Рис. 15.10. Нуклеотидная последовательность ДНК, связывающаяся с /ас-репрессором. Оттенены палиндромные последовательности, расположенные симметрично вокруг оси вращения (цветная точка). С этими симметричными последовательностями связываются две субъединицы тетрамерного репрессора.
ций I-, обозначаемых I-D. Конститутивные мутации I-Dподавляют способность репрессора связываться с операторной ДНК. В частичных диплоидах они ведут себя как доминантные - генотипу I-D/I+ соответствует конститутивный фенотип. Доминантность этих мутаций реализуется за счет образования смешанных тетрамеров. Смешанная пара, состоящая из мутантной и нормальной субъединицы, утрачивает способность к кооперативному связыванию с ДНК и соответственно к подавлению транскрипции.
Все мутации I+ картируются на участке гена I, кодирующем n-концевую область полипептида, т.е. ту область, которая непосредственно связывается с ДНК. С другой стороны, репрессор, продуцируемый мутантными клетками I-, способен нормально связываться с индуктором. Это означает, что участок связывания с индуктором локализуется вне N-концевой области репрессора. Такое представление подтверждается при рассмотрении мутаций I другого типа I, которые проявляются в фенотипе суперрепрессии. В клетках IS репрессор связывается с оператором независимо от присутствия индуктора. Все мутации этого типа картируются в гене I вне области, кодирующей 50 N-концевых аминокислотных остатков репрессора. Таким образом, можно полагать, что lac- репрессор содержит два функционально различных домена.
Представления о доменной организации молекулы репрессора были подтверждены с помощью биохимических методов. При обработке очищенного нативного репрессора протеолитическим ферментом трипсином N-концевые полипептиды отщепляются от тетрамерного «кора». Оставшийся после этого кор-белок может связывать индуктор, но не способен связываться с ДНК. Таким образом, N-концевые участки полипептидных цепей (протяженностью около 50 аминокислотных остатков), вероятно, выступают за пределы относительно компактного тетрамерного кора и могут «внедряться» в бороздки двойной спирали ДНК, узнавать и прочно связываться с операторной последовательностью. Как мы убедимся в дальнейшем, такой способ структурно-функциональной организации характерен для многих белков, специфически узнающих определенные последовательности ДНК.
Взаимодействие очищенного lac -репрессора с ДНК подробно изучено in vitro. Для оценки прочности связывания белка как с операторной, так и с любой другой ДНК можно пользоваться значением кон-