Рис. 18.18. Анализ гибридных клеток по методу Саузерна. ДНК гибридных клеток мышь— человек обрабатывали рестриктазой Hin dIII и гибридизовали с зондом протяженностью 900 п. н., содержащим вирусный онкоген туc. На первой дорожке электрофореграммы гибридизуется полоса, соответствующая по-
зиции фрагмента ДНК человека, на второй - фрагмента ДНК мыши. На дорожках 3-13 фракционированы фрагменты ДНК из гибридных линий. Последовательности человека, гомологичные туc, присутствуют в клонах 3, 5, 6, 9, 11 и 12. (По Sakaguchi A. Y. et al. 1983. Somatic Cell Genetics, 9, 391-405.)
ствующие рестрикционным фрагментам, содержащим последовательности ДНК, гомологичные данному зонду (рис. 18.18). Гены соотносят с определенными хромосомами человека на основании корреляции между присутствием данной хромосомы в гибридной клеточной линии и наличием гибридизующегося фрагмента человеческой ДНК на радиоавтограмме. Данный метод более чуствителен, чем гибридизация ДНК в растворе и, главное, более специфичен.
Результаты эксперимента по картированию гена химотрипсиногена В (CTRB) приведены в таблице 18.3. «Плюсы» и «минусы» во втором столбце таблицы отражают результаты гибридизации по Саузерну. Следующие столбцы таблицы указывают на присутствие тех или иных хромосом человека в гибридных линиях. Единственная хромосома, которая имеется во всех гибридных клеточных линиях, дающих положительный ответ в блот-гибридизации, и отсутствует в линиях, дающих отрицательный ответ, - это хромосома 16.
Метод гибридизации по Саузерну, соединенный с подходами, разработанными для генетического анализа соматических клеток, с успехом применялся не только для картирования определенных генов (табл, 18.4), но и для локализации последовательностей ДНК с неизвестными функциями, найденными в библиотеках генов человека.
Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика: В 3-х т. Т. 2. Пер. с англ.: – М.: Мир, 1988. – 368 с.
372 Экспрессия генетического материала