Прямые методы подсчета соматических клеток
К ним относят метод подсчета на стекле по Прэскотту-Бриду, камерные методы по Н.М.Хилькевичу, И.И.Архангельскому и др. в модификации В.И.Слободяника, подсчет с помощью электронного прибора «Фоссоматик», электронных счетчиков частиц: целлоскоп, «Культер-Каунтер», пикоскель, гемоцитометр кондуктометрический марки ГЦМК-3 и др.
Косвенные методы определения соматических кл еток
Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального.
Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%, димастин 5%, мастоприм I%, в пробе Уайт-Сайда 4% раствор едкого натра.
Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20% димастина, а для определения примеси анормального молока в сборном - 2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского).
Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока.
При использовании этих реактивов для диагностики субклинического мастита основным диагностическим признаком является образование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси – ориентирующим.
Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды.
В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости.
Реакцию учитывают по густоте желе:
отрицательная реакция (-) - однородная жидкость:
сомнительная реакция (±) - следы образования желе;
положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.
На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) - отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.
Определение рН молока по цвету:
светло-сиреневый, дымчатый - рН молока нормальная (6,5-6,8);
почти белый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
темно-сиреневый - повышенная щелочность молока (рН больше 8).
Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.
Определения рН молока по цвету:
оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) – нормальная реакция молока (рН 6,5-6,8);
желтый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
красный - повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);
алый и малиновый - ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0).
Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводяткакпри исследовании молока с 2% раствором мастидина.
Проба с 10% раствором мастидина. Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определения жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1 мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1 мл 10 % раствора мастидина.
Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образованию желе и цвету проводят как указано раньше.
Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и сомнительную реакцию с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2% раствором мастидина, или 5% раствором димастина, или 1% раствором мастоприма, или пробой Уайтсайда.
Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором.
Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подсчитанных по методу Прэскотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2% раствором мастидина и 5% раствором димастина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице:
Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока
Реактив
| Реакция с реактивом; количество СК
| -
| +/-
| +
| Мастидин
|
| 1168248 -3752443
| 6987531 -21179849
| Димастин
|
| 1656400 -4759550
| 9279290 -27936675
|
Проба с 2,5% раствором мастоприма. Примесь анормального молока в сборном определяют на молокоперерабатывающих предприятиях.
В луночки молочно-контрольной пластинки ПМК-1 вносят 1млтщательно перемешанного молока и добавляют к нему 1 мл 2,5% раствора мастоприма. Молоко с реактивом перемешивают в течение 10 -15 с и учитывают реакцию.
На пластинке ПМК-1 при отрицательной реакции жидкость однородная, желе не образуется. Такое молоко не имеет примеси анормального молока или примесь незначительная (2-З%).
Положительная реакция - образуется желеобразный сгусток, степень которого оценивается в крестах.
Один крест (+) - слабое желе, смесь молока с реактивом тянется за палочкой в виде нити, на дне уже заметна небольшая выемка. Такое молоко содержит в среднем 4-б% анормального молока и до 500 тыс./мл соматических клеток. Два креста (++) - более выраженный желеобразный сгусток, при перемешивании которого хорошо видна выемка, но желе из луночки еще не удается выбросить. Такое молоко содержит в среднем 9-10% анормального молока и от 500 тыс. до 1 млн./мл соматических клеток.
Три креста (+++) - хорошо сформированный желеобразный сгусток, который легко можно выбросить палочкой из луночки пластинки. Такое молоко содержит выше 15% анормального молока и свыше 1 млн./мл соматических клеток.
Проба с маститодиагностом (реактив Загаевского). Для приготовления маститодиагноста 300 г сульфанола и 50 г триполифосфата натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды при температуре 70-75°С. После полного растворения смеси и охлаждения до 20-25°С добавляют 0,2 г бромтимолового синего и 3 мл 1% спиртово-водного раствора розоловой кислоты и тщательно перемешивают в течение 3-5 мин, после чего реактив фильтруют через ватный фильтр.
Срок хранения приготовленного реактива - 3-3,5 месяца при температуре 5°С. Для исследования берут 2 мл тщательно перемешанного сборного молока, вносят в луночку молочно-контрольной пластинки ПМК-1, добавляют 1 мл маститодиагноста и перемешивают палочкой в течение 5-10 с.
Учет реакции проводят по изменению консистенции и цвета смеси молока с реактивом. Гомогенная смесь молока с реактивом (-) - отсутствие примеси анормального молока в сборном. Наличие единичных слизистых тяжей и хлопьев (±) - примесь анормального молока 1-5%. Умеренное содержание жидкой слизи и хлопьев(+) - примесьанормального молока 5-10%. Наличие слизи жидкой консистенции (++) - примесь анормального молока 10-15%. Умеренный сгусток в виде белка куриного яйца (+++) - примесь анормального молока 20-25%. Плотный желеобразный сгусток, зеленоватого цвета (++++)-примесь анормального молока свыше 25%.
Примесь более 10% анормального молока к сборному влияет на его технологическую переработку, качество изготовляемых из него кисломолочных продуктов и сыров.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 743 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120 | 121 | 122 | 123 | 124 | 125 | 126 | 127 | 128 | 129 | 130 | 131 | 132 | 133 | 134 | 135 | 136 | 137 | 138 | 139 | 140 | 141 | 142 | 143 | 144 | 145 | 146 | 147 | 148 | 149 | 150 | 151 | 152 | 153 | 154 | 155 | 156 | 157 | 158 | 159 | 160 | 161 | 162 | 163 | 164 | 165 | 166 | 167 | 168 | 169 | 170 | 171 | 172 | 173 | 174 | 175 | 176 | 177 | 178 | 179 | 180 | 181 | 182 | 183 | 184 | 185 | 186 | 187 | 188 | 189 | 190 | 191 | 192 | 193 | 194 | 195 | 196 | 197 | 198 | 199 | 200 | 201 | 202 | 203 | 204 | 205 | 206 | 207 | 208 | 209 | 210 | 211 | 212 | 213 | 214 | 215 | 216 | 217 | 218 | 219 | 220 | 221 | 222 | 223 | 224 | 225 | 226 | 227 | 228 | 229 | 230 | 231 | 232 | 233 | 234 | 235 | 236 | 237 | 238 | 239 | 240 | 241 | 242 | 243 | 244 | 245 | 246 | 247 | 248 | 249 | 250 | 251 | 252 | 253 | 254 | 255 | 256 | 257 | 258 | 259 | 260 | 261 | 262 | 263 | 264 | 265 | 266 | 267 | 268 | 269 | 270 | 271 | 272 | 273 | 274 | 275 | 276 | 277 | 278 | 279 | 280 | 281 | 282 | 283 | 284 | 285 | 286 | 287 | 288 | 289 | 290 | 291 | 292 | 293 | 294 | 295 | 296 | 297 | 298 | 299 | 300 | 301 | 302 | 303 | 304 | 305 | 306 | 307 | 308 | 309 | 310 | 311 | 312 | 313 | 314 | 315 | 316 | 317 | 318 | 319 | 320 | 321 | 322 | 323 | 324 | 325 | 326 | 327 | 328 | 329 | 330 | 331 | 332 | 333 | 334 | 335 | 336 | 337 | 338 | 339 | 340 | 341 | 342 | 343 | 344 | 345 | 346 | 347 | 348 | 349 | 350 | 351 | 352 | 353 | 354 | 355 | 356 | 357 | 358 | 359 | 360 | 361 | 362 | 363 | 364 | 365 | 366 | 367 | 368 | 369 | 370 | 371 | 372 | 373 | 374 | 375 | 376 | 377 | 378 | 379 | 380 | 381 | 382 | 383 | 384 | 385 | 386 | 387 | 388 | 389 | 390 | 391 | 392 | 393 | 394 | 395 | 396 | 397 | 398 | 399 | 400 | 401 | 402 | 403 | 404 | 405 | 406 | 407 | 408 | 409 | 410 | 411 | 412 | 413 | 414 | 415 | 416 | 417 | 418 | 419 | 420 | 421 | 422 | 423 | 424 | 425 | 426 | 427 | 428 | 429 | 430 | 431 | 432 | 433 | 434 | 435 | 436 | 437 | 438 | 439 | 440 | 441 | 442 | 443 | 444 | 445 | 446 | 447 | 448 | 449 | 450 | 451 | 452 | 453 | 454 | 455 | 456 | 457 | 458 | 459 | 460 | 461 | 462 | 463 | 464 | 465 | 466 | 467 | 468 | 469 | 470 | 471 | 472 | 473 | 474 | 475 | 476 | 477 | 478 | 479 | 480 | 481 | 482 | 483 | 484 | 485 | 486 | 487 | 488 | 489 | 490 | 491 | 492 | 493 | 494 | 495 | 496 | 497 | 498 | 499 | 500 | 501 | 502 | 503 | 504 | 505 | 506 | 507 | 508 | 509 | 510 | 511 | 512 | 513 | 514 | 515 | 516 | 517 | 518 | 519 | 520 | 521 | 522 | 523 | 524 | 525 | 526 | 527 | 528 | 529 | 530 | 531 | 532 | 533 | 534 | 535 | 536 | 537 | 538 | 539 | 540 | 541 | 542 | 543 | 544 | 545 | 546 | 547 | 548 | 549 | 550 | 551 | 552 | 553 | 554 | 555 | 556 | 557 | 558 | 559 | 560 | 561 | 562 | 563 | 564 | 565 | 566 | 567 | 568 | 569 | 570 | 571 | 572 | 573 | 574 | 575 | 576 | 577 | 578 | 579 | 580 | 581 | 582 | 583 | 584 | 585 | 586 | 587 | 588 | 589 | 590 | 591 | 592 | 593 | 594 | 595 | 596 | 597 | 598 | 599 | 600 | 601 | 602 | 603 | 604 | 605 | 606 | 607 | 608 | 609 | 610 | 611 | 612 | 613 | 614 | 615 | 616 | 617 | 618 | 619 | 620 | 621 | 622 | 623 | 624 | 625 | 626 | 627 | 628 | 629 | 630 | 631 | 632 | 633 | 634 | 635 | 636 | 637 | 638 | 639 | 640 | 641 | 642 | 643 | 644 | 645 | 646 | 647 | 648 | 649 | 650 | 651 | 652 | 653 | 654 | 655 | 656 | 657 | 658 | 659 | 660 | 661 | 662 | 663 | 664 |
|