Лабораторная диагностика сибирской язвы
Для лабораторной диагностики сибирской язвы применяют микроскопический, бактериологический, биологический и серологические методы исследования, кожную аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Материал для исследования зависит от клинической формы заболевания, это: отделяемое везикул, карбункулов и язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, моча, пунктаты лимфоузлов, ликвор и аутоп-сийный материал.
Лабораторную диагностику проводят в специатьных лабораториях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями. Этих же правил придерживаются при взятии и транспортировке патологического материала
Микроскопические исследования. Мазки из исследуемых материалов окрашивают по Граму. Для выявления капсулы применяют методы Бурри-Гинса, Ребигера и другие. Наличие в мазках крупных грамположительных палочек, образующих короткие цепочки, окруженные общей капсулой, позволяют дать предварительный ответ в течение одного часа. Иногда мазки окрашивают по методу Ожешке для обнаружения спор.
Дополнительно применяют прямой метод иммунофлюоресцен-пии со специфической сибиреязвенной люминеецируювдей сывороткой, служащий подтверждением результатов микроскопического исследования.
Бактериологический метод. Выполняют посевы исследуемого материала на чашки с МПА, кровяным агаром, на среды с сывороткой (для выявления капсулы), пол им икс и ново-желточный агар. Кровь и ликвор параллельно засевают на жидкие питательные среды.
В положительном случае, после суточной инкубации при 37°С, на чашках вырастают характерные R-колонии. Их исследуют и выделяют- чистую культуру, которую идентифицируют (см. ниже).
Биологическая проба. Одновременно с посевами на питательные среды, исследуемый материал подкожно вводят мышам, морским свинкам или кроликам. Обычно через сутки мыши погибают Из их крови и органов готовят мазки-отпечатки (с целью обнаружения характерных капсульных палочек) и проводят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Через сутки часть выживших животных забивают и осуществляют аналогичные исследование. За остальными животными наблюдают в течение 10 суток.
Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ее проводят с учетом широкого распространения непатогенных и условно-патогенных спороносных бацилл, обладающих сходной морфологией и рядом других общих свойств с сибиреязвенными бактериями. Для дифференциации используют комплекс признаков, присущих только B.anthracis:
- отсутствие подвижности;
- наличие капсул в организме человека и животных и калсулооб- разование на сывороточных средах;
- фаголизабельность специфическим сибиреязвенным бактерио фагом;
- отсутствие гемолиза при росте колоний на кровяном агаре (не вполне надежный признак, так как некоторые почвенные бацил лы также не дают гемолиза),
- положительный тест «жемчужного ожерелья». Он заключается в
посеве трехчасовой бульонной испытуемой культуры на пени-циллиновый агар, на котором под действием пенициллина, нарушающего синтез пептидогликана, цепочки палочковидных бактерий превращаются в «ожерелье» из шаровидных форм (сфе-ропластов), что выявляют при фазово-контрастной микроскопии.
- вирулентность для мышей, морских свинок и главное - кроликов, так как некоторые бациллы, например В.cereus, введенные в боль ших дозах, могут вызывать гибель мышей и морских свинок.
- Кроме выявления этих признаков проводят биохимическое тес тирование в системе API 20A или определяют протеолитические (B.anthracis разжижает желатину в виде «перевернутой елочки») и сахаролитические свойства (ферментирует с образованием кислых продуктов лактозу, глюкозу и мальтозу, вызывает покрас нение лакмусового молока)
- Серологическую идентификацию проводят методом прямой им- мунофлюоресценции.
На основании результатов идентификации испытуемой культуры ставят окончательный диагноз сибирской язвы. Однако, выделить культуру возбудителя удается далеко не всегда, например при кожной форме - менее чем в 50% случаев, что связано, главным образом, с ранним началом лечения антибиотиками.
Серологический метод. Его применяют для выявления сибиреязвенного антигена или возбудителя непосредственно в патологическом материале в ранние сроки заболевания. Используют экспресс-методы: прямой РИФ, РИГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (РОНГА), ИФА.
Антитела в сыворотке крови больных выявляют реже, в основном при кожной форме заболевания. Применяют РИГА (с эритроцитарным антигенным диагностикумом), а в последнее время применяют тест-системы ЛФА с капсульным, протективным антигенами или летальным токсином, позволяющие выявлять соответствующие антитела.
По наличию специфических антител у переболевших устанавливают ретроспективный диагноз сибирской язвы.
Сохраняет свое значение реакция термопреципитации Асколи, основное назначение которой - определение зараженности различного животного сырья (кожа, шкуры, шерсть., щетина и др.), атакже объектов внешней среды, трупов людей и животных, даже разложившихся.
Для постановки реакции Асколи готовят термопреципитиноген из исследуемого материала, который измельчают, кипятят в изотоническом растворе NaCl и фильтруют. Прозрачный преципитиноген наслаивают на сибиреязвенную сыворотку, налитую в узкую пробирку. В положительном случае на границе двух жидкостей образуется мутно-белое кольцо преципитата. Одновременно ставят контроль с нормальной сывороткой, где преципитация должна отсутствовать.
Раньше эту реакцию использовали и для прижизненной диагностики кожной формы сибирской язвы (термопреципитиноген готовили из струпа, покрывающего карбункул), но в настоящее время для этой цели реакцию Асколи почти не применяют.
Кожно-аллергичеекая проба Ее ставят для выявления аллергиза-ции организма (развит ие ГЗТ), возникающей при сибиреязвенной инфекции и сохраняющейся в течение многих лет у переболевших. Аллерген-антраксин вводят в объеме О Л мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечью. Результат учитывают через 24 и 48 часов. Реакция считается положительной при наличии инфильтрата и гиперемии диаметром 16-25мм и резко положительной, если диаметр 26мм и более. Положительную кожно-аллергическую пробу наблюдают у больных и переболевших кожной формой сибирской язвы почти в 90% случаев.
Подимеразная цепная реакция (ПЦР) является перспективным, чувствительным экспресс-методом, позволяющим выявлять присутствие ДНК возбудителя сибирской язвы в патологическом материале. взятом от больных, в том числе во время лечения антибиотиками., а также в объектах внешней среды. В настоящее время разработаны и апробированы на практике диагностические тест-системы, содержащие набор ингредиентов для постановки ПЦР.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 5922 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 |
|