АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Для лабораторной диагностики сибирской язвы применяют мик­роскопический, бактериологический, биологический и серологичес­кие методы исследования, кожную аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Материал для исследования зависит от клинической формы за­болевания, это: отделяемое везикул, карбункулов и язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, моча, пунктаты лимфоузлов, ликвор и аутоп-сийный материал.

Лабораторную диагностику проводят в специатьных лаборато­риях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями. Этих же правил придерживаются при взятии и транспортировке пато­логического материала

Микроскопические исследования. Мазки из исследуемых ма­териалов окрашивают по Граму. Для выявления капсулы применяют методы Бурри-Гинса, Ребигера и другие. Наличие в мазках крупных грамположительных палочек, образующих короткие цепочки, окружен­ные общей капсулой, позволяют дать предварительный ответ в тече­ние одного часа. Иногда мазки окрашивают по методу Ожешке для обнаружения спор.

Дополнительно применяют прямой метод иммунофлюоресцен-пии со специфической сибиреязвенной люминеецируювдей сыворот­кой, служащий подтверждением результатов микроскопического исследования.

Бактериологический метод. Выполняют посевы исследуемого материала на чашки с МПА, кровяным агаром, на среды с сывороткой (для выявления капсулы), пол им икс и ново-желточный агар. Кровь и ликвор параллельно засевают на жидкие питательные среды.

В положительном случае, после суточной инкубации при 37°С, на чашках вырастают характерные R-колонии. Их исследуют и выде­ляют- чистую культуру, которую идентифицируют (см. ниже).

Биологическая проба. Одновременно с посевами на питатель­ные среды, исследуемый материал подкожно вводят мышам, морским свинкам или кроликам. Обычно через сутки мыши погибают Из их крови и органов готовят мазки-отпечатки (с целью обнаружения ха­рактерных капсульных палочек) и проводят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Через сутки часть выживших животных забивают и осуществляют аналогичные иссле­дование. За остальными животными наблюдают в течение 10 суток.

Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ее проводят с учетом широкого распространения непатогенных и ус­ловно-патогенных спороносных бацилл, обладающих сходной мор­фологией и рядом других общих свойств с сибиреязвенными бактериями. Для дифференциации используют комплекс признаков, присущих только B.anthracis:

- отсутствие подвижности;

- наличие капсул в организме человека и животных и калсулооб-
разование на сывороточных средах;

- фаголизабельность специфическим сибиреязвенным бактерио­
фагом;

- отсутствие гемолиза при росте колоний на кровяном агаре (не
вполне надежный признак, так как некоторые почвенные бацил­
лы также не дают гемолиза),

- положительный тест «жемчужного ожерелья». Он заключается в

посеве трехчасовой бульонной испытуемой культуры на пени-циллиновый агар, на котором под действием пенициллина, на­рушающего синтез пептидогликана, цепочки палочковидных бактерий превращаются в «ожерелье» из шаровидных форм (сфе-ропластов), что выявляют при фазово-контрастной микроскопии.

- вирулентность для мышей, морских свинок и главное - кроликов,
так как некоторые бациллы, например В.cereus, введенные в боль­
ших дозах, могут вызывать гибель мышей и морских свинок.

- Кроме выявления этих признаков проводят биохимическое тес­
тирование в системе API 20A или определяют протеолитические
(B.anthracis разжижает желатину в виде «перевернутой елочки»)
и сахаролитические свойства (ферментирует с образованием
кислых продуктов лактозу, глюкозу и мальтозу, вызывает покрас­
нение лакмусового молока)

- Серологическую идентификацию проводят методом прямой им-
мунофлюоресценции.

На основании результатов идентификации испытуемой культуры ставят окончательный диагноз сибирской язвы. Однако, выделить куль­туру возбудителя удается далеко не всегда, например при кожной фор­ме - менее чем в 50% случаев, что связано, главным образом, с ранним началом лечения антибиотиками.

Серологический метод. Его применяют для выявления сибире­язвенного антигена или возбудителя непосредственно в патологичес­ком материале в ранние сроки заболевания. Используют экспресс-методы: прямой РИФ, РИГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (РОНГА), ИФА.

Антитела в сыворотке крови больных выявляют реже, в основ­ном при кожной форме заболевания. Применяют РИГА (с эритроцитар­ным антигенным диагностикумом), а в последнее время применяют тест-системы ЛФА с капсульным, протективным антигенами или леталь­ным токсином, позволяющие выявлять соответствующие антитела.

По наличию специфических антител у переболевших устанавли­вают ретроспективный диагноз сибирской язвы.

Сохраняет свое значение реакция термопреципитации Асколи, основное назначение которой - определение зараженности различно­го животного сырья (кожа, шкуры, шерсть., щетина и др.), атакже объек­тов внешней среды, трупов людей и животных, даже разложившихся.

Для постановки реакции Асколи готовят термопреципитиноген из исследуемого материала, который измельчают, кипятят в изотони­ческом растворе NaCl и фильтруют. Прозрачный преципитиноген на­слаивают на сибиреязвенную сыворотку, налитую в узкую пробирку. В положительном случае на границе двух жидкостей образуется мут­но-белое кольцо преципитата. Одновременно ставят контроль с нор­мальной сывороткой, где преципитация должна отсутствовать.

Раньше эту реакцию использовали и для прижизненной диагнос­тики кожной формы сибирской язвы (термопреципитиноген готовили из струпа, покрывающего карбункул), но в настоящее время для этой цели реакцию Асколи почти не применяют.

Кожно-аллергичеекая проба Ее ставят для выявления аллергиза-ции организма (развит ие ГЗТ), возникающей при сибиреязвенной инфек­ции и сохраняющейся в течение многих лет у переболевших. Аллерген-антраксин вводят в объеме О Л мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечью. Результат учитывают через 24 и 48 часов. Реак­ция считается положительной при наличии инфильтрата и гиперемии ди­аметром 16-25мм и резко положительной, если диаметр 26мм и более. Положительную кожно-аллергическую пробу наблюдают у больных и переболевших кожной формой сибирской язвы почти в 90% случаев.

Подимеразная цепная реакция (ПЦР) является перспективным, чувствительным экспресс-методом, позволяющим выявлять присут­ствие ДНК возбудителя сибирской язвы в патологическом материале. взятом от больных, в том числе во время лечения антибиотиками., а также в объектах внешней среды. В настоящее время разработаны и апробированы на практике диагностические тест-системы, содержа­щие набор ингредиентов для постановки ПЦР.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 5944 | Нарушение авторских прав