АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методика исследования

Прочитайте:
  1. II.1. Методика проведения сеанса
  2. III. Данные объективного исследования.
  3. IV. Методика
  4. А. Методика
  5. А. Методика
  6. Адгезивные системы. Классификация. Состав. Свойства. Методика работы. Современные взгляды на протравливание. Световая аппаратура для полимеризации, правила работы.
  7. АЛГОРИТМ ЗАБОРА КАЛА ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.
  8. Анализ и интерпретация данных экспериментально-психологического исследования.
  9. Аналитические исследования.
  10. Анатомо-физиологические особенности кожи, подкожной клетчатки, лимфатических узлов. Методика обследования. Семиотика.

Необходимые реактивы и материалы: КН 42 0PO 44 0, Na 42 0РО 44 0, NaCI, глюкоза, нитросиний тетразолий, гепарин, метиловый спирт, 1% водный раствор метиленового зеленого (в случае загрязнения синей краски необходимо промывание хлороформом через делительную воронку), микропипетки, предметные стекла, микроскоп с иммерсией.

Приготовление раствора:

 

А. 1% 15 М фосфатного буфера с рН 7,2 с добавлением 0,2% раствора глюкозы и 0,6% раствора натрия хлорида (к 25 мл 1/15 М КН 42 0РО 44 0 добавляют 36 мл 1/15 М раствора Na 42 0НРО 44 0; на 61 4 0 мл буфера нужно 120 мг глюкозы и 370 4 0мг NaCI).

Б. 0,1% нитросиний тетразолий в изотоническом растворе натрия хлорида. Для получения красителя необходимы длитель­ное перемешивание и подогревание в горячей воде.

Растворы А и Б фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10°С в течение 2 – 4 недель. Непосредственно перед постановкой теста смешивают равные количества растворов А и Б, смесь нагревают до 30 - 37°С. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной или пластиковой пробирке смеши­вают по 0,1 мл гепаринизированной крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37°С, затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают их на воздухе 3 – 5 мин, фиксируют метиловым спиртом, затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.

Постановка стимулированного НСТ-теста. Гепаринизированмую кровь предварительно инкубируют 25 мин при 37°С со стимулятором (например, 2-миллиардной взвесью стафилококка - штамм 209, над осадочной жидкостью, содер­жащей лимфокины и др.) в равных объемах. Затем проводят вышеописанный тест.

Учет результатов: В клинико-лаборагорной практике при постановке теста восстановления нитросинего тетразолия наиболее широкое распространение получил цитохимический учет результатов, основанный на микроскопическом определении процентного содержания нейтрофилов с гранулами темно-синего цвета формазана в цитоплазме. Обычно анализу подвергают 100 – 200 сегментоядерных нейтрофилов. Показатель индуцированного варианта реакции вычисляют как разницу процентного содержания поглотивших и восстановивших тетразолий клеток после воздействия фактора стимуляции по сравнению с дан­ными, полученными до стимуляции.

Для количественной оценки активности теста по степени активности реакции все клетки делят на 4 группы. К нулевой группе относят нейтрофилы без гранул, в первую группу включают клетки с единичными гранулами или те клетки, в которых площадь окраски формазаном занимает до 25 – 30% цитоплазмы (1 степень активности), во вторую группу нейтрофилы, цитоплазма которых на 30 – 70% занята гранулами формазана (II степень активности); в третью - нейтрофилы, до 100% заполненные гранулами независимо от того, контроли­ровались ядра или нет (III степень активности). Определяют число клеток, принадлежащих в зависимости от активности фермента к каждому из типов. Это число умножают на номер (фактор) типа. Сумма полученных произведений представляет показатель реакции. Таким образом, показатель реакции восстановления нитросинего тетразолия можно рассчитать по формуле:

Показатель НСТ-теста = 1а + 2б + Зс,

где а, б, с - количество клеток соответственно нулевого, 1, 2, 3 типов.


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1342 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.004 сек.)