Постановка РА в пробирках (развернутая РА)
Оборудование: 1) пробирки химические и центрифужные; 2) центрифуга на 2-3 тыс. оборотов; 3) пипетки объемом 10 и 5 мл с делениями на 0,1 мл; 4) градуированные цилиндры; 5) штативы с гнездами, 6) термостат, водяная баня.
Реагенты: 1) сыворотка крови, подлежащая исследованию, 0,1—0,2 мл; 2) физиологический раствор; 3) корпускулярный антиген: взвесь живой 20-часовой культуры микробов. Используются культуры только в S-форме (гладкие, блестящие колонии с ровными краями).
Ход работы. Приготовление разведений сыворотки:
Из сыворотки приготовить ряд последовательных разведений, от 1:50— 1:100 до 1:1600— 1:3200. В отдельной пробирке приготовить первое разведение сыворотки 1:50 или 1:100. Для этого пипеткой набрать 0,1 мл сыворотки, другой пипеткой добавить к ней 4,9 мл (1:50) или 9,9 мл (1:100) физиологического раствора. Основной раствор сыворотки используется для приготовления последовательных, двукратных разведений.
По окончании разведений во все пробирки ряда (кроме контрольной) прибавить по 2—3 капли антигена.
Контроль: 1) изотонический раствор хлорида натрия с микробными антигенами, 2) исследуемая сыворотка без антигена.
Пробирки встряхнуть и поставить на 2 часа в термостат при температуре 37 °С.
Через 2 часа подвести предварительный результат реакции – начать учет реакций с контрольных пробирок. Если нет агглютинации в контрольных пробирках и есть хлопья в 2-3 и более пробирках, то говорят о положительной реакции. Окончательный результат реакции агглютинации регистрировать на следующий учебный день (через 18—20 часов стояния пробирок при комнатной температуре). Определить титр сыворотки.
Результат РА охарактеризовать, используя систему четырехкрестового обозначения:
+ + + +— полная агглютинация, при которой большой осадок на дне располагается кучкой или в форме открытого перевернутого зонтика. Надосадочная жидкость прозрачная;
+ + + — почти полная агглютинация, осадок такой же, надосадочная жидкость почти прозрачная;
+ + — слабая агглютинация, осадок едва заметен, жидкость непрозрачная;
+ — отмечаются следы агглютинации;
- — отрицательная реакция, содержимое пробирки равномерно мутное.
Оформление работы. Зарисовать схему постановки опыта, подписать пробирки с разведением, отметить результат реакций.
Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 2119 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 |
|