АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Прочитайте:
  1. E. АИВ инфекциясына серодиагностика
  2. II. Диагностика
  3. II. Диагностика
  4. II. Диагностика
  5. II. Диагностика
  6. III. Диагностика лекарственной аллергии
  7. III. Лабораторная диагностика хронического панкреатита
  8. IV) Травматические повреждения периферический нервов и сплетений. Клиника, диагностика, лечение, виды операций.
  9. IV. Диагностика
  10. IV. Дифференциальная диагностика

Для лабораторной диагностики сибирской язвы применяют мик­роскопический, бактериологический, биологический и серологичес­кие методы исследования, кожную аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Материал для исследования зависит от клинической формы за­болевания, это: отделяемое везикул, карбункулов и язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, моча, пунктаты лимфоузлов, ликвор и аутоп-сийный материал.

Лабораторную диагностику проводят в специатьных лаборато­риях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями.Этих же правил придерживаются при взятии и транспортировке пато­логического материала

Микроскопические исследования. Мазки из исследуемых ма­териалов окрашивают по Граму. Для выявления капсулы применяют методы Бурри-Гинса, Ребигера и другие. Наличие в мазках крупных грамположительных палочек, образующих короткие цепочки, окружен­ные общей капсулой, позволяют дать предварительный ответ в тече­ние одного часа. Иногда мазки окрашивают по методу Ожешке для обнаружения спор.

Дополнительно применяют прямой метод иммунофлюоресцен-пии со специфической сибиреязвенной люминеецируювдей сыворот­кой, служащий подтверждением результатов микроскопического исследования.

Бактериологический метод. Выполняют посевы исследуемого материала на чашки с МПА, кровяным агаром, на среды с сывороткой (для выявления капсулы), пол им икс и ново-желточный агар. Кровь и ликвор параллельно засевают на жидкие питательные среды.

В положительном случае, после суточной инкубации при 37°С, на чашках вырастают характерные R-колонии. Их исследуют и выде­ляют- чистую культуру, которую идентифицируют (см. ниже).

Биологическая проба. Одновременно с посевами на питатель­ные среды, исследуемый материал подкожно вводят мышам, морским свинкам или кроликам. Обычно через сутки мыши погибают Из их крови и органов готовят мазки-отпечатки (с целью обнаружения ха­рактерных капсульных палочек) и проводят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Через сутки часть выживших животных забивают и осуществляют аналогичные иссле­дование. За остальными животными наблюдают в течение 10 суток.

Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ее проводят с учетом широкого распространения непатогенных и ус­ловно-патогенных спороносных бацилл, обладающих сходной мор­фологией и рядом других общих свойств с сибиреязвенными бактериями. Для дифференциации используют комплекс признаков, присущих только B.anthracis:

- отсутствие подвижности;

- наличие капсул в организме человека и животных и калсулооб-
разование на сывороточных средах;

- фаголизабельность специфическим сибиреязвенным бактерио­
фагом;

- отсутствие гемолиза при росте колоний на кровяном агаре (не
вполне надежный признак, так как некоторые почвенные бацил­
лы также не дают гемолиза),

- положительный тест «жемчужного ожерелья». Он заключается в

посеве трехчасовой бульонной испытуемой культуры на пени-циллиновый агар, на котором под действием пенициллина, на­рушающего синтез пептидогликана, цепочки палочковидных бактерий превращаются в «ожерелье» из шаровидных форм (сфе-ропластов), что выявляют при фазово-контрастной микроскопии.

- вирулентность для мышей, морских свинок и главное - кроликов,
так как некоторые бациллы, например В.cereus, введенные в боль­
ших дозах, могут вызывать гибель мышей и морских свинок.

- Кроме выявления этих признаков проводят биохимическое тес­
тирование в системе API 20A или определяют протеолитические
(B.anthracis разжижает желатину в виде «перевернутой елочки»)
и сахаролитические свойства (ферментирует с образованием
кислых продуктов лактозу, глюкозу и мальтозу, вызывает покрас­
нение лакмусового молока)

- Серологическую идентификацию проводят методом прямой им-
мунофлюоресценции.



На основании результатов идентификации испытуемой культуры ставят окончательный диагноз сибирской язвы. Однако, выделить куль­туру возбудителя удается далеко не всегда, например при кожной фор­ме - менее чем в 50% случаев, что связано, главным образом, с ранним началом лечения антибиотиками.

Серологический метод. Его применяют для выявления сибире­язвенного антигена или возбудителя непосредственно в патологичес­ком материале в ранние сроки заболевания. Используют экспресс-методы: прямой РИФ, РИГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (РОНГА), ИФА.

Антитела в сыворотке крови больных выявляют реже, в основ­ном при кожной форме заболевания. Применяют РИГА (с эритроцитар­ным антигенным диагностикумом), а в последнее время применяют тест-системы ЛФА с капсульным, протективным антигенами или леталь­ным токсином, позволяющие выявлять соответствующие антитела.

По наличию специфических антител у переболевших устанавли­вают ретроспективный диагноз сибирской язвы.

Сохраняет свое значение реакция термопреципитации Асколи, основное назначение которой - определение зараженности различно­го животного сырья (кожа, шкуры, шерсть., щетина и др.), атакже объек­тов внешней среды, трупов людей и животных, даже разложившихся.

Для постановки реакции Асколи готовят термопреципитиноген из исследуемого материала, который измельчают, кипятят в изотони­ческом растворе NaCl и фильтруют. Прозрачный преципитиноген на­слаивают на сибиреязвенную сыворотку, налитую в узкую пробирку. В положительном случае на границе двух жидкостей образуется мут­но-белое кольцо преципитата. Одновременно ставят контроль с нор­мальной сывороткой, где преципитация должна отсутствовать.

Раньше эту реакцию использовали и для прижизненной диагнос­тики кожной формы сибирской язвы (термопреципитиноген готовили из струпа, покрывающего карбункул), но в настоящее время для этой цели реакцию Асколи почти не применяют.

Кожно-аллергичеекая проба Ее ставят для выявления аллергиза-ции организма (развит ие ГЗТ), возникающей при сибиреязвенной инфек­ции и сохраняющейся в течение многих лет у переболевших. Аллерген-антраксин вводят в объеме О Л мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечью. Результат учитывают через 24 и 48 часов. Реак­ция считается положительной при наличии инфильтрата и гиперемии ди­аметром 16-25мм и резко положительной, если диаметр 26мм и более. Положительную кожно-аллергическую пробу наблюдают у больных и переболевших кожной формой сибирской язвы почти в 90% случаев.

Подимеразная цепная реакция (ПЦР)является перспективным, чувствительным экспресс-методом, позволяющим выявлять присут­ствие ДНК возбудителя сибирской язвы в патологическом материале. взятом от больных, в том числе во время лечения антибиотиками., а также в объектах внешней среды. В настоящее время разработаны и апробированы на практике диагностические тест-системы, содержа­щие набор ингредиентов для постановки ПЦР.


Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 5080 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.011 сек.)