АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение количества тромбоцитов в крови или плазме с помощью фазово-контрастного микроскопирования

Исследуемый образец. Венозная кровь, стабилизированная 3,8% раствором цитрата натрия (в соотношении 9:1, кровь берется в силиконированную или полиэтиленовую пробирку), или нестабилизированная кровь, а также капиллярная кровь, взятая капилляром (лучше силиконированным) от гемометра Сали.

Реактивы и оборудование. Микроскоп с фазово-контрастным устройством, камера Горяева, чашка Петри, капилляры от гемометра Сали (на 0,02 мл), 1% раствор оксалата аммония, пробирки (1х10 см) силиконированные или полиэтиленовые.

Ход определения. 0,02 мл венозной крови (или капиллярной, взятой при проколе пальца из второй капли капилляром от гемометра Сали) приливают в пробирку с 1,98 мл раствора оксалата аммония (разведение в 200 раз). Тщательно перемешивают. Заполняют обе сетки камеры Горяева и для оседания тромбоцитов и гемолиза эритроцитов на 20 - 30 минут помещают их во влажную камеру (чашка Петри со смоченной марлей). Нужно иметь несколько таких камер, чтобы значительно ускорить определение числа тромбоцитов.

В каждой сетке подсчитывают тромбоциты в 25 (или лучше в 50) больших квадратах. Тромбоциты видны как маленькие сферические образования, иногда с псевдоподиями, хорошо преломляющие свет. Для расчета количества тромбоцитов в 1 л крови число тромбоцитов в 25 больших квадратах следует умножить на 2х10⁶.

Замечания по технике выполнения и причины ошибок. Необходимо точно соблюдать указанное время оседания тромбоцитов в камере Горяева.

Раствор оксалата аммония следует менять каждую неделю. Рекомендуется готовить не более 500 мл раствора оксалата аммония на бидистиллированной воде и обязательно его профильтровать. Хранить при температуре +4 ⁰С. Перед каждым подсчетом тромбоцитов раствор нужно снова фильтровать.

Эритроциты хорошо разрушаются аммонием, лейкоциты и тромбоциты не разрушаются. Тромбоциты подсчитываются, когда под микроскопом отчетливо видны обломки эритроцитов.

При использовании обычного микроскопа в раствор оксалата аммония можно добавить несколько капель бриллиант-крезилового синего.

Практическое значение. Нормальное содержание тромбоцитов в периферической крови составляет 150 - 450 х 10⁹/л. Снижение содержания тромбоцитов менее 150 х 10⁹/л обозначается термином тромбоцитопения. Причиной тромбоцитопении может быть иммунный конфликт, механическая травма тромбоцитов (при гемангиомах, спленомегалии), угнетение пролиферации клеток костного мозга (при апластической анемии, химическом или радиационном поражении костного мозга), вытеснение кроветворных клеток костного мозга опухолевой тканью (острые и некоторые формы хронических лейкозов, метастазы опухолей) или соединительной тканью (III - IV стадии сублейкемического миелоза), соматическая мутация тромбоцитов (болезнь Маркиафавы-Микели), повышенное потребление тромбоцитов(тромбозы, ДВС-синдромы, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура), а также недостаток витамина В₁₂ и/или фолиевой кислоты. Следует также помнить о тромбоцитопениях, сопровождающих (а нередко и маскирующих) проявления разнообразных соматических заболеваний. Тромбоцитопения может предшествовать развитию системных проявлений при системной красной волчанке (гематологическая форма СКВ) и хроническом активном гепатите. Тромбоцитопения может сопровождать разнообразную патологию щитовидной железы (чаще всего диффузный токсический зоб, а также аутоиммунные тиреоидиты и опухолевые поражения). Тромбоцитопения может проявляться также как составной компонент синдрома, описанного у беременных на фоне поздних токсикозов. Синдром носит название HELLP по начальным буквам английского наименования основных проявлений - гемолитическая анемия, повышение активности печеночных ферментов, тромбоцитопения.

Повышение содержания тромбоцитов выше 400 - 450 х 10⁹/л носит название тромбоцитоз. Его причиной могут быть миелопролиферативные заболевания, возникающие из общей клетки-предшественницы миелопоэза (в этом случае повышение содержания тромбоцитов является отражением опухолевой пролиферации мегакариоцитарного ростка). Тромбоцитоз может быть также реактивным и сопровождать острые и хронические инфекционно-воспалительные процессы (сепсис, остеомиелит), системные заболевания (ревматоидный полиартрит, неспецифический язвенный колит), железодефицитные анемии, хронические панкреатиты, цирроз печени и лечение пернициозной анемии препаратами витамина В₁₂. Особое внимание следует обращать на обнаружение тромбоцитоза, не укладывающегося ни в какие симптомокомплексы, в том числе вышеперечисленные. В этом случае тромбоцитоз является настораживающим в отношении наличия опухолевого процесса и чаще всего сопровождает рак легкого, яичников, кишечника, печени, а также мезотелиому плевры. Механизм тромбоцитоза в данном случае может быть связан с продукцией интерлейкина-1, интерлейкина-6 и фактора некроза опухоли, обладающих способностью стимулировать тромбоцитопоэз.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 698 | Нарушение авторских прав