АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

В. Регуляторные белки клеточных мембран

• Фактор, ускоряющий разрушение (DAF) и мембранный кофакторный белок (MCP) выполняют те же функции, что фактор Н и C4bBP, но действуют на С3b и C4b на поверхности клетки.

• DAF препятствует образованию С3 конвертаз путем ускорения диссоциации С4b с С2a и C3b c Bb

– Клиническая значимость: дефицит DAF ассоциируется с пароксизмальной ночной гемоглобинурией - эритроциты таких людей характеризуются повышенной чувствительностью к комплемент-опосредованному лизису

• MCP - интегральный мембранный белок, способствующий протеолитической инактивации С3b и C4b фактором I.

• Гомологичный ограничивающий фактор (HRF) или С8-связывающий белок; препятствует ассоциации С8 с комплексом С5b67.

Заболевания:

1. Дефицит С1, С2, С4, С5 приводит к аутоиммунным процессам, вирусным инфекциям.

2. Дефицит С3, С5 сопровождается частыми гнойными инфекциями.

3. Дефицит С2 компонента, С1-ингибитора и С3-инактиватора приводит к развитию ангионевротического отека.

4. Дефицит С6,С7,С8 вызывает повышенную чувствительность к нейссериям

Методы исследования системы комплимента:

1. Определение общей гемолитической активности классического пути. Сыворотку крови разводят физиологическим раствором 1:10 и вносят в пробирки в объеме от 0,05 до. 0,5 мл. Объем проб доводят до 1,5 мл физиологическим раствором и вносят по 1,5 мл гемолитической системы (смесь равных объемов 3% взвесей бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки). Пробирки инкубируют при 37°С 45 минут - охлаждают при 4°С для остановки реакции и центрифугируют при 1500 оборотов 4-5 минут. После центрифугирования определяют объем сыворотки, вызывающий лизис 50% сенсибилизированных эритроцитов (условную гемолитическую единицу активности комлемента - СН 50), затем рассчитывают количество СН 50 на мл цельной сыворотки. У здоровых людей титр комлемента (СН 50 на мл) составляет примерно 40-60 СН 50.

Гемолитическую активность альтернативного пути комплемента определяют также, но вместо сенсибилизированных бараньих эритроцитов используют несенсибилизированные кроличьи эритроциты и физиологический раствор, содержащий ионы Mg, но без Са для блокирования классического пути активации.

2.Определение функциональной активности отдельных компонентов. Этот метод позволяет определить численность функционально активных молекул в I мл сыворотки крови. Для этого к сенсибилизированным эритроцитам добавляют реагент на определенный компонент комплемента (в качестве реагента используют либо смесь компонентов комлемента, исключая искомый, либо сывоттку крови, лишенную активности этого компонента. Сыворотку для титрования компонентов классического пути разводят в 40-50 -раз, а альтернативного - в 5-7 раз. Таким образом можно установить дефект определенных компонентов и определить профиль комплемента при различных заболеваниях.

3. Иммунохимическое определение концентрации компонентов комплемента. Данный метод исследования позволяет определить концентрацию каждого из белков комплемента, используя антисыворотки (АТ) к ним.

4. Определение активности комплемента и его компонентов методом радиального гемолиза в агаровом геле. Гемолитическую систему смешивают с расплавленным агаром в соотношении 1:7 и быстро выли­вают в стерильные чашки Петри. После застывания в агаре проделывают лунки диаметром 4 мм (до 15 лунок на 1-ой чашке). Лунки заполняются испытуемыми сыворотками и помещают чашки в холодильник при 4°С на 21 час для диффузии белков комплемента в агар. Затем чашки помещают в термостат на 1 час для проявления зон гемолиза. Критерием активности комплемента служит

квадрат диаметра зон гемолиза.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1021 | Нарушение авторских прав