АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Мікроскопічний метод підрахунку (Баркаган З.С., 2001)

В даний час все ширше використовується визначення кількості тромбоцитів та їх розподіл за величиною (гістограма) за допомогою автоматичних лічильників крові. Ці апарати являються точними та дозволяють проводити експрес-діагностику (визначення виконуються за 1 хвилину).

Принцип. Виконується підрахунок тромбоцитів в камері Горяєва, при цьому

використовують в якості розчинної та гемолізуючої рідини розчин оксалату амонію. При підрахунку використовують фазово контрастну мікроскопію.

Реактиви. 1% розчин оксалату амонію.

Хід визначення. Дослідження можна проводити як в крові, яку взяли із пальця, так і в стабілізованій цитратом венозній крові. В останньому випадку отриманий при підрахунку результат перемножують на коефіцієнт 1,1 (враховують розведення венозної крові розчином цитрату натрію -9:1).

Розведення крові. Найбільш зручним та достатньо точним являєтся спосіб разведення крові в пробірках (не в меланжері). Для цього, в попередньо висушену чисту силиконову чи пластикову (полістирол) пробірку піпеткою відміряють 1,98 мл 1% оксалату амонію та обережно вносять в неї 0,02 мл крові. На протязі 1-2 хвилин уміст пробірки ретельно перемішують без утворення піни. Заповнюють дві камери Горяєва и на 10-15 хвилин розміщують їх для осідання тромбоцитів в вологу камеру (чашку Петрі зі змоченою фільтрувальною бумагою або марлею). В кожній камері рахують тромбоцити в 25 великих квадратах..

Фазовоконтрастна мікроскопія проводиться за допомогою звичайного

мікроскопа, освітлювача типу ОІ-19 (або аналогічного) та обладнання для спостереження методом фазового контрасту КФ-1 або КФ-4.^

Підготовка мікроскопа. Після установки в мікроскопі фазових об’єктивів та фазового конденсора виконують фокусировку об’єктивів 40х на сітці камери Горяєва. Установлюють освітлення та центрують зображення фазової пластинки та кільцевої діафрагми. Микроскопію проводять із зеленим світлофільтром. При роботі з фазовоконтрастною установкою необхідно користуватися камерами одного типу, тому що фокусировка оптичних систем залежить відт товщини скла камери.

Розрахунок визначення числа тромбоцитів в 1 мкл крові. Середню арифметичну величину із двох паралельних визначень перемножують на 1000 (площа 25 великих квадратів - 1 мм², висота камери - 0,1 мм, розведенння 1:100; тобто, кількість тромбоцитів повинна бути помножена на 1x10x100 = 1000).

Нормальні межі коливань числа тромбоцитів в крові у людини складають від 170 до 350 х 10⁹/л. Помилка методу + 6,5%.

Підрахунок тромбоцитів у крові та визначення їх розміру у мазку - важлива частина діагностики тромбоцитопеній, есенціальної та поліцитемічної тромбоцитемії, ДВС-синдрома, тромботичної тромбоцитопенічної пурпури та інших мікротромбоваскулитів, порушень гемостазу при аутоімунних формах патології (СКВ, антифосфоліпідний синдром та інше) та при гепатолієнальному син­дромі. При спадкоємних тромбоцитопатіях спостерігаються фор­ми з мікроцитозом (синдром Віскотта-Олдрича) та перевагою гігантських форм кров’яних пластинок (аномалії Бернара-Сул’є та Мей-Хегглина), а також форми без змін розмірів цих клі­тинних елементів.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 453 | Нарушение авторских прав