АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Описан Монтгомери в 1921 г. Вирус АЧС выделен в отдельное семейство.

Морфология и химический состав. Вирионы представляют собой округлые частицы, диаметром 175-215 нм, состоящие из 2-слойного икосаэдрического капсида и наружной оболочки. Нуклеоид содержит ДНК и белок и окружен элек­тронно-прозрачным слоем Двухслойный капсид состоит из 1892-2172 капсомеров. Наруж­ная липопротеидная оболочка вирионов имеет типичное строение и не необходима для про­явления инфекционных свойств вируса. Между наружной оболочкой и капсидом имеется электронно-прозрачный слой. Плавучая плотность в CsCl составляет 1,19-1,24 г/см³, коэф­фициент седиментации 1800-8000 S. Инфекционность вируса сохраняется при 5°С в течение 5-7 лет, при комнатной температуре - 18 мес, при 37°С - 10-30 дн. Вирус стабилен при рН 3-10, чувствителен к жирорастворителям и инактивируется при 56°С в течение 30 мин. ДНК не обладает инфекционностью. В вирионах вируса АЧС обнаружено 54 полипептида. С вирионами ассоциировано несколько ферментов, необходи­мых для синтеза ранних иРНК.

Вирус АЧС размножается в цитоплазме клеток, однако функция ядра также необходима для его репродукции. В инфицированных клетках обнаружено 106 вирусспецифических бел­ков, из которых 35 синтезируются до начала репликации вирусной ДНК (ранние белки) и 71 после репликации ДНК (поздние белки). Вирионы созревают в цитоплазме и приобретают наружную оболочку при почковании через цитоплазматическую мембрану. Вирус размно­жается в организме свиней и клещах рода Ornithodoros. В организме свиней вирус реплицируется в моноцитах, макрофагах и ретикулоэндотелиальных клетках. У самок клещей вирус сохраняется более 100 дн, передается трансовариально и трансфазно.

Известно, что проникновение вирусов в организм сопровождается образованием ВНА. Исключение представляет прежде всего вирус АЧС.Инфицирование этим вирусом не инду­цирует у животных синтез ВНА, хотя в сыворотке крови выявляют КСА, ПА и типоспецифические задерживающие ГА AT. Отсутствие ВНА обусловливает неспособность организма связывать и элиминировать вирус, что, в свою очередь, приводит к исключительно высокой летальности инфицированных животных. С другой стороны, отмеченный парадоксальный феномен сводит на нет, попытки создания эффективной вакцины, поскольку аттенуированные штаммы вируса вызывают у свиней хроническое течение болезни и длительное вирусо-носительство, что весьма опасно в эпизоотологическом отношении. Вирус АЧС обладает от­дельными характеристиками иридо- и поксвирусов. Является единственным представите­лем уникального семейства ДНК кодирует свыше 100 полипептидов, из которых более 30 обнаружено в препаратах очищенного вируса. Капсид образуют, в основном, полипептиды с мол.м. 73 и 37 кД С капсидом ассоциирована и ДНК-зависимая РНК-полимераза, участвующая в начальных стадиях ре­продукции вируса. ДНК представляет 2-нитчатую структуру мол. м 10О10^бД, состоя­щую из 170 тыс. п.о. длиной 58 нм.

Вирус АЧС имеет 20-гранную форму, величина его 175-215 нм, покрыт 2-слойной липопротеиновой оболочкой, имеющей антигенное родство с тканями хозяина. Далее распола­гается 3-слойный капсид из периодически размещенных капсомеров, внутри находится нуклеопротеид из плотных фибрилл, содержащих ДНК. Поверхностная оболочка и капсид со­держат большое количество липидов. Секвенирование ДНК показало, что вирус АЧС занимает промежуточное положение между поксвируами и иридовирусами и принадлежат к независимому семейству вирусов. Выявлены различия между отдельны­ми изолятами и вариантами вируса, а также механизм и последовательность синтеза вирус-специфических белков, их роль в патогенезе болезни. В составе вирионов и инфицированных клеток установлено 28-37 вирусспецифических белков по дру­гим данным, зарегистрировано 100 структурных и 162 неструктурных вирусспецифических белков м.м. 11,5-245 кД. Считают, что ранние белки синтезируются с концевых участков ДНК, а позд­ние - с центральной её части. В составе вириона выявили ДНК-полимеразу, протеинкиназу и другие ферменты, которые необходимы для раннего синтеза вирусспецифических структур.

Вирус АЧС неоднороден. Он представляет собой гетерогенную популяцию, состоящую из клонов, отличающихся по признакам гемадсорбции, вирулентности, инфекционности, бляшкообразования и антигенным свойствам. По биологическим свойствам вирус, исполь­зуемый для экспериментального заражения свиней, отличается от изолятов вируса, выде­ленных позднее от этих же свиней. В 1991 г. опубликовано сообщение о современных дан­ных по архитектуре морфогенеза и распределению структурных полипептидов в вирионе АЧС. Р.М.Чумак высказал гипотезу о гибридном происхождении вируса АЧС, предками которого явились вирусы группы оспы и один из иридовирусов насекомых. По мнению автора, этот вирус должен быть выделен в отдельное семейство, куда позднее будут отнесены и другие вирусы.

Устойчивость. Вирус АЧС исключительно устойчив в широком диапазоне температур и рН среды, включая высушивание, замораживание и гниение Он может оставаться жизне­способным в течение длительного времени в фекалиях, крови, почве и на различных по­верхностях - деревянных, металлических, кирпичных В трупах свиней инактивируется не раньше чем через 2 мес, в кале - в течение 16 дн, в почве - за 190 дн, а в холодильнике при -30-60°С - от 6 до 10 лет Солнечные лучи независимо от инфицированных объектов (бетон, железо, дерево) полностью инактивируют некоторые штаммы вируса АЧС через 12 ч. В условиях свинарника при 24°С естественная инактивация вируса может происходить максимум за 120 дней Оптимальным для дезинфекции инфицированных помещений оказался 0,5%-ный р-р формалина. За­мораживание не влияет на биологическую активность вируса, но является начальной стади­ей повреждения генома. Высушивание вируса без стабилизатора вызывает потерю его инфекционности. В мясе инфицированных свиней и копченых окороках он сохраняется 5-6 мес Продолжительную устойчивость возбудителя в крови, экс­кретах и трупах учитывают при планировании ветеринарно-санитарных мероприятий По­скольку вирус сохраняет жизнеспособность в инфицированных свинарниках в течение 3 мес, именно этому сроку соответствует экспозиция, после которой разрешается завоз новой партии свиней. На устойчивость вируса влияют состав и рН среды, в которой он суспендирован, содержание белка и минеральных солей, степень гидратации, природа исследуемого вируссодержащего материала. При 5°С он сохраняет активность в течение 5-7 лет, при хра­нении в условиях комнатной температуры - до 18 мес, при 37°С -10-30 дн. При 37°С инфекционность его снижалась на 50% в течение 24 ч в среде с 25% сыворотки и в течение 8 ч в среде без сыворотки. При 56°С небольшое количество вируса сохраняло инфекционность более 1 ч, поэтому применяемой на практике 30-мин инактивации сыворотки при 56°С не­достаточно для разрушения возбудителя При 60°С он инактивировался в течение 20 мин Вирус исключительно устойчив как в кислой, так и в щелочной среде Большинство дезин­фицирующих веществ (креолин, лизол, 1,5%-ный р-р NaOH) не инактивирует его.

Наи­большее вирулицидное действие на него оказывают хлорактивные препараты (5%-ный р-р хлорамина, гипохлориты натрия и кальция с 1-2% активного хлора, хлорная известь) при 4-часовой экспозиции. Гидроксид натрия в виде 3%-ного р-ра рекомендуется при дезинфекции только в горячем виде (при температуре 80-85°С). При дезинфекции особое внимание об­ращают на тщательную механическую очистку и промывание горячей водой, так как орга­нические вещества навоза могут снижать эффективность дезинфекции.

АГ структура. Сложная. Возбудитель содержит групповые КС-, преципитирующий и типовой ГАд антигены. Вопросы о сущности инфекционного АГ, индуцирующего образование ВНА, остается до сих пор открытым. Иначе вопрос обстоит с АГ, индуцирующими образование AT, задержи­вающих гемадсорбцию. Сыворотки с анти-ГАд свойствами широко используются всеми ис­следователями, изучающими проблему АЧС.

АГ вариабельность и родство. На основании задержки гемадсорбции выделено две АГ А- и В - группы (типы) и одна подгруппа С вируса АЧС. В пределах А-, В -групп и С -подгруппы выявлено много серотипов этого возбудителя.

С помощью иммунопробы и РЗГА установлено по 7 референс-штаммов каждой группы. Методом иммуноблоттинга с монАТ выявлено 6 групп, а рестрикционным анализом - 4 группы и 3 подгруппы. Имеются сообщения о высокой изменчивости вируса АЧС по антигенности, вирулентности и другим свойствам, а также о существовании смешанных популяций его, которые трудно поддаются аттенуации. На примере шт. Керовара-12, выделенного от бородавочника в Танзании, показана ти­повая гетерогенность популяции АЧС, особенности вируса взаимосвязь с патологиче­ским и иммунологическим процессами в организме зараженных свиней. Большинство изолятов, выделяемых во время эпизоотии от домашних свиней в Африке, имели различные ГА АГ. Главный АГ - при диагностике с помощью ELISA оказался ста­бильным. АГ различия между шт. вируса АЧС невозможно определить с помощью твердофазного ИФА, РДП и ИЭОФ, так как этими методами выявляются лишь общие для всех шт вируса АЧС АГ. Это удается сделать лишь методом истощения культурального АГ вируса АЧС гетеротиповой сывороткой. Как видно из приведенных выше фактов, серологиче­ский и иммунологический пюралитет вируса АЧС - один из основных его свойств.

Локализация вируса. Вирус обнаруживают во всех органах и тканях больных живот­ных. В крови он появляется во время первоначального повышения температуры и обнару­живается там до гибели животного в титрах от 10' до 10⁸ ГАдзо/мл. При хроническом тече­нии болезни титр вируса в крови быстро снижается, виремия носит прерывающийся харак­тер При отсутствии виремии он может долго (до 480 дн) сохраняется в селезенке и лимфо­узлах Точная локализация вируса при латентном течении болезни не установлена В перво­начально инфицированных органах (лимфоидная ткань в области глотки) вирус сохранялся в титре около 10 ГАД_да, до гибели животного Наивысшие титры его (IО⁸) наблюдали в тканях содержащих большое количество ретикулоэндотелиальных элементов селезенке, костном мозге, печени что согласуется с выявлением в этих тканях значительных пораже­ний Первичным местом локализации вируса являются миндалины Присутствие его в лей­коцитах с 1-го дня инфекции свидетельствует о том, что возбудитель заносится в другие ткани лейкоцитами Появление вируса в селезенке и костном мозге через 2 дня и быстрое повышение титра вируса в этих тканях дает основание полагать, что они являются местом вторичного размножения возбудителя.

Из организма зараженных животных вирус выделяется с кровью, носовыми экскретами, фекалиями, мочой, слюной и, вероятно, через легкие с выдыхаемым воздухом. У большин­ства выживающих животных вирусоносительство практически пожизненное Периодически вирус может быть выделен из крови, лимфоузлов, легких, селезенки Из других тканей вы­деление его затруднительно. Вирусовыделение наступает на 2-4-й дн после появления лихо­радки. Стресс-факторы способствуют обострению инфекции и выделению вируса во внешнюю среду. При этом сезонность вирусовыделения связана с опоросами. В клещах Ornithodoas вирус АЧС размножается в кишечнике и затем распространяется в слюнные железы и репродуктивные органы. Клещи могут оставаться персистентно инфицированными и передавать вирус в течение 3-х лет, наряду с бородавочниками они создают перманентный резервуар вируса для домашних свиней. Клещи способны передавать его трансовариально и трансфазово. Концентрация вируса в клещах выше, чем у свиней-вирусоносителей

АГ активность. В сыворотках реконвалесцентов появляются преципитирующие, КС и задерживающие ГАд AT, не влияющие на ЦПД вируса ПА и КСА не являются типоспецифическими, они общие для всех шт, тогда как AT, задерживающие РГАд, строго типоспецифичны и используются для типирования вируса АЧС. КСА и ПА не связаны с образова­нием иммунитета. ВНА не образуются.Сыворотки животных-реконвалесцентов специфически задерживают ГАд в культурах, инфицированных гомологичным виру­сом АЧС. Титр таких AT достигает максимума через 35-42 дней после клинического выздо­ровления животных. Вирус АЧС не вызывает формирование ВНА и гуморальные компонен­ты иммунной реакции не имеют большого значения Неспособность вырабатывать ВНА против вируса АЧС, обусловлена свойствами самого возбудителя.

Взаимодействие вируса с AT. Одна из причин недостаточной изученности иммуноло­гии АЧС - отсутствие нейтрализации вируса AT - главного свойства других вирусов, состав­ляющих традиционную основу изучения их иммуногенности со времени открытия серологи­ческих реакций. В этом отношении существует только один зоопатогенный аналог - парвовирус алеутской болезни норок, но известна также низкая способность к нейтрализации ти­пичных представителей иридовирусов. Было предпринято много попыток изучения этого уникального феномена, но удовлетворительного объяснения до сих пор не предложено, вер­сий много - от отсутствия вирионных гликопротеинов до антигенной мимикрии и гетероген­ности. В стремлении выяснить данный вопрос авторы поэтапно исследовали результа­ты взаимодействия вируса с AT, вируса с чувствительными клетками в культуре и комплек­са вирус+АТ с чувствительными клетками. Показано, что иммунный комплекс (АГ+АТ) беспрепятственно проникает в чувствительные клетки, и вирус сохраняет исходную репро­дуктивную активность. При АЧС нейтрализация вируса in vitro сопровождается эффектом - усилением вирусного размножения и экстенсивной патологией за счет распространения инфицированных моноцитов-макрофагов.

У серопозитивных аборигенных животных в крови обнаруживаются специфические КСА и ПА в титрах до 1.128 и 1:64 соответственно. Специфические AT в крови поро­сят появляются только после приема молозива от серопозитивных свиноматок. Уровень AT в молозиве был равен или превышал концентрацию их в крови.

Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению невосприимчивы кошки, собаки, мыши, крысы, кролики, куры, голуби, овцы, козы, КРС и лошади. У экспе­риментально зараженных аргасовых клещей Ornithodoros turicata вирус выявляли методом биопробы в течение года. В кишечнике клеща установлено наиболее раннее и длительное присутствие вируса. Быстрое распространение его и репликация в других тканях происходит посредством гемолимфы. Уже через 24 ч после заражениях помощью МФА выявляли АГ. Через 2-3 нед вирус обнаруживали в гемоцитах, а к 6-7-й нед - в большинстве тканей.

Культивирование. Для культивирования вируса АЧС могут быть использованы под­свинки 3-4-мес возраста, которых заражают любым способом. Чаще заражают внутримы­шечно в дозе 10⁴-10^б ГАД_5о. При развитии клинических симптомов болезни на 4-6-е сутки по­сле заражения животных убивают и в качестве вируссодержащего материала используют кровь и селезенку, в которых вирус накапливается в титре 10⁶-⁸ ГАд₅₀ Попытки культивиро­вать вирус АЧС в организме других животных успеха не имели.

К вирусу чувствительными оказались культуры лейкоцитов крови и макрофагов костно­го мозга свиней. Обычно заражают клетки на 3-4-й день роста в дозе 10³ ГАД вируса на 1 мл питательной среды. Через 48-72 ч он накапливается в культурах клеток в титре 10⁶ ГАД те/мл. Вирус АЧС инфицировал большинство макрофагов и только около 4% полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови. В- и Т-лимфоциты, находящиеся в стадии покоя не обладают чувствительностью к вирусу. Послед­ний реплицируется в макрофагах, и в наивысших титрах содержится в эрит­роцитах свиней. Он проникает в клетку главным образом рецепторнезависимым путем, реп­ликация его происходит в цитоплазме, но для синтетических процессов необходимо участие ядра. Возможно заражение более чем одной частицей вируса, что предполагает наличие не­скольких его субпопуляций в одной клетке и их взаимодействие. Число клеток, содер­жащих АГ на поверхности, спустя 13-14 ч достигает максимального уровня. Предполагается, что в их оболочках содержится ГАд АГ.

Вирус размножается в культурах лейкоцитов и костного мозга свиней с развитием ГАд и ЦПД без адаптации. При оптимальной дозе заражения ГАд проявляется через 18-24 ч, ЦПД - через 48-72 ч и характеризуется образованием цитоплазматических включений с по­следующим вытеканием цитоплазмы и появлением многоядерных гигантских клеток (клеток-теней) Он проникает в клетки адсорбционным эндоцитозом. "Раздевание" вирионов происходит в эндосомах, в других внутриклеточных везикулярных органеллах.

ГАд вируса в зараженных культурах настолько специфична, что используется в качестве основного теста в диагностике болезни. В других видах культур клеток вирус без предварительной адаптации не размножается. Он адаптирован к ряду гомо- и гетерологичных культур: перевиваемым линиям клеток почки поросенка (ПП и РК), почки зеленой мар­тышки (MS, CV), Vero-клеткам почки макаки и др. В литературе мало уделяется внимания влиянию углеводных компонентов, которые могут составлять от 50 до 90% массы гликопротеидов, на иммуногенность вируса: одной из причин слабой иммуногенности оболочечного гликопротеида (gp 120) вируса иммунодефицита (ВИЧ) является то, что 50% его массы обу­словлено "атмосферой" сахаров, которая может играть негативную роль, препятствуя, на­пример, доступу AT к сайту фиксации на оболочке ВИЧ, т.е жизненно важные участки ВИЧ "химически" защищены от действия иммунной системы. Не исключено, что причиной не нейтрализуемости вируса АЧС может быть наличие высокогликозилированных белков на поверхности вирионов. О сосуществовании гликозилированных компонентов неизвестной природы в оболочке вирионов АЧС сообщалось Мюдель Вал и др. в 1986 г. Наличие таких компонентов на мембранах клеток также может способствовать "ускользанию" от других эффекторных механизмов иммунной системы хозяев и повышать его патогенность.

ГА и ГАд свойства. ГА свойствами вирус не обладает. При размножении его in vitro в культурах лейкоцитов или клетках костного мозга свиней наблюдают явление адсорбции эритроцитов на поверхности пораженных клеток. Эритроциты прикрепляются к стенке лей­коцита, образуя вокруг него характерный венчик и иногда закрывая клетку со всех сторон, вследствие чего пораженные лейкоциты внешне напоминают тутовую ягоду. Время появле­ния ГАд зависит от инокулируемой дозы вируса и может проявиться уже через 4 ч, но в большинстве случаев - через 18-48 ч, а при низких титрах вируса - через 72 ч. С увеличени­ем времени инкубации число пораженных клеток возрастает, затем они начинают просвет­ляться, и проявляется ЦПД вируса. Чувствительность РГАд зависит от свойств вируса и степени его накопления в инфицированной культуре клеток. Она выявляется под световым микроскопом при достижении титра инфекционности в культуре не ниже 10⁴ ЛД₅о/мл. По мнению отдельных авторов, время наступления ГАд зависит от титра вируса в исследуемой пробе материала. Снижение титра вируса АЧС влечет за собой снижение чувствительности РГАд. В связи с этим в ряде случаев возникает необходимость проведения до трех последо­вательных серийных "слепых" пассажей вируса в культуре лейкоцитов или костного мозга, чтобы подтвердить наличие его в исследуемом материале в случае ГАд варианта Иногда выделяются негемадсорбирующие штаммы вируса, обладающие только выраженными цитопатогенными свойствами. При пассировании их в культуре клеток не менее 50 раз и зара­жении свиней гемадсорбция не восстанавливалась. В ЮАР выделили негемадсорбирующий штамм от домашних свиней при естественной эпизоотии. Позднее там был выделен неге­мадсорбирующий вариант из суспензий клещей О tnoubata, собранных в очагах инфекции. Так как специфическая ГАд характеризует вирулентность штаммов АЧС, выделение менее вирулентных негемадсорбирующих вирусов от свиней с хронической пневмонией представляет большой интерес. Однако отдельные негемадсорбирующие изоляты или клоны могут быть высоковирулентными. Механизм реакции ГАд, а также локализация ответствен­ных за ГАд АГ не установлены. Показана важная роль внешних мембран вирионов в связы­вании их с эритроцитами, так как вирионы, не имеющие оболочек, на эритроцитах не ад­сорбируются. Антигены, которые принимают участие в ГАд, локализованы в оболочках ви­рионов, происходящих из цитоплазматических мембран клеток хозяина

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 992 | Нарушение авторских прав