АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Визначення осмотичної резистентності еритроцитів (за Дасіе)
Визначення осмотичної резистентності можна проводити у свіжих еритроцитах і в еритроцитах, інкубованих протягом доби при 37оС у стерильних умовах.
Апаратура: ф отоколориметр; термостат на 37оС.
Реактиви: о сновний розчин, відповідаючи осмотичності 10% розчину NаС1 (Nа2НPО4 – 27,31г; NаН2PO4 - 4,86 г, NаСІ – 180 г).
Всі реактиви розчиняють у 2 л води; рН цього розчину має бути 7,4. Розчин може зберігатися у закритому посуді у холодильнику протягом кількох місяців. Із нього готують 1 % розчин. Із останнього розчину готують всі інші: 0,85%; 0,75%; 0,65%; 0,55%; 0,50%; 0,45%; 0,40%; 0,35%; 0,30%; 0,25%; 0,1%. Можна приготувати одночасно по 100 мл робочих розчинів і зберігати їх на протязі 2 тижнів у холодильнику.
Хід дослідження. У дві стерильні пробірки, що містять по 2 краплі гепарину, наливають по 1,5 мл крові. Одну пробірку ставлять на добу в термостат, другу - використовують у день забору крові. 1% розчин хлористого натрію і всі робочі розчини розливають у центрифужні пробірки по 5 мл. До кожної пробірки піпеткою від гемометра додають не перемішану кров у кількості 0,02 мл. Пробірки залишають стояти при кімнатній температурі ЗО хвилин, потім центрифугують при 2000 оборотах на хвилину протягом 5 хвилин. Зливають верхній шар з кожної пробірки і фотометрують на фотоколориметрі при зеленому світлофільтрі у кюветі із довжиною оптичного шляху 1 см проти надосадового шару пробірки, що вміщує 1% розчин повареної солі. За 100% гемоліз приймають оптичну щільність у надосадовому шарі пробірки, яка містить 1% розчин повареної солі.
Приклад.
У концентрації NаС1 0,1% оптична щільність дорівнює 0,650, 0,4% - 0,220.
0,650 - 100% гемоліз
0,220 – х х=34%
Другу пробірку, вміщену у термостат, достають через 24 години і дослід повторюють. Дані про нормальну осмотичну резистентність еритроцитів:
Концентрація
NaCl
| % гемолізу
| у свіжій крові
| інкубованій на протязі доби
| 0,20
| 98 - 100
| 95 – 100
| 0,30
| 97 - 100
| 85 – 100
| 0,35
| 90 - 100
| 75 – 100
| 0,40
| 50 - 100
| 65 – 100
| 0,45
| 5 - 45
| 55 – 95
| 0,50
| 0 - 6
| 40 – 85
| 0,55
|
| 15 – 70
| 0,60
|
| 0 – 40
| 0,65
|
| 0 – 10
| 0,70
|
| 0 – 5
| 0,75
|
|
| 0,80
|
|
| 0,85
|
|
|
Діагностичне значення. При мікросфероцитарній гемолітичній анемії спостерігається зниження осмотичної резистентності еритроцитів. Вже у концентрації NаС1 0,70 - 0,65% маємо гемоліз. У деяких хворих на мікросфероцитоз виявити зниження осмотичної резистентності свіжої крові не вдається, однак в інкубованій крові осмотична резистентність різко знижується. Гемоліз може початися у концентрації солі 0,85%.
При таласеміі, а також при деяких видах несфероцитарної гемолітичної анемії відмічається підвищення осмотичної резистентності еритроцитів. Гемоліз може початися у концентраціях солі 0,35 або 0,30%.
Визначення осмотичної резистентності еритроцитів необхідно проводити у всіх випадках, коли маємо внутрішньоклітинний гемоліз. Бажано досліджувати осмотичну резистентність не тільки свіжої, але й інкубованої крові протягом доби.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 551 | Нарушение авторских прав
|