АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Постановка РА в пробирках (развернутая РА)

Оборудование: 1) пробирки химические и центрифужные; 2) центрифуга на 2-3 тыс. оборотов; 3) пипетки объемом 10 и 5 мл с делениями на 0,1 мл; 4) градуированные цилиндры; 5) штативы с гнездами, 6) термостат, водяная баня.

Реагенты: 1) сыворотка крови, подлежащая исследованию, 0,1—0,2 мл; 2) физиологический раствор; 3) корпускулярный антиген: взвесь живой 20-часовой культуры микробов. Используются культуры только в S-форме (гладкие, блестящие колонии с ровными краями).

Ход работы. Приготовление разведений сыворотки:

Из сыворотки приготовить ряд последовательных разведений, от 1:50— 1:100 до 1:1600— 1:3200. В отдельной пробирке приготовить первое разведение сыворотки 1:50 или 1:100. Для этого пипеткой набрать 0,1 мл сыворотки, другой пипеткой добавить к ней 4,9 мл (1:50) или 9,9 мл (1:100) физиологического раствора. Основной раствор сыворотки используется для приготовления последовательных, двукратных разведений.

По окончании разведений во все пробирки ряда (кроме контрольной) прибавить по 2—3 капли антигена.

Контроль: 1) изотонический раствор хлорида натрия с микробными антигенами, 2) исследуемая сыворотка без антигена.

Пробирки встряхнуть и поставить на 2 часа в термостат при температуре 37 °С.

Через 2 часа подвести предварительный результат реакции – начать учет реакций с контрольных пробирок. Если нет агглютинации в контрольных пробирках и есть хлопья в 2-3 и более пробирках, то говорят о положительной реакции. Окончательный результат реакции агглютинации регистрировать на следующий учебный день (через 18—20 часов стояния пробирок при комнатной температуре). Определить титр сыворотки.

Результат РА охарактеризовать, используя систему четырехкрестового обозначения:

+ + + +— полная агглютинация, при которой большой осадок на дне располагается кучкой или в форме открытого перевернутого зонтика. Надосадочная жидкость прозрачная;

+ + + — почти полная агглютинация, осадок такой же, надосадочная жидкость почти прозрачная;

+ + — слабая агглютинация, осадок едва заметен, жидкость непрозрачная;

+ — отмечаются следы агглютинации;

- — отрицательная реакция, содержимое пробирки равномерно мутное.

Оформление работы. Зарисовать схему постановки опыта, подписать пробирки с разведением, отметить результат реакций.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 2103 | Нарушение авторских прав