Тема 18. ВОЗБУДИТЕЛИ РОЖИ И ЛИСТЕРИОЗА
Возбудитель рожи свиней {Erysipelothrix rhusiopathiae). Открыт Па-стером и Тюйе (1882). Принадлежит к семейству Corynebacteria-сеае, роду Erysipelothrix. Заболевание у свиней отмечают в возрасте от 3 мес до! года, у ягнят — старше 3...4 нед. Другие виды животных болеют редко. К возбудителю восприимчив и человек. Рожа свиней протекает в септической форме, внешне проявляется образованием красных пятен на коже (крапивница), лихорадкой.
Бактериологическое исслед о в а н и е. Патологическим материалом служит труп животного или кусочки органов—печени с желчным пузырем, селезенки, почки, трубчатая кость. При подозрении на хроническую форму исследуют кровь из сердца и эндокарда, а при наличии артритов — суставную жидкость. Кусочки органов консервируют в 30...40 %-м водном растворе глицерина или насыщенном растворе поваренной соли. Трубчатую кость, очищенную от мягких тканей, обертывают марлей, пропитанной 2...3 %-м раствором фенола.
Препараты-отпечатки из патологического материала окрашивают по Граму. Для люминесцентной микроскопии из паренхиматозных органов готовят суспензию (взвесь растертой ткани) на физиологическом растворе NaCl. Тонкие мазки из этой суспензии красят флуоресцирующей сывороткой. Пастеровской пипеткой делают посев на МПБ, МПА, МПЖ; инкубируют при 37 °С. Выросшую в бульоне культуру исследуют на подвижность и используют для определения биохимических свойств. Смыв агаровой культуры применяют в качестве антигена для РА. Суспензией из тканей органов заражают голубя или белую мышь. Павших животных вскрывают и исследуют бактериологически (рис. 62).
Морфология. Бактерия рожи свиней — тонкая прямая или слегка изогнутая палочка длиной 2...2,5 мкм. Бактерии располагаются одиночно, попарно или в виде скоплений. При хроническом течении болезни в мазках с пораженных сердечных клапанов (эндокарда) или других органов возбудитель имеет вид длинных нитей, иногда переплетающихся, но не ветвящихся. По Граму окрашивается положительно, споры и капсулы не образует. Неподвижен.
При люминесцентной микроскопии возбудителя рожи определяют по наличию специфического свечения морфологически типичных микробных клеток интенсивностью не ниже чем на три креста. При сомнительном или отрицательном результате диагноз уточняют люминесцентной микроскопией выросших на средах культур, выделенных из патологического материала.
Культурально-биохимические свойства. Возбудитель рожи неприхотлив к питательным средам. Для оптимальных условий роста нужны среды, содержащие 1...2 % глюкозы или кровяную сыворотку с рН 7,2...7,6; температура культивирования 37 °С. Бактерии — аэробы или факультативные анаэробы. В жидкой питательной среде через 24...48 ч образуется едва заметное помутнение, незначительный осадок, который при встряхивании напоминает муаровую ткань (ленту).
На МПА возбудитель растет в виде очень мелких росинчатых прозрачных колоний. Типичной является гладкая колония с ровными краями, но встречаются измененные О- и R-формы, особенно при хроническом течении болезни. Для патогенных штаммов характерна S-форма колоний. В МПЖ по уколу посева через несколько дней появляется рост в виде «ершика» без разжижения среды.
Пышный рост наблюдают в полужидком агаре (0,1...0,15 %). Элективной средой для выделения рожистого микроба служит среда Сент-Иваньи. Полученную культуру микроскопируют как в обычном световом микроскопе, так и люминесцентным методом, идентифицируют по культурально-биохимическим свойствам, пластинчатым методом РА с позитивной сывороткой в разведении 1: 50.
Бактерия рожи свиней обладает слабовыраженной биохимической активностью — не сбраживает салицин, не образует ката-лазы. С образованием кислоты и газа сбраживает глюкозу, лактозу, галактозу. Образует сероводород. По антигенной структуре бактерии рожи свиней относят к трем серологическим типам: А, В и N. Серотип N обладает общим видовым антигеном, серотипы А и В отличаются своими гаптенами. На основании серологических исследований (РА, РП, РГА) штамм бактерии рожи свиней относят либо к серотипу А (более вирулентному), либо к менее вирулентному для свиней серотипу В, обладающему выраженными иммуногенными свойствами.
Патоген н ость. Определяют заражением выделенной культуры возбудителя голубей и белых мышей. Голубей заражают внутримышечно (чаще в грудную мышцу) в дозе 0,2...0,3 мл, гибель наступает через З...6сут; белых мышей — подкожно в дозе 0,2 мл, гибель наступает через 2...4сут. Наблюдение за зараженными животными ведут 6...7сут. При заражении белых мышей следует исключить Erysipelothrix murisepticum — возбудителя септицемии мышей, по морфологическим и культуральным свойствам сходного с бактериями рожи свиней. Е. murisepticum непатогенна для голубей. При бактериологических исследованиях на рожу свиней следует учитывать возможность обнаружения возбудителя листериоза, имеющего морфологические, тинкториаль-ные и культуральные свойства, сходные со свойствами бактерии рожи свиней.
Биопрепараты. Концентрированная гидрокидалюми-ниевая формолвакцина против рожи свиней: содержит возбудителя серовара В, выращенного в бульоне Хоттингера, инактиви-рованного формалином, сорбированного на гидроксиде алюминия.
Депонированная вакцина против рожи свиней представляет собой живую культуру матрикса Конева, сорбированную на гидроксиде алюминия.
Сухая живая вакцина против рожи свиней ВГНКИ из штамма ВР-2 представляет собой лиофильно высушенную культуру вакцинного штамма ВР-2.
Лечебно-профилактическая сыворотка против рожи свиней: получают гипериммунизадией свиней; контролируют на стерильность, безвредность и активность на белых мышах и признают активной, если она предохраняет от гибели мышей в дозах 0,01...0,02 и 0,03 мл.
Сухие рожистые люминесцирующие сыворотки для прямого метода иммунофлуоресценции: предназначены для серологической идентификации возбудителя непосредственно в материале и в культуре.
Возбудитель листериоза (Listeria monocytogenes). Возбудитель открыт Марреем (1926). Назван в 1940 г. в честь Листера. Принадлежит к семейству Corynebacteriaceae, роду Listeria. Вызывает заболевание грызунов, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, некоторых видов пушных зверей, птицы. Восприимчив к листериозу и человек. Болезнь протекает в септической форме, но нередко характеризуется проявлением расстройства центральной нервной системы.
Лабораторная диагностика листериоза осуществляется, как правило, бактериологическими и серологическими методами.
Бактериологическое исследование. В лабораторию посылают свежий труп мелкого животного целиком. От трупов крупных животных (лошадь, крупный рогатый скот, овца) — головной мозг и кусочки паренхиматозных органов, а в случае аборта — абортированный плод или его органы. При наличии мастита пробы молока берут из пораженных долей вымени.
Бактериологическое исследование включает в себя микроскопию мазков-отпечатков, окрашенных по Граму, и люминесцентную микроскопию с применением флуоресцирующей сыворотки. Посевы для выделения культуры производят из всех присланных тканей и органов на МПА, МПБ, МППБ, МППАс 1 % глюкозы и 2...3 % глицерина, переваром Мартена. Заражают морских свинок, белых мышей, голубей.
Морфология. Возбудитель — мелкая полиморфная палочка длиной 0,5...2,0 мкм. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками. Грамположительна, подвижна, споры и капсулы не образует.
Культуральные свойства. Аэроб или факультативный анаэроб; оптимальные рН 7,2..,7,4, температура 37 °С. Рост отмечают через 24...48 ч. В жидкой среде рост характеризуется едва заметным помутнением с образованием слизистого осадка. На плотных средах образуются мельчайшие росинчатые колонии. На кровяном агаре вокруг колоний узкая зона гемолиза. Типичные колонии на плотных средах пересевают для получения чистой культуры.
Биохимическую активность культуры изучают на средах с углеводами. Возбудитель листериоза сбраживает с образованием кислоты без газа глюкозу, рамнозу и салицин. Не сбраживает дуль-цит, инулин, сорбит. Индикаторные среды с лакмусом, метилро-том обесцвечивает.
Листерии представлены двумя основными серотипами: «грызунов» и «жвачных». Они имеют соматические О- и жгутиковые Н-антигены. О-антиген содержит 4 термолабильных (I, II, IV, V) и вариабельный (III) антигены; Н-антиген содержит антигены А, В, C,D.
Биопроба. К листериозу восприимчивы белые мыши массой не менее 18 г, морские свинки и голуби. Заражают их подкожно выделенной культурой или взвесью растертой ткани органов, присланных в лабораторию. При заражении у морских свинок используют конъюнктивальную пробу: на конъюнктиву глаза наносят две капли испытуемой культуры, затем слегка массируют веки ватным тампоном. Вирулентные штаммы листерий на 2...4 сут вызывают гнойный кератоконъюнктивит. При подкожном заражении инъецируют суспензию тканей органов в дозе 0,3...0,5 мл. Обязательно используют суспензию головного мозга. При положительной биопробе животные гибнут через 2...6 сут. Для повышения эффективности биопробы белым мышам за 2...3 ч до заражения внутрибрюшинно в дозе 5 мг вводят кортизон. При вскрытии обнаруживают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. Срок наблюдения за зараженными животными 8 сут.
Паренхиматозные органы павших животных исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифицируют. Для идентификации культуры используют также серологический метод — РА на стекле со специфической антилистериозной сывороткой в разведении 1: 50. Антигеном в реакции служит суспензия (смыв с агара) суточной культуры на физиологическом растворе (около 10...15 млрд микробных тел в 1 мл). На чистое обезжиренное предметное стекло наносят одну каплю поливалентной сыворотки и отдельно каплю физиологического раствора (контроль). К ней добавляют одну каплю антигена, быстро перемешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, затем плавно покачивают круговыми движениями. Учет реакции в течение 3 мин: положительный результат—появление хлопьев в капле с сывороткой, отрицательный — в контроле (в капле с физиологическим раствором без сыворотки): равномерное помутнение без хлопьевидного агглюти-ната. Запоздалую реакцию не учитывают. Серотип идентифицируют при использовании типовых сывороток. Видовую принадлежность возбудителя устанавливают также просматриванием препаратов-мазков из культуры или непосредственно из патологического материала, обработанных флуоресцирующей специфической сывороткой.
Для серологической диагностики направляемые в лабораторию пробы крови (или сыворотки) от животных из хозяйств со специфическим антигеном исследуют методом РСК.
Биопрепараты. Сухая живая вакцина против листериоза сельскохозяйственных животных из штамма АУФ: представляет собой культуру лиофильно высушенного аттенуированного штамма листерий первого серотипа. Вакцину контролируют на чистоту роста, безвредность и иммуногенность (на кроликах).
Листериозные диагностические агглютинирующие сыворотки.
Листериозные флуоресцирующие сыворотки.
Вакцина из двух серотипов листерий.
Тема 19. ПСЕВДОМОНАДЫ
Возбудитель сапа (Pseudomonas mallei). Открыт Леффлером и Шютцем (1882). Принадлежит к семейству Brucellaceae. Вызывает заболевание у непарнокопытных животных (лошадь, осел, мул, лошак), а также отмечены случаи у хищных животных — львов, тигров, рысей. К сапу восприимчив и человек.
Сап протекает чаще в хронической форме и характеризуется развитием сапных узелков, склонных к казеозному распаду. Клинически может проявляться серозно-гнойным истечением из носовых отверстий, образованием язв на слизистой оболочке носовой перегородки, увеличением подчелюстных лимфоузлов. При кожной форме сапа образуются язвы с ровными краями и сало-видным дном. Заражение происходит контактным путем. При подозрении на сап следует строго соблюдать правила личной профилактики и техники безопасности, как положено в работе с особо опасными материалами.
Бактериологическое исследование. В лабораторию при жизни животного посылают гнойный экссудат из язв, истечения из носа, посмертно — кусочки легких, печени, лимфоузлов, селезенки, пораженные сапными узелками. Гной из язв берут стерильным ватным тампоном и помещают его в пробирку. Из присланного материала готовят препараты-мазки, окрашивают их по Граму, а также синью Леффлера или по Романовскому — Гимза. Для выделения возбудителя делают посевы на МПА, МПБ с 2,5 % глицерина (рН 7,0...7,2), а также на глицери-низированный картофель. Культивируют при 37 X. Аэроб. Для биологической пробы используют морскую свинку (самца) или кошку.
Микроскопия. В препаратах-отпечатках или мазках обнаруживают одиночно расположенные полиморфные грамотрица-тельные палочки. При окраске синью Леффлера или по Романовскому — Гимза в клетках хорошо видна зернистость. Бактерия сапа неподвижна, споры и капсулу не образует.
Рост на питательных средах появляется на 1...2-е сутки, иногда позже.
На МПА с глицерином вырастают слизистые, вязкие колонии серовато-белого цвета с перламутровым оттенком. В глицериновом МПБ растет в виде равномерного помутнения, по мере дальнейшего роста культуры образуется осадок, который при встряхивании пробирки поднимается штопорообразно. Встречаются штаммы, растущие в жидкой среде с образованием пленки.
На глицеринизированном картофеле P. mallei растет характерно: сначала появляются мелкие колонии в виде капелек с желтоватым оттенком, которые, разрастаясь, сливаются и образуют сочный слизистый «медовый» налет. В первые три дня цвет микробной массы янтарно-желтый, затем он становится буро-коричневым. В мазках из культуры часто наблюдают наряду с короткими палочками цепочки, состоящие из 4...8 клеток.
Биопроба. Основана на внутрибрюшинном заражении морской свинки взвесью в физиологическом растворе растертого патологического материала. На 3...4-е сутки после заражения развивается характерный для сапного процесса клинический признак — гнойный орхит (и периорхит). На месте инъекции развивается и воспалительный процесс с образованием язвы. В случаях возможного загрязнения исследуемого материала посторонней микрофлорой заражение проводят подкожно в дозе 3...5 мл. Гибель животных наступает на 8... 15-е сутки.
При развитии орхита, не ожидая гибели, свинку убивают, вскрывают, бактериологически исследуют, выделяют чистую культуру из очагов поражения внутренних органов и семенников.
К сапному микробу чувствительны кошки, но с ними работать опасно, так как при развитии сапного процесса у них поражаются верхние дыхательные пути и при чихании, фырканьи воспалительный экссудат распространяется в окружающую среду и представляет опасность заражения работающего персонала. Поэтому кошек заражают в исключительных случаях, имея на это специальное разрешение.
При отсутствии клинических признаков сапа массовое обследование лошадей осуществляют методом РСК, а в условиях хозяйства—аллергическим методом. РСК. выявляет активную форму течения сапного процесса. Все формы инфекционного процесса (инкапсуляция, обызвествление очагов) выявляются аллергической пробой, обычно глазной маллеинизацией.
Биопрепараты. Маллеин — диагностический сапной аллерген: культуру возбудителя выращивают в гл и церинизированном бульоне в течение 4мес, стерилизуют автоклавированием, фильтруют через фильтр Зейтца, контролируют на стерильность, безвредность — на белых мышах, специфичность — на здоровых лошадях, стандартизуют по активности в единицах действия на лабораторных животных.
Сапной антиген для РСК: агаровую культуру возбудителя смывают фенолизированным физиологическим раствором, стерилизуют автоклавированием, отстаивают. В качестве антигена используют свободную от клеток культуральную жидкость, проверенную на стерильность, специфичность и активность.
Позитивная сапная сыворотка: предназначена для определения активности антигена (РСК) и в качестве контроля при постановке РСК. Получают гипериммунизацией лошадей.
Возбудитель мелиоидоза (Pseudomonas pseudomallei). Принадлежит к семейству Pseudomonaceae, роду Actinobacillus. Вызывает са-пополобное заболевание, встречающееся нечасто, но зарегистрированное во многих странах различных континентов. К мелиоидо-зу восприимчивы мелкий рогатый скот, свиньи, обезьяны, собаки, кошки, кролики, морские свинки, а также человек. Из организма больного возбудитель выделяется во внешнюю окружающую среду с носовым гнойно-слизистым истечением, с отделениями при кожных поражениях, с мочой и фекалиями. Переносчиками возбудителя могут быть кровососущие насекомые. Продолжительность болезни составляет 8...30 сут; как правило, летальный исход. Птицы и холоднокровные животные не восприимчивы.
Лабораторная диагностика; патологический материал—трупы мелких животных, экссудаты, кусочки паренхиматозных органов крупных животных (если нельзя труп послать целиком). Готовят препараты, часть окрашивают по Граму и Романовскому — Гимза, часть используют для люминесцентной микроскопии. Производят посев на МПБ и МПА с глицерином. Эмульсией из патматериала заражают морскую свинку или крысу, кролика.
Морфология. Возбудитель палочковидной формы, размером 2...6мкм, в диаметре 0,5...1 мкм. Имеет сходство с бактерией сапа, полиморфный. В молодой культуре встречаются цепочки длиной 15...20 мкм. В мазках из старых культур имеет форму кок-кобактерий. Спору и капсулу не образует. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамотрицателен. В мазках из патологического материала возможна биполярная окраска. Подвижный лофотрих.
Культивирование. Проводят на средах с глицерином (рН 6,8...7,0) при температуре 37 °С в аэробных условиях. Через сутки на МПА с 5 % глицерина появляются R-, S- и М-формы колоний, сочные, слизистые. R-формы складчатые, на поверхности с зубчатыми неровными краями. В МПБ с глицерином рост проявляется равномерным помутнением среды с образованием толстой морщинистой пленки. При старении культура приобретает коричневую окраску. Хорошо растет на глицеринизированном картофеле и кровяном агаре. Встречаются гемолитические штаммы.
Возбудитель мелиоидоза расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, маннит, дульцит, декстрин. Обладает протеолитическими свойствами — ферментирует (разжижает) желатину, яичный белок, пептонизирует молоко.
Антигенная структура возбудителя мелиоидоза характеризуется наличием соматического О- и жгутикового Н-анти-генов. О-антиген имеет родство с антигенами бактерии сапа и сальмонелл, то есть не обладает специфичностью. У P. pseudomallei обнаружены К- и М-антигены, обладающие типоспецифичнос-тью, что используют в серологической идентификации методом РА с соответствующими типоспецифическими анти сывороткам и.
Морских свинок, крыс и кроликов заражают суспензией присланного материала или выделенной из него бактериальной культурой. После гибели животных трупы их вскрывают и исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифицируют по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам.
Серологическую диагностику осуществляют методом РА с сыворотками больных хроническим мелиоидозом, но антигенное родство возбудителя с бактерией сапа снижает практическую значимость РА.
Возбудитель псевдомоноза норок {Pseudomonas aeruginosa). Принадлежит к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas.
Псевдомоноз — остропротекающее инфекционное заболевание. Характеризуется геморрагической пневмонией, признаками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у животных других видов возбудитель может служить причиной пневмоний, послеродовых, постхирургических осложнений.
Бактериологическое исследование. Включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам.
В лабораторию направляют пораженные участки легких, регионарные лимфатические узлы, селезенку, печень, почки.
Микроскопия. P. aeruginosa в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают в форме прямых или изогнутых грамотрица-тельных палочек длиной 0,5...1,4мкм, шириной 0,2...0,4мкм, без капсул и спор. Образует жгутики. Располагается в виде одиночных клеток, коротких цепочек.
Культурально-биохимические свойства. Возбудитель—аэроб, температурный оптимум 35...37°С, к питательным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на МПА и в МПБ. Рост через 24 ч. В МПБ проявляется помутнением среды, образованием поверхностной пленки и серовато-белого осадка. За счет пигмента среда окрашена в сине-зеленый цвет; по мере старения культуры цвет колоний становится бурым. На МПА возбудитель формирует в основном два типа колоний: крупные (диаметр'2...5мм), полупрозрачные, сероватые, гладкие, с плоскими краями и приподнятым центром, а также мелкие шероховатые. Штаммы, выделенные из респираторного и мочеполового трактов, могут образовывать слизистые колонии. Среда вокруг колоний окрашена за счет пигмента в сине-зеленый цвет. Возбудитель синтезирует четыре типа пигмента: пиоцианин (сине-зеленый или желто-зеленый), флуоресцеин, пиорубин и черно-бурый пигмент. Для культивирования P. aeruginosa при первичной изоляции из исследуемого материала используют специальные селективные среды с антибиотиками.
У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Для P. aeruginosa характерны следующие признаки: образование аргининдигидролазы, оксидазы, гидролиз желатины, расщепление глюкозы, бета-аланина, D-, L-аспарагина, денитрификация и способность к росту при 41 "С.
Вид гетерогенен по соматическим О-антигенам. Для идентификации на уровне О-серогруппы используют РА на стекле, причем исследуют только культуры, у которых отмечены минимум два из трех физиологических признаков, характерных для вида: образование пигмента пиоцианина, расщепление глюкозы, рост при 41...42 °С. Используют набор из 3 поливалентных и 11 моновалентных сывороток. Антигеном служит 18...20-часовая агаровая культура P. aeruginosa, инактивированная кипячением в водяной бане в течение 1,5ч [концентрация (3...5)109/мл]. Антиген первоначально исследуют с поливалентными сыворотками, при получении положительного результата — с моновалентными, входящими в состав той или иной поливалентной сыворотки. Результат учитывают через 3...6 мин.
Биопрепараты. Моновалентная формолквасцовая вакцина против псевдомоноза норок.
Диагностические О-агглютинируюшие сыворотки для серо-групповой идентификации P. aeruginosa включают в себя три поливалентные сыворотки - № 1 (03, 04, 05, 06, 07), № 2 (02, 08, 09), №3 (010, 011, 012) и одиннадцать соответствующих моновалент- • ных сывороток, которые предназначены для идентификации Р. aeruginosa на уровне О-серогруппы.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1237 | Нарушение авторских прав
|