АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема 13. СТАФИЛОКОККИ И СТРЕПТОКОККИ

Стафилококки (Staphylococcus). Принадлежат к порядку Eubacteriales, семейству Micrococcaceae. По современной класси­фикации их разделяют по патогенное™ на три вида: 1) S. aureus — независимо от образуемого пигмента — патогенные; 2) S. epider-midis — условно-патогенные, постоянные обитатели кожи и сли­зистых; 3) S. saprophyticus — непатогенные стафилококки. Среди всех видов этого рода существуют штаммы, которые вызывают у животных различные нагноительные процессы — фурункулы, кар­бункулы, флегмоны, панариции, гнойное воспаление ран, абсцес­сы, сепсис, септикопиемию (см. цв. рис. VIII). Широко распрост­ранен стафилококковый мастит у коров. Патогенные штаммы ста­филококков, попадая в желудочно-кишечный тракт человека, вы­зывают пищевую токсикоинфекцию. Сапрофитные стафилококки, обладающие гнилостными свойствами, обусловли­вают порчу сырья и пищевых продуктов.

Материал для микробиологического ис­следования. В лабораторию посылают асептически взятый гной, содержимое ран, язв, карбункулов, при подозрении на сеп­сис—кровь. Исследуют пробы комбикорма, а при мастите — па-ренхимное молоко.

Стафилококки — шаровидные грамположительные микроор­ганизмы, располагающиеся скоплениями в виде кучек или виног­радных гроздьев. Неподвижны. Споры и капсулы не образуют. Хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красителями. Грам-положительная способность окраски может утрачиваться под воз­действием антибиотиков, сульфамидных препаратов и других факторов. Обнаружение стафилококков в мазке из крови, гноя, раневого содержимого дает основание для постановки диагноза на стафилококковую инфекцию. В других случаях результат микро-скопирования является ориентировочным.

Культурально-биохимические свойства. Стафилококки — аэробы, факультативные анаэробы. Хорошо рас­тут на обычных питательных средах при рН 7,2...7,8. Подщелачи-вание среды до рН 8,0...8,6 заметного влияния на рост микроба не оказывает, при понижении рН рост замедляется, а при рН 5,6...5,8 — прекращается. Среди неспорообразующих микробов стафилококки наиболее устойчивы к различным физическим и химическим воздействиям, что дает возможность использовать их как тест-микробов (объектов) при изучении эффективности де­зинфицирующих веществ. Стафилококки галлофилы растут на среде с концентрацией хлорида натрия до 8...10%. В МПБ они образуют обильное помутнение и слизистый осадок, на МПА — крупные круглые с ровными краями и умеренно выпуклой глян­цевой поверхностью колонии. На плотной среде стафилококки выделяют нерастворимые в воде липохромные пигменты — белый, лимонно-желтый и золотистый. Пигментообразование лучше протекает при рассеянном свете и обильной аэрации. Чистую культуру стафилококка можно получить после посева исследуемо­го материала на 5 %-й кровяной агар с последующей отвивкой ти­пичной колонии. В качестве селективной среды для выделения только стафилококков используют МПА, содержащий 8...10% хлорида натрия и 5 % дефибринированной крови. Некоторые штаммы при этом проявляют четкую зону гемолиза, но большин­ство из них обладает потенциальной гемолитической способнос­тью, что можно выявить, применив специальную методику.

Лизис эритроцитов может быть обусловлен разными типами гемотоксинов бактерий — а, Ь, с, D и др. Это экзотоксины, обла­дающие антигенными и иммуногенными свойствами. Экзотокси­нам стафилококков свойственно также летальное и некротизиру-ющее действие. Эндотоксины стафилококков обладают высокой термостабильностыо (при 100 "С выживают свыше 30 мин) и выра­женным энтеротоксическим действием. МПЖ и свернутую сыво­ротку они разжижают, молоко свертывают и пептонизируют. Фер­ментируют многие углеводы. Считают, что штаммы стафилокок­ка, сбраживающие маннит, являются патогенными. Однако мин-нитферментативная способность микроба (как и образование пигмента) нестабильна.

Для правильного представления об этиологической роли ста­филококков требуется выделить его из исследуемого материала и детально изучить несколько (иногда до 50) колоний, так как мно­гие патогенные штаммы не образуют золотистый пигмент и не вызывают гемолиз на кровяном агаре при обычных условиях. С этой целью чистые культуры стафилококков проверяют по их спо­собности ферментировать маннит, коагулировать цитрированную плазму, выделять фибринолизин и лецитиназу, ДНК-азу, обладать скрытой (потенциальной) гемолитической способностью. Для бо­лее полной характеристики патогенных штаммов определяют у них способность выделять дермонекротоксин, токсин общего дей­ствия и энтеротоксин.

Ферментацию маннита стафилококками определяют путем по­сева на МПБ, содержащий 0,5 % маннита, индикатор Андрэдэ и газовые поплавки. После 1...2-суточной инкубации при 37 "С сре­да с патогенным штаммом микроба краснеет; в газовых поплавках иногда скапливаются пузырьки газа. Это свойство хорошо выяв­ляется на полужидкой среде с теми же компонентами.

Плазмокоагулазную активность определяют в специальной ре­акции — плазмокоагуляции (РПК). Для постановки ее необходи­мы молодые культуры стафилококков; для контроля — заведомо коагулирующий и некоагулирующий штаммы микробов, нативная или сухая нитратная плазма кролика.

Кровь берут из сердца кролика массой 1,5...2 кг, зафиксирован­ного в спинном положении, в объеме 8 мл иглой, надетой на шприц, промытый 5 %-м раствором цитрата натрия. Ее осторожно сливают в пробирку с 2 мл 5 %-го раствора цитрата натрия и осто­рожно перемешивают. Кролику же вводят подкожно 8 мл стериль­ного физиологического раствора. Пробирку с кровью выдерживают при 4 °С до осаждения эритроцитов. Для ускорения процесса цит-ратную кровь можно центрифугировать при оборотах 1500...2000 мин-1. Надосадочная жидкость —это и есть плазма. Срок ее годности при хранении в холодильнике составляет 4...5 сут.

Перед постановкой РПК отсасывают необходимое количество плазмы, разводят ее физиологическим раствором 1: 5, разливают в пробирки по 0,5 мл и вносят в них по 0,5 мл бульонной культуры. При исследовании культур, выращенных на плотной среде, плаз­му разводят 1:10, разливают в пробирки по ] мл и диспергируют в ней 1 петлю агаровой культуры стафилококка. В обоих случаях пробирки встряхивают и помешают в термостат при 37 "С. Учиты­вают результат через 1, 2, 3 и 24 ч. Наличие плотного или желеоб­разного сгустка указывает на положительный результат реакции. Для признания штамма патогенным срок наступления реакции не имеет значения.

Для выявления фибринолитической способности стафилококков пробирки с положительными результатами плазмокоагулирования оставляют в термостате на несколько суток. При наличии фибри-нолизина коагулированная плазма разжижается.

Способность стафилококков продуцировать лецитиназу опреде­ляют разными методами. Наиболее доступен из них следующий: к расплавленному и остуженному до 5О...6О°С М ПА добавляют взби­тые яичные желтки, хорошо размешивают их и выливают в чашки Петри. После застывания (затвердения) среды производят посев испытуемых культур. При росте на этой среде лецитиназоположи­тельные штаммы стафилококков через 24...48 ч образуют вокруг ко­лонии зону помутнения, окруженную радужным венчиком.

Скрытую (потенциальную) гемолитическую способность стафи­лококков выявляют на 5 %-м кровяном МПА. Для этого бактерио­логической петлей по диаметру чашки делают прямой полоской посев бета-гемолитического штамма стафилококка. Затем перпен­дикулярно этой полоске с двух сторон высевают по 4...5 испытуе­мых штаммов стафилококков. После суточного инкубирования при 37 "С некоторые негемолитические штаммы в непосредственной близости к: высеянному по диаметру р"-гемолитическому штамму стафилококка образуют зону четко выраженного гемолиза.

Для определения ДНК-азной активности стафилококков необ­ходимо иметь МПА с рН 8,4...8,6, раствор натриевой соли ДНК (20 мг/мл) в стерильной дистиллированной воде, к которому до­бавлено несколько капель 2 %-го натрия гидроксида (можно хра­нить при 4 "С до 40сут), хлорид кальция (раствор, используемый для инъекций), 1н. раствор соляной кислоты.

К расплавленному и несколько охлажденному МПАдобавляют раствор натриевой соли ДНК из расчета 1... 1,5 мг/мл и стерилизу­ют в водяной бане кипячением 30...40 мин. После охлаждения сре­ды до 5О...6О°С к ней асептично добавляют хлорид кальция из рас­чета 0,8 мг/мл, разливают в чашки Петри по 10... 15 мл. На поверх­ность застывшей среды после ее подсушивания высевают прикос­новением петли в заранее размеченные точки 8...10 испытуемых культур стафилококка и инкубируют 18...20ч при 37 "С. Затем в чашку вносят 4...5 млн 1н. раствора соляной кислоты, которую че­рез 2...3 мин сливают. Результат реакции учитывают, просматри­вая чашки на проходящем рассеянном свете. По наличию просве­чивающих зон вокруг колоний на непрозрачном, мутном серо-бе­лом фоне всего слоя агара делают вывод — культура стафилококка продуцирует ДНК-азу.

Сущность пробы заключается в том, что высокополимерная ДНК под воздействием соляной кислоты выпадает в нежный серо-белый осадок (преципитат). Если микроб выделяет фермент ДНК-азу, то в зоне его действия ДНК деполимеризуется и под влиянием соляной кислоты преципитат не образуется, агар в этой зоне остается прозрачным. Патогенные штаммы стафилококка об­ладают ДНК-азной активностью, вокруг колоний образуется зона просветления — деполимеризация ДНК.

Антигенная структура и фаготипы. У пато­генных стафилококков различают общий видовой протеиновый антиген и три полисахаридных антигена (А, В, С). Среди после­дних известно 15 типоспецифических антигенов (а, Ь, с, d и др.).

В эпизоотологическом отношении важно проведение фаготи-пирования стафилококков. Установлено, что одни фаготипы по­ражают человека, другие преимущественно обнаруживают у жи­вотных. Однако есть фаготипы (например, 42-Д), общие для жи­вотных и человека. Для типирования стафилококков используют специальный международный набор из 22 типов фагов. Этот на­бор можно применять для типирования стафилококков, выделен­ных только из пищевых продуктов (молоко, творог). Для типиро­вания стафилококков, выделенных из других источников живот­ного происхождения, используют другие типы фагов.

Стрептококки (Streptococcus). Принадлежат к порядку Eubacteriales, семейству Lactobacillaceae. По классификации Берд-жи стрептококки подразделяют на три группы: 1) гноеродные гемолитические — S. pyogenes (возбудители различных гнойно-вос­палительных процессов — абсцессов, флегмон, сепсиса), S. agaiac-tiae — возбудитель мастита коров, S. equi ~ возбудитель мыта ло­шадей; 2) зеленящие стрептококки —- S. viridans (термофильные, фекальные и др.); 3) молочнокислые стрептококки — S. lactis, S. cremoris. В основу современной классификации положен прин­цип антигенной структуры микроба. По группоспецифическим полисахаридным антигенам Лансфилд разделила стрептококки на 17 групп, из которых более детально изучены группы А, В, С и D, имеющие наибольшее практическое значение.

Возбудитель мастита коров. У коров мастит вызывают микро­бы более 80 видов, но основными, наиболее частыми возбудителя­ми являются маститный стрептококк — S. agalacliae (S. mastitidis) и патогенные стафилококки. Часто маститы бывают смешанной этиологии (стрепто-стафилококковые или в сочетании с синег-нойной палочкой, кишечной палочкой и другими микробами).

Микробиологическими исследованиями при мастите выявляют этиологию болезни и свойства возбудителя. Диагноз субклиничес­кого мастита ставят на основании результатов комплексного ис­следования: 1) клинического осмотра всех животных; 2) физико-химических анализов паренхимного молока (бромтимоловая про­ба, проба Уайтсайда, пробы с димастином или мастидином); 3) иммунологических показателей паренхимного молока —повы­шенное фагоцитарное число, положительная кольцевая реакция агглютинации с молоком и стрептококковым антигеном, окра­шенным гематоксилином, повышенное число лейкоцитов (проба отстаивания, разные методы подсчета); 4) бактериологического исследования.

Материал для бактериологического ис­следования. При клинически выраженном мастите в лабо­раторию направляют патологически измененный секрет вымени из каждого соска в отдельной стерильной пробирке. При подозре­нии на субклинический мастит первые порции молока сдаивают (их не используют), соски обрабатывают 70%-м спиртом, а затем в стерильные пробирки отдельно из каждого соска выдаивают не­сколько струек паренхимного молока и закрывают пробкой. Бак­териологическое исследование проводят не позднее 2 ч после взя­тия пробы.

Микроскопия. S. agalacliae — мелкие, чуть сплющенные или овальные кокки, располагающиеся в мазках из проб молока и воспалительного экссудата или жидкой питательной среды длин­ными цепочками (по нескольку десятков клеток). В мазках из культур, выросших на плотных питательных средах, микроб фор­мирует короткие цепочки. Спор и капсул не образует. Хорошо ок­рашивается всеми анилиновыми красками, грамположительный.

Для микроскопирования из исследуемого материала готовят тонкие препараты-мазки (подобно мазкам для гематологического исследования), высушивают их, фиксируют (лучше метиловым ал­коголем) и окрашивают азурэозином (краска Гимза) по методу Романовского или метиленовой синью Леффлера. Эти методы ок­раски дают возможность не только обнаружить стрептококки, но и выявить клеточные элементы в препарате, определить фагоци­тарное число. Обнаружение в мазках стрептококков и повышен­ного количества лейкоцитов указывает на воспаление молочной железы.

Культурально-биохимические свойства. Мас-титный стрептококк — аэроб, на обычных питательных средах ра­стет слабо. Хорошо культивируется на средах с добавлением де-фибринированной крови или кровяной сыворотки. В сывороточ­ном МПБ растет в виде мелкозернистого осадка, при этом среда остается прозрачной. На кровяном МПА образует мелкие (точеч­ные) блестящие сероватые колонии, окруженные зоной гемолиза (гемолиз (3-типа).

Чистую культуру стрептококка получают путем пластинчатого посева секрета на кровяной МПА в чашках Петри, суточного инку­бирования при 37 "С и последующей отвивки (пересева) типичной для данного микроба колонии на сывороточный МПБ и кровяной агар. Полученную культуру идентифицируют с учетом морфологи­ческих, культуральных, биохимических, гемолитических свойств и по антигенной структуре, которую выясняют в реакции диффузи­онной преципитации в агаровом геле или методом флуоресцирую­щих антител со специфическими сыворотками. Агалактийный стрептококк не разжижает МПЖ и свернутую сыворотку, не обесц­вечивает метиленовое молоко; лакмусовое молоко изменяет час­тично. Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, лактозу, са­харозу, мальтозу, салицин. Не ферментирует сорбит и дульцит.

Штаммы, обладающие скрытой гемолитической способностью, видимой зоны гемолиза не образуют. Для выявления их потенци­альной гемолитической активности используют CAMP (КАМП)-метод, получивший свое название по первоначальным буквам фа­милий австралийских исследователей — Кристи, Аткинс и Мунх — Петерсон. Метод заключается в том, что на пластинчатый кровяной агар в чашке Петри по диаметру петлей высевают в виде прямой полоски р-гемолитический стафилококк. Отступив от нее 2...3 мм и перпендикулярно к ней, высевают исследуемые штаммы стрептококков (по 3...4). Сутки их выдерживают при 37 °С. Ага­лактийный стрептококк проявляет гемолиз в зоне, близкой к по­лоске выросшего стафилококка. По антигенной структуре S. agalactiae относят к серогруппе В.

Патогенные свойства. Проявляются при внутри-брюшинном заражении белых мышей и морских свинок.

Возбудитель диплококковой септицемииа {Streptococcus pneumoniae). Вызывает заболевание у молодняка сельскохозяй­ственных животных.

Материал для лабораторного исследова­ния: кровь из сердца, селезёнка, печень, костный мозг, носовые истечения.

Микроскопия. У S.pneumoniae клетки обычно парные, окруженные капсулой, концевые части клеток слегка удлинены. Они также могут располагаться одиночно и в виде коротких цепо­чек. Выделение чистой культуры практикуют методом заражения белых мышей тканевой суспензией внутрибрюшинно.

На глюкозо-кровяном МПА колонии круглые, полупрозрач­ные, плоские, с приподнятым центром и краями, с зоной р-гемо-лиза; в МПБ растет с равномерным помутнением среды. Возбуди­тель обладает гемолитической активностью (цв. рис. IX).

Дифференцируют возбудитель по ферментативной активности, биопробу проводят на белых мышах.

Возбудитель мыта (Streptococcus equl). Мыт — контагиозное за­болевание главным образом молодых лошадей (до двух лет), харак­теризуется катарально-гнойным воспалением слизистой оболочки верхних дыхательных путей, глотки, подчелюстных лимфоузлов.

Для постановки бактериологического диагно­за в лабораторию направляют гной, воспалительный экссудат, истечения из носа. Исследование проводят по общей схеме:

1) микроскопия препаратов-мазков из поступившего материала;

2) посев на питательные среды для выделения чистой культуры
возбудителя и ее идентификации; 3) биологическая проба на бе­
лых мышах и котятах.

Мазки готовят тонким слоем, фиксируют, окрашивают по Гра-му и Романовскому — Гимза. Для S. equi характерно расположение длинными цепочками сплющенных кокков. Величина клеток 0,4... 1 мкм. Окрашивается грамположительно. Неподвижен.

Для выделения чистой культуры делают плас­тинчатый посев на сывороточно-глюкозный агар (на обычных средах не растет). Через 24 ч на агаре мытный стрептококк образует мелкие, просвечивающиеся, похожие на капельки росы колонии. Характерно слияние колоний между собой. На свернутой кровяной сыворотке S. equi растет в виде стекловидных сероватых колоний. На кровяном ага­ре рост в виде мелких колоний с зоной fi-гемолиза. В среде Китга — Тароцци, сывороточном бульоне рост проявляется мелкими крупин­ками, выстилающими дно и стенки пробирки, бульон остается про­зрачным. В мазках из бульонной и агаровой культур цепочки стрепто­кокка короткие — из нескольких клеток или даже по два кокка.

Биохимические свойства. Слабо выражены. Мо­локо простое не свертывает, лакмусовое и метиленовое молоко не обесцвечивает (не редуцирует), не сбраживает лактозу, сорбит и маннит. Отсутствие ферментации перечисленных углеводов по­зволяет дифференцировать мытный стрептококк от гноеродного гемолитического стрептококка (S. pyogenes), который сбраживает лактозу, свертывает молоко, редуцирует метиленовую синь.

Для биопробы используют кошек, особенно котят, кото­рые гибнут от ничтожно малой дозы бульонной культуры при под­кожном или внутрибрюшинном заражении в течение З...Юсут. Выделенную чистую культуру можно идентифицировать при по­мощи мытного антивируса, который представляет собой фильтрат 20-суточной бульонной культуры S. equi. В фильтрате мытный стрептококк не растет, а другие виды стрептококков, например S. pyogenes, растут.

При атипичной форме мыта можно применять РСК с мытным антигеном.

Биопрепараты. Вакцину против диплококковой септи­цемии телят, ягнят и поросят готовят из штаммов S.pneumoniae, выделенных от указанных видов животных. Культуры выращива­ют на полужидком агаре, инактивируют 0,4%-м раствором форма­лина, проверяют на стерильность, безвредность (на морских свин­ках), активность (на белых мышах).

Ассоциированная (поливалентная) вакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят включает в себя кроме P. multocida и S. cholerasuis бактериальную массу S. pneumoniae.

Сыворотку против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят получают гипериммунизацией волов убитыми и живыми культурами возбудителя.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 2850 | Нарушение авторских прав