Реактивы. 1,34% раствор оксалата натрия или 3,8% раствор цитрата натрия; 0,9% раствор хлорида натрия; раствор гепарина (в таком разведении, чтобы после его добавления тромбиновое время увеличивалось в 3 - 4 раза); раствор тромбина (тромбиновое время 30 - 40 с); субстратная плазма (плазма здорового без тромбоцитов).
Ход определения. В пробирку, находящуюся в термостате при 37 0С, вводят 0,1 мл субстратной плазмы, 0,1 мл физиологического раствора и 0,1 мл раствора гепарина. Через 30 с добавляют 0,1 мл тромбина. Отмечают время свертывания. Затем повторяют реакцию, заменив 0,1 мл физиологического раствора 0,1 мл тромбоцитарной взвеси.
Укорочение тромбинового времени (V) определяют по формуле:
A1 x 100
V = 100 -,
A
где А - тромбиновое время гепаринизированной плазмы, А1 - тромбиновое время после добавления тромбоцитов.
Практическое значение. У здоровых людей активность фактора 4 тромбоцитов в пределах 32 - 64%. Фактор 4 тромбоцитов (Р4) - антигепариновый, инактивирует гепарин и гепарансульфат эндотелиальных клеток путем связывания. Гепарансульфат катализирует нейтрализацию тромбина антитромбином III на поверхности эндотелиальной выстилки сосудов, что препятствует превращению фибриногена в фибрин. В результате образования комплекса фактор 4-гепарансульфат у места повреждения стенки сосуда создаются благоприятные условия для свертывания крови и тромбообразования. Активность фактора 4 значительно возрастает при гиперкоагуляции и ДВС-синдромах. Обнаружение повышенной активности фактора 4 тромбоцитов является указанием на склонность к развитию тромбоза.