Тромбіновий час
Принцип. Визначають час згортання плазми під впливом тромбіну (стандартизованого по активності на контрольній нормальній плазмі). Тромбіновий тест характеризує плин кінцевого етапу згортання крові - швидкість перетворення фібриногену у фібрин і залежить від змісту фібриногену й інгібіторів, що блокують дію тромбіну, а також самоскладання фібрин-мономера.
Реактиви. 1. Трис-Буфер, 0,05М (або буфер Михаеліса, рн 7,3 - 7,4). 2. Розчин тромбіну в буфері активністю 14 - 16 с. Робочий розчин реактиву готується в пластиковій або силіконірованій пробірці й використовується в день дослідження. Зберігається при кімнатній температурі.
Примітка. Розведення тромбіну у фізіологічному (0,9%) розчині хлориду натрію або його витримка при +37°С небажані, тому що при цьому швидко знижується активність ферменту.
Матеріал для дослідження. Цитратна бідна тромбоцитами плазма.
Хід визначення. До 0,2 мл досліджуваної плазми, прогрітої на водяній лазні при +37°С у плин 1 хв., додають 0,2 мл розчину тромбіну (який до дослідження повинен мати температуру +18...+25°С, не прогрівати!). Негайно включають секундомір і відмічають час згортання. Визначення проводиться мануально або на коагулометрі.
Читання результатів. Результат виражають у секундах, порівнюють час згортання в контрольній нормальній і досліджуваній плазмі. У нормі тромбіновий час становить 14 - 16 с. Подовження його може бути обумовлено наступними причинами:
• гіпофібриногенемією;
• дисфібриногенемією (молекулярними дефектами фібриногену);
• підвищеним вмістом у плазмі продуктів деградації фібриногена/фібрину (ПДФ), у т.ч. при фібринолітичній терапії;
• присутністю в крові антикоагулянтів прямої дії (гепарина, переважно нефракційованого або звичайного, гірудина, синтетичних антитромбінів і ін.).
Повна незгортаємость за тромбіновим тестом спостерігається відразу ж після внутрішньовенного введення великої дози гепарина й у термінальній фазі гострого ДВЗ-синдрому. Завдяки високій чутливості тромбінового часу до гепарину методикою користуються для контролю за гепаринотерапією. Помилкові результати можуть бути отримані при дослідженні крові, узятої із судинного катетера з гепариновим покриттям. У цьому випадку необхідно попереднє видалення із плазми гепарина. Примітка. У ряді випадків при визначенні тромбінового часу використовують розчин тромбіну, що має активність при згортанні контрольної нормальної плазми 8 – 10 с. або 16 - 21 с.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1205 | Нарушение авторских прав
|