АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Работа 6. Выведение лейкограммы

Прочитайте:
  1. I I I момент - Выведение плечиков.
  2. I. Медицинские осмотры работников, занятых на вредных работах и на работах с вредными и опасными производственными факторами
  3. II. Самостоятельная работа
  4. II. Самостоятельная работа
  5. II. Самостоятельная работа
  6. II. Самостоятельная работа
  7. II. Самостоятельная работа
  8. II. Самостоятельная работа
  9. II. Самостоятельная работа
  10. II. Самостоятельная работа

Процентное соотношение различных форм лейкоцитов называют лейкограммой, изучению которой, как и общему подсчету лейкоцитов придается большое значение в клинике. Увеличение количества лейкоцитов называют лейкоцитозом, а уменьшение - лейкопенией.

Продолжительность жизни гранулоцитов максимум 1,5-2дня, потом уходят в ткани и через 1-2 дня гибнут. В-лимфоциты - до 2 недель, Т-лимфоциты - месяцы.

Расчет лейкоцитов.

Четырёхпольный метод - по Шиллингу - определяют количество лейкоцитов в четырёх участках мазка. Всего в мазке подсчитывают 100—200 клеток.

Трёхпольный метод - метод Филиппченко - состоит в том, что мазок мысленно делят на 3 части: начальную, среднюю и конечную. Подсчёт ведут по прямой линии поперёк мазка от одного его края к другому. В каждой части подсчитывают одинаковое количество клеток. Всего учитывают 100-200 лейкоцитов.

Окрашивание клеток.

Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый. Результаты окрашивания мазков крови:

цитоплазма лимфоцитов окрашивается в сине-голубой цвет, их ядра - в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового;

цитоплазма моноцитов окрашивается в мутный голубовато-серый цвет, их ядра - в более светлый пурпурно-красный, нежная азурофильная зернистость;

гранулы базофилов окрашиваются в интенсивный сине-фиолетовый цвет;

гранулы эозинофилов окрашиваются в оранжево-розовый цвет;

гранулы нейтрофилов окрашиваются в цвета от пурпурного до фиолетового;

ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с хорошо видимой структурой хроматина; хорошо выделяются ядрышки;

грануломеры тромбоцитов окрашиваются в красный, гиаломеры - в голубой; розовая окраска гемоглобина.

           
   
 
 
Рисунок 3. Форменные элементы крови человека в мазке. 1 – эритроцит, 2 – сегментоядерный нейтрофильный гранулоцит, 3 – палочкоядерный нейтрофильный гранулоцит, 4 – юный нейтрофильный гранулоцит, 5 – эозинофильный гранулоцит, 6 – базофильный гранулоцит, 7 – большой лимфоцит, 8 – средний лимфоцит, 9 – малый лимфоцит, 10 – моноцит, 11 – тромбоциты (кровяные пластинки).  
   
Рисунок 4. Форменные элементы в крови карпа 1 - гемоцитобласт; 2 - миелобласт; 3- промиелоцит; 4 - нейтрофильный миелоцит, 5 - нейтрофильный, 6, 7 - базофильные и 8 - псевдоэозинофильный метамиелоциты; 9, 10 - палочкоядерный и сегментноядерный нейтрофилы; 11 - моноцит; 12 - 15 - лимфоциты; 16 - 21 – эритроциты  
 

 


 

Реактивы: смесь Никифорова, иммерсионное масло.

Оборудование: микроскоп, стекла с готовыми мазками крови, окрашенные по Романовскому.

Ход работы. Смесью Никифорова протереть объектив. Установить предметное стекло на рабочий столик микроскопа, на 4 краевые участка мазка нанести иммерсионное масло, на один из них установить объектив на 90.

Объективом просматривать от края мазка к центру по ломаной кривой, возвращаясь к краю от центра. Сосчитать 25 лейкоцитов, отметить формы, перейти на следующий краевой участок. Так подсчитать 100 лейкоцитов в 4 участках, учитывая формы

Определить процентное содержание клеток различных популяций в исследуемом образце. Процентное содержание лейкоцитов различного вида не отвечает истинному количеству в 1 мл крови. Для того чтобы получить эту величину, необходимо произвести расчет абсолютного содержания лейкоцитов в 1 мл крови, зная при этом как количество лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева (Работа 4 данного лабораторного практикума), принимая за 100%, так и количество соответствующих видов лейкоцитов, например моноцитов, подсчитанных в мазках крови, в процентах.

Более упрощенно этот расчет проводится путем умножения первых двух цифр числа лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева, на число соответствующего вида лейкоцитов, подсчитанных в мазке крови. Если лейкоцитов имеется 10000 и более, то следует брать первые три цифры.

Например, число лейкоцитов равно 8000 в 1 мкл крови, а число моноцитов – 4%.

80× 4 = 320 моноцитов в 1 мкл крови.

Оформление работы. Вывести лейкограмму крови карпа и человека, сравнить.

 

Работа 7. Определение жизнеспособности фагоцитирующих клеток

Перед использованием суспензий клеток в иммунологических реакциях, как правило, проверяется их жизнеспособность. Жизнеспособность клеток можно определять методом окрашивания 0,1% трипановым синим или его сме­сью с эозином. Ядра погибших клеток окрашиваются трипановым синим, а их цитоплазма - эозином.

Реагенты: раствор трипанового синего 0,1%; фосфатно-буферный раствор (рН=7,2-7,4); раствор эозина 0,1 %; двойной раствор Хенкса без глюкозы (Раствор Хенкса: хлорид натрия (8,00 г/л); хлорид кальция (0,20 г/л); сульфат магния (0,20 г/л); хлорид калия (0,40 г/л);, КН2Р04 (0,10 г/л); бикарбонат натрия (1,27 г/л); глюкоза (2,00 г/л). Все вещества растворяют в 1 литре дистиллированной воды).

Оборудование: термостат 37°С; камера Горяева; микроскоп с увеличением 10x40; пипетки.

Ход работы. Готовят раствор трипанового синего в фосфатно-буферном растворе (рН=7,2-7,4) или в физиологическом растворе (0,1% раствор эозина на двойном растворе Хенкса без глюкозы). К клеточной суспензии добавляют равный объем раствора красителя (при использовании двух красителей их растворы предварительно смешивают). Инкубируют при 37°С в течение 3 минут. С помощью микроскопа в камере Горяева подсчитывают процент по­гибших клеток (окрашенных). Жизнеспособность клеток выражают в процен­тах живых клеток - она должна быть не менее 95—93%, т.е. число окрашенных клеток не должно превышать 5-7%.

Оформление работы. Рассчитать количество жизнеспособных фагоцитирующих клеток.

 


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1144 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.004 сек.)