АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Иммунологические методы исследования

Иммунодиагностика - это использование реакций иммунитета для диагностики инфекционных заболеваний.

Реакции иммунитета - это реакции между антигеном (АГ) и антителом (АТ).Основная их характеристика-это специфичность. Описываются в виде простого уравнения АГ + АТ= результат. Реакции иммунитета в лаборатории применяются в двух направлениях:

- для серологической диагностики, то есть для определения в исследуемом материале (чаще сыворотка крови) неизвестных АТ, используя для этого стандартный антигенный препарат-диагностикум, приготовленный, как правило, из эталонных штаммов микробов;

- для иммуноиндикации - обнаружения в исследуемом материале микробных АГ, то есть определения присутствия антигенов возбудителя, с помощью известного АТ, содержащегося в иммунодиагностических сыворотках.

Реакция агглютинации и ее разновидности. Агглютинация - это склеивание и осаждение микрооргнизмов, эритроцитов или других клеток при действии на них специфических АТ в присутствии электролита. Выделяют две фазы реакции. В первой, специфической фазе происходит взаимодействие АТ с АГ и образование комплекса АГ-АТ. Во-второй, неспецифической комплекс АГ-АТ выпадает в осадок. Это происходит только в присутствии электролита.

Реакцию агглютинации по идентификации ставят как в ориентировочном, так и в развернутом вариантах. Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле с неразведенными или разведенными 1:10 адсорбированными агглютинирующими сыворотками, содержащими антитела одной специфичности. Результаты учитывают невооруженным глазом через 2-5 мин. Реакция считается положительной, если в результате отмечается появление хлопьев, жидкость становится прозрачной. При отрицательном результате-жидкость остается мутной, хлопья не образуются.

При постановке реакции агглютинации по идентификации с неадсорбироваными сыворотками на стекле требуется второй развернутый вариант:иммунную агглютинирующую сыворотку разводят до титра, обязательтно используя разведение до ½ титра. Культура считается идентичной взятой сыворотке, если она агглютинируется ей в разведении ½ титра и выше, так как в этих разведениях содержатся только видовые антитела

Реакцию агглютинации ставят и с целью определения наличия АТ в сывороте больного и определения их количества. В качестве АГ используют диагностикум. В пробирках готовят ряд 2-х кратных разведений сыворотки. В каждую пробирку вносят 1-2 капли диагностикума, помещают их на два часа в термостат при 37⁰С, после чего предварительно учитывают результаты, начиная с контрольных пробирок. Отсутствие агглютинации в контрольных пробирках (помутнение) и наличие хлопьев в опыте свидетельствует о наличии АТ. Диагностически значимым является нарастание титра антител в парных сыворотках больного, взятые в разные дни болезни. Подобная динамика свидетельствует об инфекционном происхождении антител.

Существуют разновидности реакции агглютинации - реакция пассивной геммаглютинации (РПГА, РОПГА).

Пассивная (непрямая) геммаглютинация - это взаимодействие АТ (АГ) с АГ (АТ) предварительно адсорбированными на поверхности эритроцитов. Если комплекс образовался, то эритроциты склеиваются и выпадают в осадок. Реакцию ставят в лунках полистероловых планшетов, в которых готовят разведение парных сывороток, в последних лунках, заведомо положительная сыворотка и физиологический раствор - 2 контроля. Затем последовательно во все лунки с разведениями добавляют антигенный эритроцитарный диагностикум и инкубируют 2 часа. Если произошла гемагглютинация, то эритроциты оседают на дне лунки, заполняя всю лунку (зонтик) Если результат отрицательный, эритроциты оседают в центре (пуговка). Это позволяет установить титр антител и его нарастание. При иммуноиндикации реакцию ставят качественно с антительным эритроцитарным диагностикумом и фильтратом исследуемого материала.

Реакция коагглютинации. Реакцию коагглютинации чаще используют в вирусологии, так как она позволяет обнаружить невидимую на глаз вируснейтрализацию. Основана на том, что Staphylococcus aureus имеет в составе клеточной стенки белок А, способн ый связываться с Fcфрагментом Ig G и Ig M. Активные центры АТ свободны и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами АГ. При постановке реакции на предметное стекло наносят взвесь стафилококков, сенсибилизированных соответствующими АТ, к которой добавляют каплю взвеси исследуемых вирусов. Если АГ соответствуют АТ через 30-40 секунд происходит агглютинация между образовавшимися комплексами АГ-АТ, содержащими белок А.

Реакция торможения пассивной (непрямой) гемагглютинации (РТПГА). РПГА используется для обнаружения АГ возбудителей в исследуемом материале при добавлении к нему диагностической иммунной сыворотки. При наличии гомологичного АГ происходит связывание АТ, а после добавления сенсибилизированных АГ эритроцитов их агглютинации не происходит. Отсутствие гемагглютинации расценивается как положительный результат реакции. Реакцию РТПГА применяют и для обнаружения специфических АТ. Для этого к исследуемой сыворотке добавляют АГ. Если в ней содержатся специфические АТ, то они связываются с АГ. При добавлении эритроцитов сенсибилизированных АТ их склеивания не происходит. Оценку результатов лучше проводить при работе с разведениями парных сывороток.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 826 | Нарушение авторских прав