Методы определения HLA АГ
HLA - I АГ определяют цитотоксическим тестом.
Суспензию лимфоцитов смешивают с сывороткой содержащей АТ к АГ HLA, комплемент с красителем (трипановый синий, эозин). В случае присутствия АГ комплиментарного АТ, то в присутствие комплемента наблюдается повреждение мембран лимфоцитов в связи, с чем изменяется их окраска.
Реакция лейкоаглютинации – склеивание лейкоцитов в конгломераты при влиянии специфических иммунных сывороток.
Установка соответствующего HLA донора и реципиента.
HLA - II тестируются в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ).
Смешивают лимфоциты донора и реципиента, инкубируют 3 – 6 дней, если происходит трансформация примерно 30% лимфоцитов в лимфобласты, результат оценивают, считая, что сила реакции зависит от степени генетической несовместимости донора и реципиента, как результат стимуляции HLA АГ.
Реакцию учитывают с использованием светового микроскопа или радиоиммунным методом. Учитывая по включению 3Н-тимидина в ДНК лимфоцитов.
Результат считается отрицательным, если обнаруживается не более 15% бластных форм лимфоцитов.
Экспресс метод оценки. Считают, что СКЛ – это ответ в фазе иммунного распознавания, но можно считать, что реакция отражает пролиферативную способность лимфоцитов; в т.ч. и лимфоцитарную цитотоксичность – используют в тесте лимфоцитотоксичности.
Оценка цитотоксичности может использоваться и в СКЛ.
Лимфоциты мишени инкубируют с митогеном (в частности 51Cr) и в эту систему вносятся цитотоксические лимфоциты, меченные радиоактивным стимулятором. Киллерный эффект учитывают по высвобождению метки.
Метод PCR диагностики.
Основан на определении структурных особенностей ДНК, особенно HLA - I и HLA - II.
Часть II:
Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 944 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 |
|