АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Работа 8. Фагоцитарная активность лейкоцитов

Судьба микроорганизмов, захваченных лейкоцитами, может иметь три исхода:

1) полное внутриклеточное переваривание микробов, приводящее к их исчезновению в лейкоците, — завершенный фагоцитоз;

2) выталкивание микробов из лейкоцитов обратно, в окружающую среду;

3) активное размножение микробов внутри лейкоцитов, — незавершенный фагоцитоз.

В последнем случае фагоцитоз приобретает отрицательное значение для организма, так как микробы, находящиеся внутри клеток, становятся менее доступными действию антител. Незавершенный фагоцитоз имеет место при заболевании туберкулезом, бруцеллезом, туляремией, гонореей.

Фагоцитарная активность (ФА) лейкоцитов выражается процентом активных лейкоцитов (фагоцитов, т.е. тех, внутри которых есть микроорганизмы) к общему числу подсчитанных лейкоцитов данной группы. Например, при определении ФА нейтрофилов, находящихся в процессе фагоцитоза, учитывают к общему числу только нейтрофилов.

Фагоцитарный индекс (ФИ)– среднее число фагоцитированных частиц из расчета на одну клетку из числа выявленных. С помощью ФИ определяют опсонирующую способность исследуемой крови, т.к. присутствие в плазме крови антител, комплементарных антигенам конкретного возбудителя, способствует повышению эффективности фагоцитоза.

Фагоцитарное число характеризует агрессивность лейкоцитов и вычисляется делением числа фагоцитарных бактерий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость характеризует общую фагоцитарную активность крови, определяется количеством микробных тел, фагоцитированных лейкоцитами 1 мм³ крови.

Опсонофагоцитарный индекс (ОФИ)– отношение фагоцитарного индекса анализируемой крови к фагоцитарному индексу нормальной крови. Чем выше он, тем больше специфических антител в крови и можно оценить уровень иммунного ответа исследуемого.

Оборудование: центрифужные прорбирки, центрифуга, термостат, пастеровские пипетки, микроскоп.

Реагенты: лимоннокислый натрий 2%-ый, спирт, кровь животного, суточная культура микроорганизмов на скошенном агаре – непатогенные стафилококки, Candida и др., красители по Романовскому-Гимзе.

В пробирки с микроорганизмами внести 2 мл 2% р-ра цитрата натрия, аккуратно встряхивая пробирки смыть микроорганизмы со скошенного агара.

В стерильную центрифужную пробирку налить 0,2 мл 2% лимоннокислого натрия, добавить 0,1 мл исследуемой крови рыбы и 0,5 мл микробной взвеси. Пробирку осторожно встряхнуть, поместить на 30 мин в термостат при температуре 37°С.

Затем смесь центрифугировать при 2000—3000 обмин до расслоения жидкости на верхний — соломенно-желтый прозрачный слой плазмы, нижний — слой эритроцитов и среднюю серебристую пленку между ними — слой лейкоцитов. Пастеровской пипеткой отсасывают вначале верхний слой, затем очень осторожно снимают средний, делают из него 3—5 мазков и окрашивают их по Романовскому (Работа 5 настоящего лаб. практикума).

При микроскопии мазка подсчитать:

1) число фагоцитировавших нейтрофильных лейкоцитов из общего числа подсчитанных 100 лейкоцитов, результат выразить в процентах. Норма – 20-40%.

2) фагоцитарный индекс (количество фагоцитированных микроорганизмов в 100 нейтрофильных лейкоцитах) и определить среднее количество фагоцитированных микроорганизмов в одной клетке. Норма – 3 и более микроорганизмов,

3) опсонофагоцитарную пробу. У каждого из 25 нейтрофилов подсчитать количество фагоцитированных микроорганизмов, согласно числу последних определить группу лейкоцитов:

группа 0 – нейтрофилы, внутри которых нет микроорганизмов,

группа 1 – нейтрофилы, внутри которых 1-20 клеток микроорганизмов,

группа 2 – 21-40 клеток,

группа 3 – свыше 40 клеток микроорганизмов.

Схема определения ОФП: а) определить количество нейтрофилов в каждой группе, б) перемножить количество лейкоцитов на номер группы, в) суммировать результаты.

Максимальный показатель ОФП может быть равен 75. Норма (у здоровых людей) – 1-3. Если показатель 10-24 – слабо положительная реакция, 25-49 – ясно выраженная, свыше 49 – резко положительная.

4) ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза:

ИЗФ = Среднее число поглащенных микробов через 30 мин / Среднее число поглащенных микробов через 120 мин.

В норме через 30 мин. начинается переваривание поглощенных микробов клетками, через 2 часа оно должно закончиться. Поэтому процент фагоцитирующих лейкоцитови среднее число поглощенных микробов после 2-х часовой инкубации меньше, чем после 30-мин. Инкубации. Например, из 100 подсчитанных лейкоцитов 20 участвовали в фагоцитозе и фагоцитировали 100 микробных тел. Отсюда фагоцитарная активность равна 20%; фагоцитарный индекс – 100: 20 = 5; фагоцитарное число – 100: 100 = 1; фагоцитарная емкость равна единице, умноженной на количество лейкоцитов у данного животного.

Оформление работы. Записать порядок расчета фагоцитировавших нейтрофилов (%), фагоцитарный индекс, опсонофагоцитарный показатель, индекс завершенности фагоцитоза.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 2230 | Нарушение авторских прав