АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Визначення осмотичної резистентності еритроцитів (за Дасіе)

Визначення осмотичної резистентності можна проводити у свіжих еритроцитах і в еритроцитах, інкубованих протягом доби при 37^оС у стерильних умовах.

Апаратура: ф отоколориметр; термостат на 37^оС.

Реактиви: о сновний розчин, відповідаючи осмотичності 10% розчину NаС1 (Nа₂НPО₄ – 27,31г; NаН₂PO₄ - 4,86 г, NаСІ – 180 г).

Всі реактиви розчиняють у 2 л води; рН цього розчину має бути 7,4. Розчин може зберігатися у закритому посуді у холодильнику протягом кількох місяців. Із нього готують 1 % розчин. Із останнього розчину готують всі інші: 0,85%; 0,75%; 0,65%; 0,55%; 0,50%; 0,45%; 0,40%; 0,35%; 0,30%; 0,25%; 0,1%. Можна приготувати одночасно по 100 мл робочих розчинів і зберігати їх на протязі 2 тижнів у холодильнику.

Хід дослідження. У дві стерильні пробірки, що містять по 2 краплі гепарину, наливають по 1,5 мл крові. Одну пробірку ставлять на добу в термостат, другу - використовують у день забору крові. 1% розчин хлористого натрію і всі робочі розчини розливають у центрифужні пробірки по 5 мл. До кожної пробірки піпеткою від гемометра додають не перемішану кров у кількості 0,02 мл. Пробірки залишають стояти при кімнатній температурі ЗО хвилин, потім центрифугують при 2000 оборотах на хви­лину протягом 5 хвилин. Зливають верхній шар з кожної пробірки і фотометрують на фотоколориметрі при зеленому світлофільтрі у кюветі із довжиною оптичного шляху 1 см проти надосадового шару пробірки, що вміщує 1% розчин повареної солі. За 100% гемоліз приймають оптичну щільність у надосадовому шарі пробірки, яка містить 1% розчин повареної солі.

Приклад.

У концентрації NаС1 0,1% оптична щільність дорівнює 0,650, 0,4% - 0,220.

0,650 - 100% гемоліз

0,220 – х х=34%

Другу пробірку, вміщену у термостат, достають через 24 години і дослід повторюють. Дані про нор­мальну осмотичну резистентність еритроцитів:

Діагностичне значення. При мікросфероцитарній гемолітичній анемії спостерігається зниження осмотичної резистентності еритроцитів. Вже у концентрації NаС1 0,70 - 0,65% маємо гемоліз. У деяких хворих на мікросфероцитоз виявити зниження осмотичної резистентності свіжої крові не вдається, однак в інкубованій крові осмо­тична резистентність різко знижується. Гемоліз може початися у концентрації солі 0,85%.

При таласеміі, а також при деяких видах несфероцитарної гемолітичної анемії відмічається підви­щення осмотичної резистентності еритроцитів. Гемоліз може початися у концентраціях солі 0,35 або 0,30%.

Визначення осмотичної резистентності еритроцитів необхідно проводити у всіх випадках, коли ма­ємо внутрішньоклітинний гемоліз. Бажано досліджувати осмотичну резистентність не тільки свіжої, але й інкубованої крові протягом доби.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 545 | Нарушение авторских прав