АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тест на агрегацию тромбоцитов под влиянием АДФ

Принцип метода. Добавление раствора АДФ к богатой тромбоцитами плазме в норме должно вызывать макроскопически определяемую агрегацию.

Материал для исследования: богатая тромбоцитами плазма, лучше со стандартным содержанием тромбоцитов (250 000 в 1 мкл). За 7 - 10 дней до исследования отменяют лекарственные препараты, так как многие из них (ацетилсалициловая кислота и ее производные, индометацин, фенилбутазон, низкомолекулярные декстраны, трициклические антидепрессанты и др.) угнетают агрегацию тромбоцитов.

Реактивы и оборудование. Раствор АДФ в физиологическом растворе (0,2 мг/мл), силиконированные пипетки на 0,2 мл и пробирки, секундомер, водяная баня на 37 ⁰С.

Выполнение метода. 0,2 мл цитратной плазмы, богатой тромбоцитами, приливают в пробирку, находящуюся в водяной бане при 37⁰С. Через 60 с в эту пробирку вносят 0,1 мл подогретого при 37 ⁰С раствора АДФ и одновременно включают секундомер. Остановка секундомера производится в момент макроскопического обнаружения агрегатов (крупинок).

Практическое значение. Тест считается положительным, если агрегация тромбоцитов наступает ранее, чем за 60 с после добавления АДФ и отрицательным, если позднее. Можно указать результат в секундах.

Тест является вполне надежным для использования в клинических лабораториях, но по его результатам нельзя получить информацию о дезагрегации и второй волне агрегации.

Нарушения АДФ-зависимой агрегации наблюдаются при наследственных дизагрегационных тромбоцитопатиях (тромбастения Гланцмана, эссенциальная атромбия, аномалия Мея-Хегглина). В этих случаях реакции высвобождения, как правило, не страдают и нарушения агрегации связаны с наследственными дефектами белков мембраны тромбоцитов. Подобные же нарушения наблюдаются при острых лейкозах и миелопролиферативных заболеваниях, причем нарушения агрегации появляются до развития тромбоцитопении. Причиной нарушений является выделение опухолевым клоном ингибитора агрегации тромбоцитов или дефекты мембраны тромбоцитов, возникающие в связи с их опухолевым перерождением. Миеломная болезнь приводит к значительным нарушениям АДФ-зависимой агрегации за счет присутствия в плазме крови таких больных продуцируемых опухолевой тканью парапротеинов, которые, сохраняя некоторые свойства антител, осаждаются на мембране тромбоцитов и препятствуют их реакции на агрегирующий стимул. Среди лекарственных дисфункций тромбоцитов на первом месте стоит дезагрегационное действие ацетилсалициловой кислоты, которая блокирует синтез тромбоксана и тем самым нарушает сократимость тромбоцита и выделение собственных запасов АДФ.

Примечания. Для точности метода целесообразно ставить параллельные пробы. Лучше одновременно использовать плазму здорового человека. Точная концентрация АДФ не обязательна, но необходимо всегда делать свежие растворы АДФ. Конец реакции трудно уловить, поэтому между параллельными пробами будет разница в несколько секунд. Иногда тромбоцитарные агрегаты настолько малы, что обнаруживаются только под микроскопом.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 846 | Нарушение авторских прав