АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Алгоритм описания колоний.

В результате роста на питательной среде образуются колонии (потомки одной клетки ). Отбирают изолированные колонии и изучают их- это второй этап исследования, направленный на изучение культуральных свойств бактерий. Эти свойства необходимы для идентификации полученной чистой культуры, так как каждому виду микроорганизмов при росте на определенной питательной среде соответствуют определенные культуральные свойства.

Колонии изучают:

- макроскопически: невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете;

- микроскопически -при малом увеличении сухой системы микроскопа..

В проходящем свете изучают:

- величину колоний (крупные, средние, мелкие, карликовые); форму колоний (правильная, неправильная, круглая); прозрачность колоний (прозрачная, непрозрачная).

В отраженном свете:

- определяют цвет (бесцветные или окрашенные); характер поверхности (гладкая, бугристая, блестящая, шероховатая); высоту колоний над поверхностью среды (вдавленная, плоская, возвышающаяся).

Микроскопически:

- край (ровный, неровный); структура (гомогенная, негомогенная).

Изучение колоний заканчивается приготовлением мазка, окраской его по методу Грама и микроскопией. При взятии материала из колонии для приготовления мазка оценивается ее консистенция (мягкая, слизистая, сухая).

Если при микроскопии культура оказалась чистая, то ее пересевают на скошенный агар для накопления.

3 день исследования:

1. Описание характера роста на скошенном агаре:

- однородный, неоднородный; по штриху, сплошной, сливной.

2. Проверка чистоты накопленной культуры.

Готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Если накоплена чистая культура, то она подвергается дальнейшей идентификации. Идентификация бактерий до рода и вида основана на изучении особенностей метаболизма - биохимическая идентификация и антигенного строения -серологическая идентификация.

3. Изучение биохимических свойств.

Биохимические свойства -это способность бактерий расщеплять те или иные субстраты за счет продукции соответствующих ферментов. Для изучения биохимических свойств используют дифференциально-диагностические среды, содержащие различные субстраты (пестрый ряд). В их состав входят среды Гисса с углеводами, лакмусовое молоко, желатин, среды с аминокислотами, МПБ с индикаторами на сероводород и индол.

Сахаролитические свойства изучают на средах Гисса. В их состав входит пептонная вода, субстрат - углевод (различные моно- и полисахариды), многоатомные спирты и индикатор.

Если у бактерий есть ферменты расщепляющие субстрат-углевод, то они выделяют продукты метаболизма (кислоту или кислоту и газ) и индикатор меняет цвет среды при образовании газа, регистрируются разрывы среды.

Протеолитические свойства - изучаются при посеве на желатин и лакмусовое молоко. Если у бактерий есть протеазы, то желатин разжижается. В молоке появляется сгусток кремового цвета, а над ним жидкость - пептонизация молока (за счет того, что протеазы бактерий расщепляют казеин молока до пептона).

Пептолитические свойства. Чаще бактерии способны расщеплять промежуточные продукты распада белков пептоны. Продукты этого процесса - амины (скатол, индол), аминокислоты, газы (сероводород, аммиак, углекислый газ).

Их можно обнаружить с помощью индикаторной бумаги:

- лакмусовая - для выявления аммиака;

- смоченная щавелевоуксусной кислотой - для выявления индола ;-

- смоченная ацетатом свинца - для выявления сероводорода.

Продукты дезаминирования и декарбоксилирования аминокислот, обнаруживают с помощью тест - полос, изменяющих свой цвет при изменении РН среды.

4 день исследования:

1. Учет результатов биохимических тестов.

После того как культура идентифицирована до вида у нее изучают ряд дополнительных признаков, таких как чувствительность к антибиотикам, токсигенность, наличие факторов вирулентности, плазмидный профиль, а также проводят внутривидовую дифференцировку.

2. Результаты биохимической идентификации являются основанием для проведения серологической идентификации. Серологическая идентификация выделенной культуры проводится в реакции агглютинации на стекле с помощью соответствующих иммунных адсорбированных сывороток, выбор которых определяется результатами биохимической идентификации.

Внутривидовая дифференциация это определение принадлежности штамма к тому или иному фаговару, бактериоциногеновару, бактериоциновару, биовару, резистовару и т.д. Она позволяет выявить эпидемиологичяеские связи между штаммами одного вида.

Идентификация выделенной культуры позволяет сделать заключение о том, какой микроорганизм является этиологическим фактором заболевания. При выделении условно-патогенных бактерий необходимо соблюдать критерии этиологической значимости:

- присутствие бактерий в материале из патологического очага в количестве не менее 10⁵КОЕ мл /г;

- повторное выделение из материала той же культуры;

- нарастания титра антител в сыворотке крови больного к аутоштамму в 4 и более раза.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 2537 | Нарушение авторских прав