АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Лабораторная диагностика сифилиса

Для диагностики сифилиса применяют микроскопические и се­рологические методы исследования, перспективной является ПЦР.

Микроскопическое исследование проводят в первичном и вто­ричном (свежем и рецидивном) периодах заболевания, а также при подозрении на врожденный сифилис Материалы для исследования; отделяемое твердого шанкра, язв, эрозий, содержимое различных высыланий на коже и слизистых, пунктаты лимфоузлов; амниотичес-кая и плацентарная жидкости.

Наилучшие результаты дает темнопольная микроскопия, Следу­ет помнить, что при исследовании материалов со слизистых полости рга и половых органов в них могут находиться неспецифические тре­понемы - представители нормальной микрофлоры, В отличие от них бледная хрепонема очень тонкая, имеет равномерные крутые завитки, для нее характерны плавные движения и, в том числе, сгибательные, маятникообразные, которые обычно отсутствуют у других трепонем. Обнаружение возбудителей в исследуемом материале позво­ляет поставить диагноз сифилиса даже без серологического под­тверждения при наличии клинической картины,

Серологический метод является основным методом диагности­ки сифилиса. Он позволяет определять антитела на всем протяжении заболевания, начиная с 3-4 недели (первичный серопозитивный сифи­лис). Исследуемый материал: кровь, сыворотка крови, плазма, ликвор, Для выявления сифилиса предложено множество различных се­рологических реакций, которые подразделяют на две группы:

/. Нетрепонемные тесты, которые ставят с неспецифическим кар-диолипиновым антигеном, представляющим собой липидный экстракт из сердца крупного рогатого скота с добавлением ле­цитина и холестерина, С помощью этих тестов выявляют анти­липидные антитела - реагины. Нетрепонемные тесты не всегда специфичны дпя сифилиса, их используют для предварительной диагностики сифилиса в качестве отборочных скрининговых реакций. Все они основаны на механизме реакции преципита­ции (флоккуляиии), При взаимодействии кардиолипинового ан­тигена, с антилипиддьши антителами сыворотки образуются хорошо видимые хлопья. К ним относятся микрореакция пре­ципитации (МРП) или ее модификация (RPR-PITR, TRUST-TRACK, VDRI-ВДРЛ). Применяемая в качестве обязательной РСК (реакция Вассермана) по Приказу МЗ РФ №87 от 2001 г отменя­ется с 2006г.

Необходимо учитывать, что реакции с кардиолипиновым анти­геном могут давать ложноположительные результаты при целом ряде инфекций с затяжным, хроническим течением (при маля­рии, сыпном тифе, возвратном тифе, туберкулезе и лепре, бру­целлезе и пр.); при злокачественных новообразованиях, болезнях крови и печени,, ревматизме, незадолго до родов и в течение 2-х недель после родов, после приема алкоголя, жирной пищи, не­которых лекарственных средств и т.д.

В сомнительных случаях серологические исследования продол­жают, используя одну или несколько подтверждающих реакций (трепонемных тестов.)

2. Трепонемные тесты, которые ставят со специфическими трепо-немными антигенами. Их готовят из тканевых Т.pallidum, штамм Никольс, полученных из яичек зараженных кроликов. С помо­щью трепонемных тестов выявляют наличие специфических антитрепонемных антител в сыворотке больного. Эти тесты яв­ляются подтверждающими и позволяют ставить окончательный диагноз, К подтверждающим реакциям относятся:

- реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА);

- реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (РИФ-Абс) и
ее варианты JgM - РИФ-Абс;

- иммуноферментиый анализ (ИФА);

- реакция иммобилизации бледных трепонем (ШБТ).

Скрининг-реакции при сифилисе

Отборочные и подтверждающие серологические реакции исполь­зуют при массовых обследованиях на сифилитическую инфекцию раз­личных контиигентоэ людей: доноров крови, беременных женщин; больных, находящихся на излечении» стационарах различного про­филя; работников дет,ских учреждений и пищевых предприятий и др, К таким скрининг-реакциям относятся: микрореакция преципи­тации, и ее модификации РПР и др.

1, а) Микрореакция прег^итшщим (МРП) является отбороч­ной реакцией. Ее ставят с плазмой или сывороткой крови, к которым добавляют кард иол ип и новы и антиген. В положи­тельном случае выпадает преципитат в виде хлопьев белого цвета,

б) РПР (RPR- Rapid Plasma.Reagtn) - быстрый реагнновый тест. РПР-реакция микропреципитации с кардиолипиновым анти­геном, адсорбированным на стандартных угольных частицах. РПР ставят на специальных пластинах с помощью автомати­ческой микропипетки Испытуемую сыворотку разводят пос­ледовательно от 1:2 до 1:512, В каждую каплю разведеннойсыворотки вносят по 1 капле антигена, ставят положитель­ный и отрицательный контроль (тщательно смешивают на платформе орбитального ротатора при скорости 100 оборо­тов в минуту). По истечении 8 минут проводят визуальный учет результатов. При взаимодействии антигена и реагяно-вых антител в пробе образуются хлопья, видимые невоору­женным глазом. В отсутствие реагиновых антител склеивание (флоккуляция) не происходит, частицы угля с антигеном ос­таются в мелкодисперсном состоянии, Титром образца счи­тается последнее разведение сыворотки, в котором обнаруживается положительный результат. По Приказу МЗ РФ №87 от 2001г реакции с кардиолипиновым антигеном проводят с количественной оценкой (определяют титр реа­гинов), что позволяет оценить эффективность лечения (по скорости снижения титра реагинов). Снижение титра реаги­нов в 4 раза и более указывает на излечение сифилиса. Чув­ствительность МРП и РПР на разных стадиях сифилитической инфекции различна, например: при первич­ном сифилисе ока составляет 85%_t при вторичном - 100%, при латентном - 90%, на поздних стадиях заболевания - 95%. При проведении скрининговых исследований на сифилис целесообразно одновременно проводить МРП и РПГА, т.к. положительная РПР отмечается при первичном сифилисе на 7-12 дней раньше, чем РПГА. Комплекс РПР и РПГА позво­ляет также выявить пациентов, получивших неадекватное лечение, в результате чего РПР может быть отрицательной при подозрительных на сифилис клинических проявлениях. 2. РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) основана на аг­глютинации эритроцитов, сенсибилзнроаанных антигенами T.palliidum, под действием специфических антитрепонемных антител, РПГА ставят в штексиглазовых планшетах с лунка­ми с испытуемой сывороткой в последующих разведениях от 1:10 до 1:80 в физиологическом растворе хлорида натрия. В каждую лунку с помощью микропипетки вносят по 1 кап­ле эритроцитарного диагностикума. Обязательно ставят по­ложительный и отрицательный контроли. Учет реакции может быть проведен через 2 часа. При положительной ре акции образуется осадок в виде «зонтика», при отрицатель­ной - в виде «пуговки»..С помощью Р11ГА можно проводить количественные измерения титра специфических антитрепо-немных антител в сыворотках пациентов. Реакция обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Диагности­ровать ранний первичный сфифилис РПГА позволяет в 90% случаев, вторичный сифилис, а также латентную позднюю ста­дий - в 100%. Поэтому РПТХ может быть применена как для скрининговых, так и для подтверждающих исследований. В Последнее время для скрининг-тестирования используют и ИФА-тест-системы.

3. Реакция иммобилизации бледных трепанем (РИБТ) дает наибо­лее точные результаты, Ее ставят с живыми T.pallidum, штамм Никольс, полученными из яичек зараженных кроликов. В про­бирку со взвесью трепонем добавляют инактивированную сы­воротку больного и комплемент (в контрольной пробирке комплемент инактивирован). После 18-часовой инкубации при 37°С проводят темнопольиую микроскопию опытной и конт­рольной смеси и определяют процент погибших (иммобилизи-ревенных) трепонем. За положительный результат принимают 51-100% трепонем, потерявших подйижноеть, Пааимер&зную цепную реакцию (ПЦР) при сифилисе начали при­менять недавно. Метод является высокочувствительным и специфич­ным и может применяться как альтернатива традиционному метолу прямого выявления возбудителей - исследованию в темном поле зре­ния. Его использование показано также для выявления серонегативно-го первичного сифилиса, врожденного и нейросифилиса, а также для диагностики сифилиса у ВИЧ-инфицированных людей и при атипич­ном течении заболевания.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1347 | Нарушение авторских прав