АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Визначення D-димера

Принцип. Тест заснований на здатності часток латекса, які покри­ті моноклональними антитілами до D-димеру (продукту лізиса поперечнозшитого фібрину), агглютинувати при змішуванні з плазмою крові, яка вміщує D-димер. Тест проводять з різними роз­веденнями досліджуваної плазми, а про кількість D-димера в зразку роблять висновок по тому найбільшому розведенню плазми, в якому ще ви­являеться агглютинація. На показання теста не впливає вміст в плазмі фибриногена, ранніх продуктів фібриноліза (фрагментів X и У) та фрагментів D і Е. Визначення D-димера можна проводити також в сироватці крові та інших біологічних рідинах.

Нижче наводиться опис методики на прикладі наборові реаген­тів "FDP-Slidex direct" фірми BioMerieux. Аналогічні набори ви­пускаються фірмами Boehringer Mannheim, Immuno и др.

Матеріал для дослідження. Цитратна бідна тромбоцитами плазма або сироватка крові.

Реактиви. 1. Латекс-реагент - суміш частинок латекса, які навантажені антитілами до D-димеру - в контейнері-дозаторі. 2. Позитивний контроль - вміщує в контейнері-дозаторі. 3. Розчин D-димера (в концентрації більше як 500 нг/мл). 4. Негативний контроль – розчин, який не вміщує D-димера -
в контейнері-дозаторі. 5. Глициновий буфер (0,1 М),який вміщує хлорид натрію (0,15
М), рН 8,2. 6. Пластини із картону з робочою поверхнею чорного кольору з
нанесеними на неї кільцами-обмежниками (лунками). 7.Палички для перемішування.

Примітка. Всі реагенти знаходяться в робочому розведенні та постачені дозаторами.

Хід визначення. Якісний варіант. В 3 лунки на пла­стині вносять по 1 краплі позитивного контролю (1-а лунка), негативного контролю (2-а лунка) або 30 мкл (3-я лунка) досліджуваної плазми. Потім в кожну лунку вносять по 1 краплі латекс-реагента та перемішують вміст лунок за допомогою паличок, які входять до складу набору. Пластину похитують на протязі 2 хв, після чого визначають наявність агглютинації частинок латексу. В лунці, до якої вносився негативний контроль, агглютинації не повинно бути, а в лунці з позитивним контролем, повинна відмічатися добре видима агглютинація.

Напівкількісний варіант. При позитивному результа­ті проби в якісному виконанні методики виконують напівкількісне визначення, для чого плазму перед дослідженням розводять буфером в 2, 4, 8 и более разів. Всі розведення плазми досліджують за описаною вище методикою.

Читання результатів. В разі присутності агглютинації в лунці, в яку була розміщена проба досліджуваної плазми, результат розці­нюють як позитивний (концентрація D-димера вище 500 нг/мл). Відсутність агглютинації в пробі з досліджуваною плазмою розцінюють як негативний (концентрація D-димера нижче 500 нг/мл). В напівкількісному варианті методики знаходять найбільше розведення зразка плазми, в якому ще визначається агглюти­нація частинок латекса. Потім перемножають ступінь розведення зразка на чутливість діагностикуму (500 нг/мл), в результаті отримують шукану концентрацію D-димера.

Рівень D-димера підвищується (більш як 500 нг/мл) при масивному внутрішньому згортанні крові (тромбози магістральних вен, ТЕЛА), при ДВС-синдромах різного генезу. Високі показники тесту спостерігаються і при лікуванні хворих активаторами фібріноліза (стрептокіназою, тканинним активатором плазміногена -ТПА, авелізіном і т. ін.), у зв’язку з чим метод використовується в ком­плексі з визначенням фібріногена для контролю такої терапії.

Кількісні варіанти визначень D-димера. Кількісне визначення D-димера як маркера тромбонемії має більш високе діагностичне значення, тому що дозволяє визначати виразність в сукупності як внутрісудинного згортання крові, так і фібріноліза, відстежувати ефективність антитромботичної терапії.Разом з цим, такі визначення є достатньо дорогими, потребують застосування спеціального обладнання (таких пристроїв, що зчитують або визначених типів коагулометрів). Наприклад, при використанні рефлектометра NycoCARD READER II, дос­ягається визначення D-димера в интервалі від 0,1 до 20,0 мг/л, з точністю до 0,1 мг/л або 100 нг/мл (при нормальному вмісту D-димера - до 0,3 мг/л).

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 639 | Нарушение авторских прав