АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Коагуляционная (коагулянтная, прокоагулянтная) активность тромбоцитов

Чаще всего определяется в тесте генерации тромбопластина, но может быть оценена и более простым методом, например путем сравнительного исследования ускоряющего влияния активированных каолином тромбоцитов обследуемого и здорового человека на свертывание бестромбоцитарной нормальной плазмы.

Гемолизат - агрегационный тест.

Принцип: Гемолизат эритроцитов является специфическим естественным индуктором агрегации тромбоцитов. В тесте определяют время появления видимых глазом агрегатов тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме исследуемого после добавления к ней гемолизата в различных концентрациях. Можно проводить графическую запись на агрегометрах любого типа. Тест высокочувствителен и удобен как скрининг-метод выявления нарушений агрегации тромбоцитов. Для его проведения не требуется стандартизации индукторов агрегации (АДФ и др.)

Реактивы: 1. 3,8% раствор цитрата натрия; 2. Гемолизат эритроцитов; 3. 0,85% раствор хлорида натрия; 4. Дистиллированная вода.

Ход определения: Кровь набирают в силиконированную пробирку, стабилизируют цитратом и отделяют богатую тромбоцитами плазму, а осадок эритроцитов отмывают дважды изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1: 1, центрифугируя каждый раз по 10 минут при 1500 об/мин. После удаления изотонического раствора хлорида натрия 0,1 мл отмытых эритроцитов гемолизируют в 1 мл дистиллированной воды. Это разведение является маточным и обозначается как 10-1.Затем из него последовательными разделениями готовят разведения гемолизата от 10-2 до 10-6, для чего).! Мл каждого предыдущего раствора вносят в заранее приготовленные пробирки с 1,0 мл дистиллированной воды. Рабочими являются растворы 10-2 (максимальная доза гемолизата) и 10-6 (минимальная доза). Исследуемую богатую тромбоцитами плазму разливают по 0,2 мл в две пробирки.После прогревания образцов в течение 1 мин при температуре 37^оС в микротермостате в плазму добавляют 0,05 мл каждого из растворов гемолизата. Немедленно включают секундомер и при постоянном покачивании (важное условие) определяют появление видимых глазом в проходящем свете первых (пылевидных) агрегатов тромбоцитов. Определяют время появления этих агрегатов. Затем отмечают, образуются ли крупные агрегаты, имеющие вид хлопьев.

Вариант методики: Процесс агрегации может быть зарегистрирован на агрегографе любой конструкции. При индукции агрегации разведением гемолизата 10:2 в норме отчетливо регистрируются 1-я и 2-я волны. При индукции агрегации разведением гемолизата 10:6 в норме отчетливо регистрируется только одна волна агрегации, что соответствует появлению пылевидных агрегатов. Типичные агрегатограммы, записанные при выполнении ГАТ, представлены на рис.19.

Рисунок 19. Запись агрегации тромбоцитов в ГАТ.

Оценка результатов: Показания визуального теста выражают в секундах.. При нормальном количестве тромбоцитов время агрегации (ВА) отражает их функциональную активность. Однако, как и при всех других способах регистрации, показания теста существенно зависят от содержания тромбоцитов в плазме.В связи с этим для правильной оценки необходим пересчет.

Показатель агрегационной активности одного тромбоцита (ААТ) определяют по формуле:

К

ААТ,% =------ х 100,

Б

где К - нормальное количество тромбоцитов, соответствующее полученному времени агрегации (определяется по табл. Унифицированных тестов исследования гемостаза у детей); Б - истинное количество тромбоцитов в исследуемой плазме.

Степень активности тромбоцитов в ГАТ оценивают по индексу активации (ИАТ) по формуле:

Кс

ИАТ = ------

Км

где Кс - нормальное количество тромбоцитов, соответствующее времени агрегации при использовании минимальной дозы гемолизата; Км - аналогичный показатель для теста с максимальной дозой гемолизата.

Нормальные величины: 0,82 - 1,17.

Оценка результатов: В повседневной клинико-лабораторной практике результаты ГАТ можно выражать только в секундах. Снижение показателей ГАТ наблюдается при первичных и симптоматических (вторичных) дизагрегационных тромбоцитопатиях, в том числе при формах с нарушением "реакции высвобождения" и нарушенным пулом хранения гранул и тромбоцитарных факторов. В последнем случае значительно снижается ИАТ. Гиперагрегация характерна для ряда предтромботических состояний, тромбозов, инфарктов органов, васкулитов. Значительное повышение Атс часто совпадает с увеличением в кровотоке активированных форм тромбоцитов (набухание отростков) и их спонтанных агрегатов.

Варианты методики. Выполнение теста намного упрощается, если заранее заготовить и расфасовать по 0,1 мл исходный раствор гемолизата, полученного из крови здоровых доноров (около 5 10 клеток/л). При -8^оС в морозильной камере гемолизат может находиться в течение месяца.

Причины ошибок: 1). Проведение теста при тромбоцитопении (менее150 х 10/л); 2) проведение исследования через 20 минут и более после извлечения крови; 3) проведение теста с плазмой, в которой уже образовались спонтанные агрегаты тромбоцитов или микросгустки фибрина.

Нормальные величины: время агрегации при исследовании максимальной дозы гемолизата - 13,8 ± 0,5 с (пределы нормальных показателей 11-17 с).

Для субпороговой дозы гемолизата - 46,8 ± 3,4 с (пределы нормы 40 - 54 с). Норма ААТм и ААТс - 100,0 ± 2,4% (пределы нормы 80 - 120%); ИАТ - 0,99 ± 0,03 (пределы нормы 0,82 ± 1,17).

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1953 | Нарушение авторских прав