АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы идентификации Т-лимфоцитов

Прочитайте:
  1. Cовременные методы лечения миомы матки
  2. I. Иммунология. Определение, задачи, методы. История развитии иммунологии.
  3. II) Методы исследования и симптомы поражения III, IV, VI пары ЧН
  4. II. Дополнительные методы
  5. II. Инструментальные методы диагностики
  6. II. Неизотопные методы
  7. III. Методы искусственной физико-химической детоксикации.
  8. III. Перспективные методы лечения инсулинозависимого сахарного диабета
  9. III. Экстракорпоральные методы детоксикации
  10. IV. Многомерные статистические методы

 

Функциональные и количественные тесты.

 

Для определения количества Т-лимфоцитов используются несколько методов:

1. метод розеткообразования с эритроцитами барана – устарел.

2. с применением моноклональных АТ.

3. иммунофлюоресценция в т.ч. проточная.

4. цитофлюоресценция.

5. ИФА.

Т-лимфоциты CD 3 (маркер) 800 - 2200 в 1 мм3 60 – 80%
Т-хелперы CD 4 (маркер) 500 – 1200 в 1 мм3 30 –50%
ЦТЛ / Т-супрессоры CD 8 (маркер) 300 – 600 в 1 мм3 20 –25%
В-лимфоциты CD 19 (маркер) 150 – 600 в 1 мм3 10 –23%
Моноциты / Макрофаги CD 14 (маркер) 80 – 200 в 1 мм3 6 –13%
NK клетки CD 16 (маркер) 100 - 600 в 1 мм3 8 – 22%

 

Функциональные тесты.

 

 

Важны т.к. не всегда снижение количества свидетельствует об их функциональной недостаточности и наоборот.

 

1. РЕАКЦИЯ БЛАСТТРАНСФОРМАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ (РБТЛ).

В асептических условиях из вены берется 5 – 10 мл крови в пробирку, содержащую 100 – 200 ЕД. гепарина. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и оставляют на 60 мин. в термостате при t 37°С для осаждения эритроцитов, которое может быть ускорено добавлением декстрана, желатина и др. После инкубации в термостате надосадочный спой плазмы, обогащен­ный лейкоцитами, отсасывают в отдельную стерильную про­бирку. Определяют число лейкоцитов в 1 мл. Затем взвесь лейкоцитов разводят питательной средой 199 (содержащей 200 ЕД. пенициллина и 100 ЕД. стрептомицина в 1 мл) таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 1.000.000 – 2.000.000 лейкоцитов, 20% аутологичной плазмы и 80% культуральной среды.

Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стериль­ные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена и пропускают газовую смесь, содержащую 5% углекислого газа. Флаконы закрывают пробками и помещают в термостат при t 37°С на 5 – 7 дней. За это время культура лейкоцитов периферической крови освобож­дается от сегментоядерных лейкоцитов, исключая эозинофилы, и содержит преимущественно одноядерные клетки, которые идентифицируются как малые, средние и большие ЛФ, бласты, ретикулярные клетки и макрофаги.

Интенсивность РБТЛ оценивается различными методами.

Морфологический метод заключается в подсчете в окрашен­ном мазке активированных клеток-бластов на 1000 клеток и определении их процентного содержания. Реакция расценивается как положительная, если число активированных клеток составляет не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число активированных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.

Изотопный метод позволяет определить общую активность культур лимфоцитов путем подсчета, включенного в клетки, синтезирующие ДНК, меченного ЗН-тимидина, добавляемого в культуральную среду.

Достоверность РБТЛ проверяется контрольными исследова­ниями с культурой исследуемых ЛФ без добавления аллергена (для выявления спонтанной Б.л.) и с культурой ЛФ здоровых доноров, инкубируемой с соответствующим аллергеном.

 

2.


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1723 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)