АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

VSR-тест- метод определения реагинов в непрогретой плазме.

Прочитайте:
  1. A.Сифонний дренаж за методом Бюлау
  2. I. Консервативные методы лечения и уход за больными с гинекологическими заболеваниями.
  3. I. Лабораторные методы
  4. I. Методы временного шинирования.
  5. I. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ РЕЗУЛЬТАТЫ
  6. I. МЕТОДЫ, ПОДХОДЫ И ПРОЦЕДУРЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ
  7. I. Организационно-методический раздел
  8. I. Родоразрешение:сроки, время, метод
  9. II МЕТОДЫ, ПОДХОДЫ И ПРОЦЕДУРЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ
  10. II. ДАННЫЕ ФИЗИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

После модификации антигена, используемого в тесте VDRL - добавления холин хлорида и ЭДТА для стабилизации антигенного комплекса Portnoy J. с савт. (1961) предложили новый микрофлокуляционный тест, названный USR (Unhealed plasma reagin), пригодный для определения реагиновых антител не только в сыворотке, но и в плазме крови, не требующий также прогревания материала. Антиген, используемый в тесте, имеет увеличенную реактивность. Специфичность USR составляет 99%, а чувствительность зависит от стадии сифилиса и составляет при первичном сифилисе 80%, при вторичном сифилисе - 100%, при скрытом сифилисе - 95% (Larsen S. с соавт., 1995). Как и VDRL, результаты USR-теста регистрируются при помощи микроскопя, лупы, аглютиноскопа. Преимущества USR-теста по сравнению с VDRL - возможность использования для анализа непрогретой плазмы крови, большая стабильность готового стандартного кардиолипинового антигенного комплекса, несколько большая чувствительность реакции при первичном сифилисе.

Быстрый плазмареагиновый тест - RPR-mecm

Быстрый плазмареагиновый тест был предложен в Portnoy J. с савт. (1957) для массового и быстрого скрининга образцов сыворотки или плазмы крови в полевых условиях. В 1961 г. те же авторы предложили модификацию RPR- теста в постановке на специальных картонных карточках с выдавленными круглыми плоскими неглубокими лунками диаметром 18 мм. RPR-тест относится к макроскопическим нетрепонемным флокуляционным тестам. В стабилизированный стандартный кардиолипиновый антиген добавлены частицы мелкодисперсного угля, который позволяет визуализировать флокулят и учесть результаты реакции невооруженным глазом. В стандартно выпускаемых коммерческих наборах срок годности антигена, применяемого в RPR-тесте обычно составляет 18 месяцев.

Постановка реакции крайне проста. При качественной постановке на каждый очерченный кружок карточки наносится 50 мкл неразведенной исследуемой плазмы или сыворотки крови. RPR-тест неприменим для исследования ликвора. С помощью прилагаемого одноразовых палочки или пипетки-меланжера образец равномерно распределяется по поверхности лунки. Затем с помощью прилагаемого диспенсера с дозирующей иглой на поверхность каждого кружка наносят по 1 капле взвеси RPR-антигена после тщательного взбалтывания. Возможен и другой вариант, когда на поверхность карточки наносят по отдельности каплю исследуемого образца и каплю RPR-антигена, а только затем при помощи шпателя или палочки их смешивают, равномерно распределяя по всей очерченной поверхности кружка диаметром 18 мм. Считается, что первый вариант постановки в ряде случаев позволяет избежать феномена прозоны, поскольку предварительное распределение образца исследуемой сыворотки (плазмы) сокращает локальную концентрацию антител в месте добавления антигена, создавая более оптимальные локальные условия для начала формирования флокулята. Для стандартизации условий проведения реакции и сокращения времени получения результата рекомендуется использовать орбитальный ротатор, обеспечивающий равномерное перемешивание нанесенных на карточку реагентов: RPR-антигена и исследуемых образцов, за счет плавного эксцентрического вращения


платформы со скоростью 100 оборотов/мин. Это единственное оборудование, рекомендуемое для использования особенно при массовом скрининге. Карточку легко разрезать ножницами, отделив необходимое количество лунок для потановки даже единичного анализа. Время получения ответа - 8 минут. В состав набора обычно входят положительный и отрицательный контроли, которые должны быть использованы при постановке каждой серии анализов для подтверждения качества тест-системы, а также для сравнения получаемых результатов с контролями

Учет результатов реакции производится визуально при хорошем освещении, когда еще не высохла поверхность кружка. Чтение высохшей карточки может приводить к артефактам. Можно производить покачивающие движения, наклоняя карточку, чтобы лучше рассмотреть образовавшиеся агрегаты. При образовании средних и больших агрегатов результат RPR-теста учитывается как «положительная реакция», в случае выявления редких небольших агрегатов дается заключение «слабая реакция», а при отсутствии видимых агрегатов (ровная серая поверхность) -«отрицательная реакция». Образцы, давшие положительный результат, а также сомнительные («шероховатые») результаты следует исследовать в полуколичественной постановке, готовя серийные двукратные разведения (1:2 - 1:1024) исследуемого образца плазмы или сыворотки в физиологическом растворе (0,85% раствор натрия хлорида) непосредственно на карточке. Титром образца считается последнее разведение, в котором обнаруживается положительный результат. Значение титра используется для последующего контроля эффективности лечения (серонегативация): после адекватной терапии первичного и вторичного сифилиса титр должен снижаться по крайней мере в 4 раза через три-четыре месяца, и в 8 раз через 6-8 месяцев. У большинства пациентов, пролеченных на ранних стадиях инфекции, титры снижаются вплоть до минимального или порогового уровня чувствительности реакции приблизительно через год.

Специфичность RPR-теста составляет 98%, а чувствительность зависит от стадии сифилиса и составляет при первичном сифилисе 86%, при вторичном сифилисе - 100%, при скрытом сифилисе - 98%, при позднем сифилисе - 73% (Larsen S. с соавт., 1995).

В настоящее время RPR-тест на карточках по использованию занимает лидирующее положение в мире среди нетрепонемных тестов на сифилис. Это обусловлено рядом преимуществ, среди которых:

- самая высокая чувствительность среди нетрепонемных тестов при
первичном, скрытом и позднем сифилисе;

быстрота получения ответа (8 минут);

- низкая стоимость анализа;

- удобство постановки реакции, пригодность для индивидуальной постановки и для массового скрининга;

наличие готовых стандартных наборов, включающих все необходимое для постановки;

- высокая стабильность RPR-антигена, большой срок годности (18 мес); стандартизация результатов, получаемых в различных лабораториях;

- прекрасная сочетаемость с современными подтверждающими трепонемными тестами на сифилис (в частности, с РИГА).

Все производимые в мире различными производителями RPR-наборы являются стандартизованными, их результаты поэтому сопоставимы. На российском рынке зарегистрированы наборы следующих ведущих зарубежных фирм HUMAN (Германия), Organon Teknika (Бельгия), Sanofi Diagnostics Pasteur (Франция). Единственным


отечественным производителем, предлагающим конкурентноспособнную более низкую цену за набор ЛЮИС-RPR ТЕСТ является компания «Ниармедик Плюс» при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, с 1998 г выпускающая тест-систему по лицензии. Качество зарегистрированной в России тест-системы ЛЮИС- RPR ТЕСТ подтверждено независимыми испытаниями в Отделе лабораторных исследований на СПИД, заболевания, передаваемые половым путем и туберкулез Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, Джорджия, США.

Применение RPR-теста регламентировано Приказом № 286 Минздрава РФ от 07.12.1993 г. «О совершенствовании контроля за заболеваниями, передаваемыми половым путем» (см. п. 1.11) и Информационным письмом Министерства здравоохранения и медицинской промышленности РФ от 01.12.1995 г.

RPR-тест на сифилис широко используется в медицинской практике ряда стран СИГ, например в Киргизии.

Положительные результаты, полученные в RPR-тесте, как и всех других нетрепонемных тестов, не могут трактоваться как наличие инфекции T.pallidum. без дополнительного подтверждения в трепонемных тестах.

TRUST (Toluidin Red Unheated Serum Test) - макрофлокуляционный нетрепонемный тест.

В 1983 г. Petit D. с соавт. предложили модификацию макрофлокуляционного нетрепонемного теста на карточках, сходного с RPR-тестом. Основное отличие заключалось в том, что для приготовления антигена была использована мелкодисперсная суспензия водонерастворимого красителя толуидинового красного (в некоторых модификациях используется краситель судановый черный), агглютинация которого в процессе флокуляции позволила учитывать результат невооруженным глазом. Реакцию можно ставить с непрогретой сывороткой, а также с плазмой крови. Время получения результата - 8-10 минут. Специфичность теста оценивается 99%, а чувствительность на разных стадиях сифилиса по данным Larsen с соавт.(1995) составляет: при первичном сифилисе - 85%; при вторичном - 100%, при скрытом -98%. TRUST- тест неприминим для исследования спинномозговой жидкости.

В России выпускается аналог TRUST-теста НПО «Диагностические системы» под названием «LUES-ТЕСТ», со сроком годности набора 6 месяцев.


Дата добавления: 2015-11-26 | Просмотры: 809 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)