АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Работа 9. Изучение лизоцимной активности слюны

Оборудование: чашки Петри со стерильным МПА, флакончик со стерильными дисками из фильтровальной бумаги (диаметр дисков - 6 мм), стерильные пробирки, флакончики или чашки Петри для взятия исследуемого материала. Стерильные пастеровские и градуированные пипетки. Спиртовка, растворы красителей для окраски по методу Грама, фильтровальная бумага, прибор для промывания мазков, пинцет, иммерсионное масло, микроскоп, измерительная линейкa.

Реагенты: Односуточная бульонная культура Micrococcus lysodeicticus или смывы с денег стирильным физраствором. Слюна студентов (курящих и некурящих).

Ход работы. Лизоцим - белок-фермент (мурамидаза). Он разрушает клеточную стенку бактерии, в результате чего происходит ее растворение. Лизоцим действует на один из основных компонентов бактериальной клетки - на гликопептиды бактерий.

Приготовить мазок из односуточной бульонной культуры M.lysodeicticas или из смыва с денег, окрасив его по методу Грама.

Стерильной градуированной пипеткой внесите односуточную бульонную культуру M.lyeodeicticus в чашки Петри с МПА (0,4 мл) и с помощью шпателя, изготовленного из пастеровской пипетки, равномерно распределите культуру, слегка втирая ее, по всей поверхности агаровой среды. Затем поставьте чашки в термостат на 2 часа для подсушивания, чтобы не допустить растекания проб исследуемого субстрата.

Подготовьте две пробы исследуемого материала - слюны, поместив каждую в отдельную стерильную пробирку, флакончик или чашку Петри. Соблюдая правила стерильности при работе, откройте вблизи пламени спиртовки флакончик с дисками, с помощью пинцета захватите щепотку дисков и внесите их во взятые пробы, затем после пропитывания дисков исследуемым субстратом разложите их в 4-6-повторениях на поверхность МПА в чашках Петри, засеянных тест-культурой M.lysodeicticus. Чашки с дисками поставьте в термостат на 24 часа.

Лизоцимную активность исследуемого материала определяют по зонам задержки роста (ЗЗР) тест-культуры вокруг дисков. При просмотре чашки в проходящем свете, зоны задержки роста тест-культуры выглядят прозрачными и четко вырисовываются на бактериальном фоне выросшей культуры M.Lysadeicticus в виде мелких колоний. С помощью линейки измерьте диаметр ЗЗР. Оценку лизоцимной активности дайте по показателям: слабая – диаметр ЗЗР от 7 до 7,5 мм; средняя – диаметр ЗЗР от 7,6 до 8,5 мм; сильная – диаметр ЗЗР от 8,6 мм в выше.

Оформление работы. Рассчитать ЗЗР у каждой пробы, сделать вывод о влиянии табакокурения на лизоцимную активность слюны и общую резистентность организма.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 676 | Нарушение авторских прав