АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Исследование ретракции сгустка крови

В клинической практике чаще используют непрямые методы оценки ретракции сгустка. Один из них заключается в определении объема сыворотки, выделяемой при ретракции сгустка крови, по отношению к объему плазмы исследуемой крови (рисунок 14). Объем сыворотки крови после ретракции сгустка всегда меньше объема плазмы перед началом исследования, поскольку некоторое количество жидкой части крови остается в сгустке. Чем больше сокращается сгусток, тем меньше в пробирке остается сыворотки, и наоборот.

В градуированную центрифужную пробирку набирают 5 мл крови, опускают в нее деревянную палочку и помещают пробирку на водяную баню (а). В исследуемой крови определяют показатель гематокрита. Через 1 ч после свертывания крови сгусток, прикрепившийся к палочке, удаляют, дав жидкой части стечь обратно в пробирку (б). Далее измеряют объем жидкости, оставшейся в пробирке, центрифугируют ее при 3000 об/мин в течение 5 минут и измеряют объем осевших эритроцитов (в). Искомый объем сыворотки определяют по разнице между объемом оставшейся в пробирке жидкости и объемом эритроцитов.

Рисунок 14. Схема определения ретракции сгустка (пояснения в тексте).

Ретракцию сгустка рассчитывают по формуле:

ретракция сгустка = ОС/ОП;

где ОС - объем сыворотки после ретракции сгустка;

ОП - объем плазмы перед началом исследования.

Объем плазмы можно определить следующим образом:

ОП = ОК х (100 - Ht)/100;

где ОК - объем исследуемой крови;

Ht - гематокрит.

В норме ретракция сгустка составляет 40 - 95%. Ее уменьшение наблюдается при выраженных тромбоцитопениях и тромбастении Гланцмана.

2.4.3. Определение адгезивной способности тромбоцитов. Существует несколько вариантов исследования, но все они основаны на определении степени уменьшения содержания тромбоцитов после контакта крови с несмачиваемой поверхностью.

Метод определения ретенции тромбоцитов на стеклянных шариках.

Принцип метода: определяется количество тромбоцитов, задерживаемых в колонке со стеклянными шариками при пропускании через нее со стандартной скоростью определенного объема крови.

Оборудование: 1) оборудование, необходимое для подсчета тромбоцитов фазово-контрастным методом; 2) инфузионный насос, позволяющий опорожнять шприц на 5-10 мл со скоростью 2 мл/мин; 3) полихлорвиниловая трубка с внутренним диаметром 3-3,5 мм; 4) полиэтиленовые (пластиковые) или стеклянные силиконированные шприцы вместимостью 5-10 мл; 5) зажимы для полихлорвиниловой трубки или канюли от инъекционных игл; 6) стеклянные шарики диаметром 0,2-0,4 мм: шарики диаметром 0,1-1,0 мм, выпускаемые Уфимским заводом текстильного волокна, дважды просеивают через сито (а) задерживающее шарики диаметром более 0,4 мм, б) задерживающее шарики диаметром более 0,2 мм); оставшиеся на втором сите шарики промывают ацетоном и просушивают.

Материал для исследования: свежевзятая цитратная кровь. За 7-10 дней до исследования лекарственные препараты отменяют, так как многие из них угнетают агрегацию тромбоцитов и могут исказить результаты.

Ход определения: берут пробу крови для подсчета тромбоцитов. Набирают в шприц 2 мл крови, присоединяют к нему колонку со стеклянными шариками (незакрытым концом) и устанавливают шприц в инфузионный насос. Включают насос и пропускают кровь через колонку за 1 мин. Вытекающую из колонки кровь собирают в пластиковую или стеклянную силиконированную пробирку, перемешивают и снова берут пробу для подсчета тромбоцитов. Индекс ретенции (адгезивности) тромбоцитов вычисляют по формуле:

А - В

Индекс ретенции (адгезивности) = ----------- Х 100%,

А

где А - количество тромбоцитов в крови до пропускания; В - количество тромбоцитов в крови после пропускания через колонку.

Практическое значение: нормальные величины составляют 20-55%. Уменьшение индекса ретенции (адгезивности) тромбоцитов вплоть до 0% наблюдается при ряде врожденных тробоцитопатий и болезни Виллебранда.

Нарушения адгезии обычно сочетаются с нарушением ристоцетин-зависимой агрегации. Нарушения адгезии также характерны для приобретенных тромбоцитопатий при острых лейкозах, миелопролиферативных заболеваниях, ДВС-синдромах, циррозах, опухолях и паразитарных заболеваниях печени. Изолированное нарушение адгезии без патологии агрегации не описано

Примечания: 1) при отсутствии компрессионного насоса можно воспользоваться вакуумным насосом или компрессором; 2) при отсутствии стеклянных шариков можно использовать стеклоткань.

Определение адгезивной активности тромбоцитов (по Т.А.Одесской и др., 1971).

Принцип метода: определяется количество тромбоцитов, задерживаемых в колонке с кетгутом при пропускании через нее со стандартной скоростью определенного объема крови (рис. 15).

Рисунок 15. Схема определения адгезивной способности тромбоцитов (пояснения в тексте).

Реактивы и оборудование. 3,8% раствор цитрата натрия; колонка с кетгутом (кетгут N 3 мелко нарезают кусочками длиной 1-1,5 мм и заполняют ими опиленный конец силиконированной пипетки объемом 2 мл на высоту 4 см, укрепляют колонку в штативе; после использования колонку вновь силиконируют); оборудование для подсчета тромбоцитов в камере при фазово-контрастном микроскопировании; силиконированные часовые стекла; туберкулиновый шприц; пипетки на 0,02 мл.

Ход определения. В стабилизированной цитратом крови подсчитывают количество тромбоцитов. 0,2-0,3 мл крови из туберкулинового шприца через иглу, изогнутую под углом 90^о, по каплям пропускают через фильтр в течение 30 - 40 с (А). Время контакта крови с фильтром устанавливается по секундомеру. Подсчитывают число тромбоцитов в первой капле, прошедшей через фильтр и упавшей на силиконированное стекло (В). Число адгезированных тромбоцитов вычисляют по средним данным, полученным после исследования двух фильтратов по формуле, указанной в предыдущем методе.

Практическое значение: то же.

Определение адгезивной способности тромбоцитов к стеклу.

Материал для исследования: богатая тромбоцитами плазма.