АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Лабораторная диагностика сифилиса
Для диагностики сифилиса применяют микроскопические и серологические методы исследования, перспективной является ПЦР.
Микроскопическое исследование проводят в первичном и вторичном (свежем и рецидивном) периодах заболевания, а также при подозрении на врожденный сифилис Материалы для исследования; отделяемое твердого шанкра, язв, эрозий, содержимое различных высыланий на коже и слизистых, пунктаты лимфоузлов; амниотичес-кая и плацентарная жидкости.
Наилучшие результаты дает темнопольная микроскопия, Следует помнить, что при исследовании материалов со слизистых полости рга и половых органов в них могут находиться неспецифические трепонемы - представители нормальной микрофлоры, В отличие от них бледная хрепонема очень тонкая, имеет равномерные крутые завитки, для нее характерны плавные движения и, в том числе, сгибательные, маятникообразные, которые обычно отсутствуют у других трепонем. Обнаружение возбудителей в исследуемом материале позволяет поставить диагноз сифилиса даже без серологического подтверждения при наличии клинической картины,
Серологический метод является основным методом диагностики сифилиса. Он позволяет определять антитела на всем протяжении заболевания, начиная с 3-4 недели (первичный серопозитивный сифилис). Исследуемый материал: кровь, сыворотка крови, плазма, ликвор, Для выявления сифилиса предложено множество различных серологических реакций, которые подразделяют на две группы:
/. Нетрепонемные тесты, которые ставят с неспецифическим кар-диолипиновым антигеном, представляющим собой липидный экстракт из сердца крупного рогатого скота с добавлением лецитина и холестерина, С помощью этих тестов выявляют антилипидные антитела - реагины. Нетрепонемные тесты не всегда специфичны дпя сифилиса, их используют для предварительной диагностики сифилиса в качестве отборочных скрининговых реакций. Все они основаны на механизме реакции преципитации (флоккуляиии), При взаимодействии кардиолипинового антигена, с антилипиддьши антителами сыворотки образуются хорошо видимые хлопья. К ним относятся микрореакция преципитации (МРП) или ее модификация (RPR-PITR, TRUST-TRACK, VDRI-ВДРЛ). Применяемая в качестве обязательной РСК (реакция Вассермана) по Приказу МЗ РФ №87 от 2001 г отменяется с 2006г.
Необходимо учитывать, что реакции с кардиолипиновым антигеном могут давать ложноположительные результаты при целом ряде инфекций с затяжным, хроническим течением (при малярии, сыпном тифе, возвратном тифе, туберкулезе и лепре, бруцеллезе и пр.); при злокачественных новообразованиях, болезнях крови и печени,, ревматизме, незадолго до родов и в течение 2-х недель после родов, после приема алкоголя, жирной пищи, некоторых лекарственных средств и т.д.
В сомнительных случаях серологические исследования продолжают, используя одну или несколько подтверждающих реакций (трепонемных тестов.)
2. Трепонемные тесты, которые ставят со специфическими трепо-немными антигенами. Их готовят из тканевых Т.pallidum, штамм Никольс, полученных из яичек зараженных кроликов. С помощью трепонемных тестов выявляют наличие специфических антитрепонемных антител в сыворотке больного. Эти тесты являются подтверждающими и позволяют ставить окончательный диагноз, К подтверждающим реакциям относятся:
- реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА);
- реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (РИФ-Абс) и ее варианты JgM - РИФ-Абс;
- иммуноферментиый анализ (ИФА);
- реакция иммобилизации бледных трепонем (ШБТ).
Скрининг-реакции при сифилисе
Отборочные и подтверждающие серологические реакции используют при массовых обследованиях на сифилитическую инфекцию различных контиигентоэ людей: доноров крови, беременных женщин; больных, находящихся на излечении» стационарах различного профиля; работников дет,ских учреждений и пищевых предприятий и др, К таким скрининг-реакциям относятся: микрореакция преципитации, и ее модификации РПР и др.
1, а) Микрореакция прег^итшщим (МРП) является отборочной реакцией. Ее ставят с плазмой или сывороткой крови, к которым добавляют кард иол ип и новы и антиген. В положительном случае выпадает преципитат в виде хлопьев белого цвета,
б) РПР (RPR- Rapid Plasma.Reagtn) - быстрый реагнновый тест. РПР-реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, адсорбированным на стандартных угольных частицах. РПР ставят на специальных пластинах с помощью автоматической микропипетки Испытуемую сыворотку разводят последовательно от 1:2 до 1:512, В каждую каплю разведеннойсыворотки вносят по 1 капле антигена, ставят положительный и отрицательный контроль (тщательно смешивают на платформе орбитального ротатора при скорости 100 оборотов в минуту). По истечении 8 минут проводят визуальный учет результатов. При взаимодействии антигена и реагяно-вых антител в пробе образуются хлопья, видимые невооруженным глазом. В отсутствие реагиновых антител склеивание (флоккуляция) не происходит, частицы угля с антигеном остаются в мелкодисперсном состоянии, Титром образца считается последнее разведение сыворотки, в котором обнаруживается положительный результат. По Приказу МЗ РФ №87 от 2001г реакции с кардиолипиновым антигеном проводят с количественной оценкой (определяют титр реагинов), что позволяет оценить эффективность лечения (по скорости снижения титра реагинов). Снижение титра реагинов в 4 раза и более указывает на излечение сифилиса. Чувствительность МРП и РПР на разных стадиях сифилитической инфекции различна, например: при первичном сифилисе ока составляет 85%t при вторичном - 100%, при латентном - 90%, на поздних стадиях заболевания - 95%. При проведении скрининговых исследований на сифилис целесообразно одновременно проводить МРП и РПГА, т.к. положительная РПР отмечается при первичном сифилисе на 7-12 дней раньше, чем РПГА. Комплекс РПР и РПГА позволяет также выявить пациентов, получивших неадекватное лечение, в результате чего РПР может быть отрицательной при подозрительных на сифилис клинических проявлениях. 2. РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) основана на агглютинации эритроцитов, сенсибилзнроаанных антигенами T.palliidum, под действием специфических антитрепонемных антител, РПГА ставят в штексиглазовых планшетах с лунками с испытуемой сывороткой в последующих разведениях от 1:10 до 1:80 в физиологическом растворе хлорида натрия. В каждую лунку с помощью микропипетки вносят по 1 капле эритроцитарного диагностикума. Обязательно ставят положительный и отрицательный контроли. Учет реакции может быть проведен через 2 часа. При положительной ре акции образуется осадок в виде «зонтика», при отрицательной - в виде «пуговки»..С помощью Р11ГА можно проводить количественные измерения титра специфических антитрепо-немных антител в сыворотках пациентов. Реакция обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Диагностировать ранний первичный сфифилис РПГА позволяет в 90% случаев, вторичный сифилис, а также латентную позднюю стадий - в 100%. Поэтому РПТХ может быть применена как для скрининговых, так и для подтверждающих исследований. В Последнее время для скрининг-тестирования используют и ИФА-тест-системы.
3. Реакция иммобилизации бледных трепанем (РИБТ) дает наиболее точные результаты, Ее ставят с живыми T.pallidum, штамм Никольс, полученными из яичек зараженных кроликов. В пробирку со взвесью трепонем добавляют инактивированную сыворотку больного и комплемент (в контрольной пробирке комплемент инактивирован). После 18-часовой инкубации при 37°С проводят темнопольиую микроскопию опытной и контрольной смеси и определяют процент погибших (иммобилизи-ревенных) трепонем. За положительный результат принимают 51-100% трепонем, потерявших подйижноеть, Пааимер&зную цепную реакцию (ПЦР) при сифилисе начали применять недавно. Метод является высокочувствительным и специфичным и может применяться как альтернатива традиционному метолу прямого выявления возбудителей - исследованию в темном поле зрения. Его использование показано также для выявления серонегативно-го первичного сифилиса, врожденного и нейросифилиса, а также для диагностики сифилиса у ВИЧ-инфицированных людей и при атипичном течении заболевания.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1342 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 |
|