АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Hfr-клетки. Использование их в картировании бактериальных генов.

Позже были выделены штаммы у кот F-фактор встроен в бакт хромосому.Эти штаммы наз Hfr-штаммы.В этом случае при коньюгации вместе с F-фактором в F-кл-у перен-я бакт хромосома.Реплик-я начин-я с того сайта в кот встроен F-фактор.В результ кл реципиент становятся временно диплоидной и может происходить рекомбинация м\у генами,сод-ся в хромосоме Hfr, и генами хромосомы F-кл.Эта рекомбинация осуществ-я с высокой частотой,отсюда название кл Hfr.Вместе с тем при конь-ции Hfr- и F- кл-к часто происх разрыв коньюгатной трубки и соответственно обрыв хромосомы Hfr.В результ в F- кл целая Hfr- хромосома попадает редко.Кроме того F-фактор, интегрируемый в геном к Hfr, иногда может вырезаться из хромосомы. Кл-а из Hfr превращ в F+ кл-у.Кольцевой F-фактор включающий в себя бакт гены,получил название Fприм фактора.Он способен переносить бакт гены независимо от хромосомы.Это явление наз сексдукцией.Благод этому можно получить у Эширихии Коли частично диплоиды по тем генам,кот включены в Fприм фактор.Это позволяет проводить исследования аллельных отношений у бакт, кот компенсирует в какойто мере отсутствие у них регулярной диплоидной фазы.Между гомологичными участками на Fприм факторе и хромосоме возможна рекомб-я,кот-я приводит к дупликации бакт генов в случае одинарного кроссенговера\ к обмену генами м\у Fприм фактору и бакт хромосомой в случае двойного кроссенговера.

Картирование бактериальной хромосомы. Физическое картирование бактериальных генов методом прерванной конъюгации. Генетическое картирование бактериальной хромосомы. Кольцевая карта хромосом прокариот.

Простота устройства прокариот делает обмен генетическим материалом между ними довольно легким. Помимо жгутиков, бактериальная клетка может нести тонкие отростки – пили. Обычно они нужны, чтобы бактерия прикреплялась к субстрату. Есть особый тип отростков – F-пили. Их наличие кодируется особой плазмидой, называемой F-фактор – независимой небольшой кольцевой ДНК, произвольное число копий которой может находиться в цитоплазме. Соответственно бактерию, которая несет эту плазмиду и как следствие имеет F-пили, можно назвать «мужской» (корректнее - F+ клеткой). Они способны присоединяться к другой бактерии, как правило, своего вида и открываться в нее. Этот процесс называется конъюгацией. Конъюгация служит сигналом к внесению однонитевого разрыва в определенный сайт F-фактора. При этом надрезанный конец проникает в F-пиль и далее в «женскую» клетку-акцептор, где к нему достраивается вторая цепь. В ходе этого процесса в клетке-доноре F-фактор реплицируется по механизму катящегося кольца. Таким образом, F-фактор фактически инфицирует собой клетку, его не имеющую (F- клетку). С определенной вероятностью F-фактор встраивается в бактериальную хромосому, а будучи встроенным, способен вырезаться из нее – это обратимый процесс. Клетки, в которых F-фактор интегрирован в бактериальную хромосому, обозначаются как Hfr-клетки. В результате, описанный выше механизм приводит к тому, что вслед за фрагментом ДНК F-фактора в клетку-акцептор начинает переходить и ДНК бактериальной хромосомы. Однако вся бактериальная хромосома переходит в клетку-акцептор крайне редко, как правило, конъюгация обрывается раньше. В результате, клетка-акцептор получает фрагмент F-фактора (но не целый F-фактор) и фрагмент бактериальной хромосомы. В клетке-акцепторе этот фрагмент ДНК способен с некоторой вероятностью замещать соответствующий ему кусок хромосомы «женской» клетки по механизму репарации двунитевых разрывов, так что бактериальная хромосома становится рекомбинантной. Генетическое картирование:метод прерванной конъюгации удобен при физическом картировании генов, довольно удаленных друг от друга, но не может использоваться при картировании маркеров, находящихся на близком расстоянии. Такие локусы картируют посредством рекомбинационного анализа, основанного на тех же принципах, которые были использованы при постановке трехфакторных скрещиваний.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 944 | Нарушение авторских прав