Определение пировиноградной кислоты в моче колориметрическим методом
Принцип метода. Пировиноградная кислота взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином с образованием гидразона, который в щелочной среде приобретает красно-коричневую окраску, интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации ПВК.
Уравнение реакции.
ПВК 2,4-динитрофенилгидразин 2,4 –динитрофенил
фенилгидразон ПВК
Реактивы и оборудование.
1. 2,4-Динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), 0.1% раствор в 2н HCl.
2. Гидроксид калия (КОН), 2,5% раствор в этиловом спирте.
3. Пробирки с пробками, пипетки.
4. Фотоэлектроколориметр.
5. Калибровочный график.
Ход работы.
К 1 мл разведенной в 4 раза мочи добавляют 0,5 мл 0,1% раствора 2,4-динитрофенилгидразина (2,4-ДНФГ). Параллельно готовят контрольную пробу, содержащую 1 мл дистиллированной воды вместо мочи; все остальные реактивы добавляют в том же количестве, что и в опытную пробу. К контрольной и опытной пробе через 5 минут добавляют 3 мл 2,5% спиртового раствора гидроксида калия и перемешивают. Через 10 минут пробы фотометрируют, используя зеленый светофильтр (l=560 нм) и кюветы с рабочим расстоянием 10 мм, против контроля.
Расчет.
Калибровочный график зависимости оптической плотности окрашенного раствора гидразона от концентрации ПВК в пробе D=f(C) строят предварительно, используя стандартный раствор пирувата натрия. Полученное по графику количество ПВК в мг (Х) подставляют в формулу
Содержание ПВК в суточном объеме мочи (С, мг/сут):
С=Х*4*1500/1000,
где Х - содержание ПВК в исследуемой пробе, определенное по калибровочному графику, мкг/мл;
4 – множитель для определения содержания ПВК в 1 мл неразведенной мочи;
1500 – средний суточный объем мочи, мл;
1000 – коэффициент для перевода мкг в мг.
Сравните полученные результаты с нормой: за сутки с мочой должно выделяться 10-25 мг ПВК. Укажите возможные причины повышенного содержания ПВК в моче.
Вывод
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1075 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 |
|