продолжитель­ность болезни составляет 8...30 сут; как правило, летальный исход. Птицы и холоднокровные животные не восприимчивы.

Лабораторная диагностика; патологический ма­териал—трупы мелких животных, экссудаты, кусочки паренхи­матозных органов крупных животных (если нельзя труп послать целиком). Готовят препараты, часть окрашивают по Граму и Ро­мановскому — Гимза, часть используют для люминесцентной микроскопии. Производят посев на МПБ и МПА с глицерином. Эмульсией из патматериала заражают морскую свинку или крысу, кролика.

Морфология. Возбудитель палочковидной формы, раз­мером 2...6мкм, в диаметре 0,5...1 мкм. Имеет сходство с бактери­ей сапа, полиморфный. В молодой культуре встречаются цепочки длиной 15...20 мкм. В мазках из старых культур имеет форму кок-кобактерий. Спору и капсулу не образует. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамотрицателен. В мазках из па­тологического материала возможна биполярная окраска. Подвиж­ный лофотрих.

Культивирование. Проводят на средах с глицерином (рН 6,8...7,0) при температуре 37 °С в аэробных условиях. Через сутки на МПА с 5 % глицерина появляются R-, S- и М-формы ко­лоний, сочные, слизистые. R-формы складчатые, на поверхности с зубчатыми неровными краями. В МПБ с глицерином рост про­является равномерным помутнением среды с образованием тол­стой морщинистой пленки. При старении культура приобретает коричневую окраску. Хорошо растет на глицеринизированном картофеле и кровяном агаре. Встречаются гемолитические штам­мы.

Возбудитель мелиоидоза расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, маннит, дульцит, декстрин. Обладает протеолитическими свой­ствами — ферментирует (разжижает) желатину, яичный белок, пептонизирует молоко.

Антигенная структура возбудителя мелиоидоза ха­рактеризуется наличием соматического О- и жгутикового Н-анти-генов. О-антиген имеет родство с антигенами бактерии сапа и сальмонелл, то есть не обладает специфичностью. У P. pseudomallei обнаружены К- и М-антигены, обладающие типоспецифичнос-тью, что используют в серологической идентификации методом РА с соответствующими типоспецифическими анти сывороткам и.

Морских свинок, крыс и кроликов заражают суспензией при­сланного материала или выделенной из него бактериальной культурой. После гибели животных трупы их вскрывают и исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифициру­ют по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохи­мическим свойствам.

Серологическую диагностику осуществляют методом РА с сыворотками больных хроническим мелиоидозом, но антигенное родство возбудителя с бактерией сапа снижает практическую значимость РА.

Возбудитель псевдомоноза норок {Pseudomonas aeruginosa). При­надлежит к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas.

Псевдомоноз — остропротекающее инфекционное заболева­ние. Характеризуется геморрагической пневмонией, признаками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у животных других видов возбудитель может служить причиной пневмоний, послеродовых, постхирургических осложнений.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на пи­тательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам.

В лабораторию направляют пораженные участки легких, регио­нарные лимфатические узлы, селезенку, печень, почки.

Микроскопия. P. aeruginosa в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают в форме прямых или изогнутых грамотрица-тельных палочек длиной 0,5...1,4мкм, шириной 0,2...0,4мкм, без капсул и спор. Образует жгутики. Располагается в виде одиночных клеток, коротких цепочек.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель—аэроб, температурный оптимум 35...37°С, к пита­тельным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на МПА и в МПБ. Рост через 24 ч. В МПБ проявляется помутне­нием среды, образованием поверхностной пленки и серовато-бе­лого осадка. За счет пигмента среда окрашена в сине-зеленый цвет; по мере старения культуры цвет колоний становится бурым. На МПА возбудитель формирует в основном два типа колоний: крупные (диаметр'2...5мм), полупрозрачные, сероватые, гладкие, с плоскими краями и приподнятым центром, а также мелкие ше­роховатые. Штаммы, выделенные из респираторного и мочеполо­вого трактов, могут образовывать слизистые колонии. Среда вок­руг колоний окрашена за счет пигмента в сине-зеленый цвет. Воз­будитель синтезирует четыре типа пигмента: пиоцианин (сине-зе­леный или желто-зеленый), флуоресцеин, пиорубин и черно-бурый пигмент. Для культивирования P. aeruginosa при пер­вичной изоляции из исследуемого материала используют специ­альные селективные среды с антибиотиками.

У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Для P. aeruginosa характерны следующие признаки: образование аргининдигидролазы, оксидазы, гидролиз желатины, расщепление глюкозы, бета-аланина, D-, L-аспарагина, денитрификация и способность к росту при 41 "С.

Вид гетерогенен по соматическим О-антигенам. Для иденти­фикации на уровне О-серогруппы используют РА на стекле, при­чем исследуют только культуры, у которых отмечены минимум два из трех физиологических признаков, характерных для вида: обра­зование пигмента пиоцианина, расщепление глюкозы, рост при 41...42 °С. Используют набор из 3 поливалентных и 11 моновален­тных сывороток. Антигеном служит 18...20-часовая агаровая куль­тура P. aeruginosa, инактивированная кипячением в водяной бане в течение 1,5ч [концентрация (3...5)10⁹/мл]. Антиген первоначаль­но исследуют с поливалентными сыворотками, при получении по­ложительного результата — с моновалентными, входящими в со­став той или иной поливалентной сыворотки. Результат учитыва­ют через 3...6 мин.

Биопрепараты. Моновалентная формолквасцовая вак­цина против псевдомоноза норок.

Диагностические О-агглютинируюшие сыворотки для серо-групповой идентификации P. aeruginosa включают в себя три по­ливалентные сыворотки - № 1 (03, 04, 05, 06, 07), № 2 (02, 08, 09), №3 (010, 011, 012) и одиннадцать соответствующих моновалент- • ных сывороток, которые предназначены для идентификации Р. aeruginosa на уровне О-серогруппы.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1175 | Нарушение авторских прав