АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ЛАБОРАТОРНЫЕ ПРИЗНАКИ ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНЫХ АНЕМИЙ

Наиболее характерным лабораторным признаком железодефицитной анемии является гипо­хромная анемия. Хотя она наблюдается не только при дефиците железа, но и при ряде состояний, при кото­рых содержание железа в организме повышено, желе­зодефицитная анемия — самая частая форма гипо­хромной анемии.

Содержание гемоглобина при железодефицитной анемии может колебаться от 20—30 г/л (2—3 г%) до 110 г/л (11 г%) в зависимости от выраженности де­фицита железа. Содержание эритроцитов может быть нормальным, а может быть сниженным до 1,5—2•10¹²/л[2].

Мерой степени гипохромии является цветовой показатель, или среднее содержание гемоглобина в эритроците. Цветовой показа­тель рассчитывают по формуле:

(А•0,3)/В

где А — содержание гемоглобина в граммах на 1 л; В — число эритроцитов, деленное на 10¹². Например, при содержании гемо­глобина 50 г/л (5 г%), а эритроцитов 3•10¹²/л цветовой показа­тель равен:

5•0,3/3=0,5.

В норме цветовой показатель колеблется от 0,85 до 1,05. В миро­вой литературе значительно более широко используется другой показатель — среднее содержание гемоглобина в одном эритроци­те. Этот показатель определяется делением содержания гемогло­бина в граммах на 1 л на число эритроцитов в 1 л. Например, при содержании гемоглобина 50 г/л (5 г%) и эритроцитов 3•10¹² сле­дует делить 50 (содержание гемоглобина в граммах на 1 л) на 3•10¹². При этом мы получаем ответ в 10^–12 г. Можно разделить 50 на 3. Тогда получим ответ в пикограммах —16,6 пг. В норме в одном эритроците содержится 27—35 пг гемоглобина. Для пере­вода цветового показателя в среднюю концентрацию гемоглобина (в пикограммах) цветовой показатель следует помножить на 33,3.

Для гипохромной анемии характерно снижение цветового показателя и соответственно снижение сред­ней концентрации гемоглобина.

Часто лаборатория дает неверное определение цве­тового показателя, что связано прежде всего с непра­вильным подсчетом эритроцитов. До настоящего вре­мени во многих лабораториях для их подсчета исполь­зуется фотометрический метод. Уже давно было уста­новлено [Воробьев А. И., 1959], что фотометрический метод дает очень большую ошибку подсчета эритроци­тов в случае их необычной величины и формы. Метод подсчета эритроцитов в фотоколориметре не должен применяться. Вторая причина ошибки — это использо­вание старых методов для подсчета содержания гемо­глобина. Большую ошибку при определении гемогло­бина дает гемометр Сали. Его не рекомендуется при­менять в практической работе. Непригодны для прак­тического определения гемоглобина методы, которыми содержание гемоглобина определяется в аммиачном или содовом растворе. Окраска такого раствора изме­няется, оптическая плотность снижается и ошибка в определении гемоглобина становится очень большой.

Для определения гемоглобина, особенно у больных анемией, следует использовать цианметгемоглобиновый метод, а для определения содержания эритроци­тов — камерный метод подсчета или определение эри­троцитов на приборах, регистрирующих прохождение через пункт подсчета одного эритроцита (целлоскоп или подобный ему прибор).

При неправильном определении содержания гемо­глобина или эритроцитов врач получает из лаборато­рии неверный подсчет цветового показателя, и неред­ко у больных с выраженной железодефицитной анеми­ей, по данным лаборатории, цветовой показатель оказывается ошибочно близким к 1,0. Однако при про­смотре мазка крови определяются гипохромные эри­троциты.

Кроме гипохромии эритроцитов, для железодефи­цитной анемии характерна неодинаковая их величина со склонностью к микроцитозу. При дефиците железа выражен пойкилоцитоз, эритроциты бывают самой раз­личной формы (рис. 2, 3). На рис. 4 видно, что гипо­хромные эритроциты по сравнению с нормальными (рис. 5) действительно «худые», лишенные гемоглоби­на, занимающего значительный объем.

При железодефицитной анемии уменьшено не толь­ко содержание гемоглобина, но и эритроцитов.

Рис. 2. Морфология эритроцитов при железодефицитной ане­мии. Х900.

а — Х700; б — Х900.

Рис. 3. Эритроциты здорового человека. Х900.

Рис. 4. Морфология эритроцитов при дефиците железа, обнаружи­ваемая в сканирующем электронном микроскопе. В центре видны дискоциты с широкой ямкой и крутыми невысокими края­ми. х3000 (по А. А. Можиной).

Рис. 5. Нормальные эритроциты, двояковогнутые дискоциты, имеющие правильную округлую или слегка овальную форму. Ви­ден микроцит (7). х3000 (по А. А. Можиной).

Это снижение количества эритроцитов может быть объяснено, с одной стороны, снижением при этой бо­лезни пролиферации ядерных эритроидных элементов по сравнению с нормой [Шостка Г. Д., 1970; Канаев С. В., 1973; Осипова Л. А., 1978]; а с другой стороны, усилением неэффективного эритропоэза. В норме в костном мозге разрушается 5—10% эритрокариоцитов, не достигнув периода созревания. При железо­дефицитной анемии величина неэффективного эритро­поэза значительно возрастает [Pollycove, 1964; Brunstrom et al., 1968]. Эти данные были получены по кос­венным расчетам: было показано, что скорость появле­ния радиоактивного железа в эритроцитах перифери­ческой крови при железодефицитной анемии меньше, чем в норме. Это было объяснено тем, что железо вначале захватывается одним эритрокариоцитом, за­тем он погибает в процессе дифференциации, железо попадает в другой или в третий, который созревает до стадии зрелых эритроцитов. Кроме того, имеются данные о некотором укорочении продолжительности жизни эритроцитов при железодефицитной анемии. Тем не менее главным в генезе анемии является все же нарушение образования гемоглобина, поэтому цве­товой показатель при железодефицитной анемии оста­ется низким.

Содержание ретикулоцитов при железодефицитных анемиях может быть в пределах нормы (до 12‰), но иногда бывает несколько повышенным. Следует помнить, что уровень ретикулоцитов у этих больных может быть повышенным, если они получали препа­раты железа до исследования ретикулоцитов. Повы­шение уровня ретикулоцитов может говорить также о значительном кровотечении у больного.

Содержание лейкоцитов при железодефицитной анемии имеет тенденцию к снижению чаще всего за счет умеренного снижения содержания нейтрофилов (Е. Н. Михайлова). Содержание тромбоцитов в боль­шинстве случаев железодефицитной анемии оказыва­ется в пределах нормы или реже повышено, особенно при какой-либо кровопотере. Однако опубликовано не­сколько случаев умеренной тромбоцитопении —40—70•10⁹/л (40000—70000 в 1 мкл) у больных желе­зодефицитной анемией. После лечения препаратами железа количество тромбоцитов у этих больных стало нормальным [Sonnerborn, 1974; Sahud et al., 1974].

В костном мозге при железодефицитной ане­мии существенных патологических признаков опреде­лить не удается. Количество клеток в 1 мкл костного мозга, как правило, нормальное. В гистологическом препарате соотношение между кроветворным костным мозгом и жиром не изменено. Иногда отмечается уме­ренная гиперплазия. При цитологическом исследова­нии костного мозга в некоторых случаях обнаружива­ется умеренное преобладание красного ростка. Для железодефицитной анемии, так же как и для других форм гипохромной анемии, характерно нарушение гемоглобинизации эритрокариоцитов. Увеличено ко­личество базофильных и полихроматофильных эрит­рокариоцитов за счет уменьшения количества оксифильных форм. Количество мегакариоцитов — в пре­делах нормы или увеличено в случае выраженных кровотечений.

Характерной особенностью костного мозга при железодефицитной анемии является снижение коли­чества сидеробластов — эритрокариоцитов, содержа­щих гранулы железа. В норме 20—40% эритрокариоцитов костного мозга содержат единичные гранулы. При железодефицитной анемии гранул практически выявить не удается. Исследование сидеробластов костного мозга помогает в трудных случаях диагностики, когда нет полной уверенности в диагнозе.

Среди биохимических методов диагностики железо­дефицитных анемий наиболее широко используется метод определения сывороточного железа.

В 1927 г. Barkan предложил определять железо сыворотки роданитным методом. Это было большим прогрессом в тот пери­од, так как в какой-то мере объективизировало диагноз. Однако вскоре после этого появились новые органические реактивы, с по­мощью которых можно получить окрашенные комплексные соеди­нения с железом. Ортофенантролиновый метод, примененный для определения железа сыворотки Heilmeyer, Plotner в 1937 г., а за­тем Barkan, Walker в 1940 г., фактически полностью вытеснил старый роданитный метод. Действительно, комплексное соединение железа с роданитом быстро диссоциирует, оно очень непрочное. Интенсивность окраски комплексного соединения железа с рода­нитом резко снижается через 15 мин, тогда как окраска ортофенантролинового комплекса сохраняется несколько дней. Роданит­ный метод фактически не дает возможности использовать совре­менную фотометрическую аппаратуру, что резко снижает его точность. Окраска роданитного комплекса во многом зависит от примесей и прежде всего фосфата. Поэтому роданитные методы определения железа сыворотки в настоящее время нигде в мире не применяются.

Вскоре после ортофенантролинового метода был предложен метод, в котором использовался a-ai-дипиридил, дающий с же­лезом стойкий комплекс (Ramsey). Но окраска этого комплекса, так же как и комплекса железа с ортофенантролином, слабая, поэтому разница окраски между нормой и патологией невелика. В связи с этим ортофенантролиновый и a-a₁-дипиридиловый ме­тоды определения железа дают большую ошибку.

В 1951 г. был предложен очень чувствительный реактив на железо — батофенантролин —4,7-дифенил-1,10-фенантролин (Case). Этот реактив образует с железом комплекс, который дает окраску в 2 раза более интенсивную, чем комплекс с ортофенантролином и a-a₁-дипиридилом. К тому же эта окраска стойкая, практически не меняется в течение нескольких дней. Поэтому для определения железа сыворотки в настоящее время используются только батофенантролиновые методики. Предложен ряд методов с применени­ем батофенантролина в качестве комплексообразователя [Peterson, 1953; Kok, Wild, 1960; Henry et а1., 1958].

В нашей стране наиболее широко используется метод, пред­ложенный Henry с соавт., а также его модификация, на которой основано определение железа в наборах, которые выпускаются в ЧССР.

Необходимо упомянуть о двух очень важных об­стоятельствах. Во-первых, кровь следует брать в спе­циальную пробирку, пропаренную или тщательно вы­мытую дважды дистиллированной водой, причем вто­рая перегонка воды должна быть проведена через стеклянное оборудование. Это связано с тем, что обычная дистиллированная вода, которая перегоняет­ся через металлический дистиллятор, содержит следы металла, который при подогревании в кислой среде может перейти в ионизированную форму и завысить результаты исследования. Обычно процедурные сест­ры получают из биохимических лабораторий специаль­ные пробирки, куда забирают кровь для исследования сывороточного железа. Во-вторых, больной, у которо­го исследуют содержание железа сыворотки, не дол­жен принимать препаратов железа по крайней мере 5 дней. Если он принимает препараты железа, содер­жание железа сыворотки за счет этого повышается и не отражает его запасов. Это одна из наиболее частых ошибок. Нам нередко приходится сталкиваться с тем, что диагноз железодефицитной анемии отвергается из-за нормального содержания железа сыворотки, опре­деленного на фоне приема внутрь или инъекций пре­паратов железа.

Нормальное содержание железа сыворотки —12.5—30,4 мкмоль/л (70—170 мкг%)[3]. В среднем, по нашим данным, содержание железа сыворотки 22,1±1,3 мкмоль/л (123±7мкг%). Содержание железа сыворотки при выраженной железодефицитной ане­мии снижается до 1,8—5,4 мкмоль/л (10—30 мкг%). При нерезко выраженной железодефицитной анемии содержание железа сыворотки снижается до 7,2—10,8 мкмоль/л (40—60 мкг%).

Кроме исследования сывороточного железа, для изучения запасов железа принято определять железосвязывающую способность сыворот­ки. В норме примерно 1/3 трансферрина насыщена железом, а 2/3 его свободны и могут присоединять зна­чительное количество железа. Говоря о железосвязывающей способности сыворотки, мы имеем в виду не абсолютное количество трансферрина, а количество железа, которое может связываться с трансферрином. Количество железа, способное связаться 100 мл сы­воротки, раньше измеряли в микрограммах, в настоя­щее время количество железа, которое способен свя­зать 1 л сыворотки, измеряют в микромолях.

Существует несколько методов определения железосвязывающей способности сыворотки.

Прибавление железа к сыворотке повышает интенсивность окраски за счет насыщения железотрансферринового комплекса, но лишь до известных пределов, пока весь имеющийся трансферрин не соединится с железом. Чем больше трансферрина, тем больше интенсивность окраски, тем больше оптическая плотность на спектрофотометре или фотоколориметре. На этом принципе основан метод, предложенный Rath, Finch (1949), Ventura (1952). Этот метод усовершенствован М. М. Щербой (1965). При помощи этого метода определяется ненасыщенная железосвязывающая способность сыворотки, т. е. выясняется, сколько железа (кроме того, которое уже связано с белком) может связаться еще. Ме­тод чрезвычайно прост, однако страдает значительной неточностью. Разница между нормой и патологией невелика, мешает мутность сыворотки. Поэтому в настоящее время данную группу методов применяют редко. Значительно шире используют принципиально отличные методы.

К исследуемой сыворотке прибавляют избыток железа, одна часть которого связывается с трансферрином, а другая — остается свободной. Каким-либо адсорбентом поглощают часть железа, не связавшуюся с белком, а затем все неадсорбированное железо, т. е. связанное с белком, определяют аналитически, как при опре­делении железа сыворотки. Для адсорбции железа Ramsey ис­пользовал карбонат магния. Еще лучше адсорбируется железо ионообменными смолами: в методе Генри и др. применяют ионо­обменную смолу амберлит IRA-401. Для связывания с белком используют железоаммонийную соль лимонной кислоты.

В норме, по нашим данным, общая железосвязы­вающая способность сыворотки колеблется от 30,6 до 84,6 мкмоль/л (от 70 до 470 мкг%). Среднее значе­ние —70,4,4,1 мкмоль/л (391±23 мкг%).

Вычитая количество железа сыворотки из общей железосвязывающей способности, мы узнаем ненасы­щенную или латентную железосвязывающую способ­ность. В среднем, по нашим данным, латентная желе­зосвязывающая способность равна 50,2 ±4 мкмоль/л (279±22 мкг%). Есть еще один производный показа­тель — это коэффициент насыщения, т. е. процент, ко­торый составляет железо сыворотки от общей железо­связывающей способности сыворотки. В норме он ко­леблется от 16 до 54, составляя в среднем 31,2±1,7.

Для железодефицитной анемии считается харак­терным увеличение общей железосвязывающей спо­собности сыворотки, значительное увеличение латент­ной железосвязывающей способности и резкое сниже­ние процента насыщения трансферрина. Следует только отметить, что хотя в среднем в группе больных имеет место повышение общей железосвязывающей способности, у отдельных больных общая железосвя­зывающая способность может оставаться нормальной. Считается, что определение общей железосвязываю­щей способности в какой-то мере дает возможность определить запасы железа в организме. Однако опре­деление содержания сывороточного железа и железо­связывающая способность сыворотки не всегда отра­жают запасы железа в организме. Так, например, при анемии, связанной с инфекцией и воспалением, сни­жается содержание железа сыворотки при нормаль­ных запасах железа в организме.

Для оценки запасов железа может быть использо­ван десфераловый тест. Десферал (десфероксамин) — комплексен, избирательно выводящий ион железа из организма. Это вещество — продукт мета­болизма актиномицетов Streptomyces pilosus — выпус­кает фирма «Ciba» (Швейцария). 100 весовых частей десферала способны связать 8,5 части трехвалентного железа.

В настоящее время известно, что источником желе­за, входящего в комплекс с десфералом, не может быть ни гемоглобин, ни трансферрин. Имеется определен­ный параллелизм между содержанием железа в за­пасах в виде ферритина и гемосидерина и количест­вом железа, выделяемого с мочой после введения дес­ферала. Десферал связывает железо ферритина лег­че, чем гемосидерина.

В моче здоровых людей содержится от 0,04 до 0,3 мг железа (в пересчете на суточную мочу). Опре­деление железа в моче не отражает содержания желе­за в запасах. Для изучения запасов железа больному вводят 500 мг десферала, после чего определяют со­держание железа в суточной моче. После введения дес­ферала, по нашим данным [Аполлонова Л. А., Идельсон Л. И., 1970], в норме за сутки выводится 0,6—1,3 мг железа. У больных железодефицитной анемией после введения десферала содержание железа в моче значительно меньше, чем в норме. У некоторых боль­ных оно снижается до 0,2 мг в сутки и менее.

Следует помнить, что хотя имеется определенный параллелизм между содержанием железа в запасах, точного соответствия между содержанием железа в запасах и содержанием его в моче после введения десферала быть не может. Lipschitz с соавт. изучили об­мен железа между ферритином и десфералом. Ферри­тин, меченный ⁵⁹Fe, вводили крысам. Он быстро погло­щался печенью. Через несколько дней меченое желе­зо оказывалось в составе гемоглобина. У животных, получавших десферал, радиоактивное железо выделя­лось с мочой, однако включение его в клетки костного мозга не менялось. В случае же активации эритропоэ­за у животных кровопусканием при введении десферала значительно уменьшалось включение ⁵⁹Fe в ге­моглобин. Известно [Hallberg, Hedenberg, 1965; Belcezzak, 1966], что десферал не вступает в комплекс с железом, связанным с трансферрином. По данным Lipschitz с соавт., у животных с посттрансфузионной полицитемией и гемосидерозом выведение железа с мочой после введения десферала уменьшается. Мож­но предположить, что десферал не комплексируется с железом запасов в случае угнетения эритропоэза по­лицитемией, следовательно, скорее всего десферал комплексируется не с железом, входящим в состав ферритина, а захватывает железо в момент перехода его из запасов в трансферриновую форму. Вероятно, имеется промежуточная лабильная форма железа между ферритином и трансферрином, состав которой пока неизвестен. При введении животным термически поврежденных эритроцитов с меченным ⁵⁹Fe гемогло­бином последующее введение десферала приводит к выведению с мочой значительного количества ⁵⁹Fe. Вероятно, это железо мобилизуется из фракции, об­разующейся при распаде гемоглобина, перед тем как железо комплексируется с трансферрином.

Следовательно, используя десфераловый тест, сле­дует помнить, что выделение железа с мочой отража­ет не только характеристику запасов железа в орга­низме, но и степень активности эритропоэза и степень распада эритроцитов.

В настоящее время для оценки запасов железа в организме используют метод определения феррити­на сыворотки. Хотя ферритин — это белок, содержа­щийся в тканях, давно уже было установлено, что он появляется в сыворотке при некрозе печени [Reissrnann, Dietrich, 1956], однако в тот период использова­лись недостаточно чувствительные методы определе­ния ферритина. В последние годы были разработаны очень чувствительные методы определения ферритина сыворотки и установлено, что у всех здоровых людей в сыворотке имеется определенное количество ферри­тина. Для определения сывороточного ферритина ис­пользуют радиоиммунологические методы исследова­ния. При этом в одних методах используют меченые антитела к ферритину [Addison et al., 1972], а в дру­гих — меченый ферритин [Marcus, Linberg, 1975]. В норме, по данным Jacobs, содержание ферритина ча­ще всего колеблется в пределах 12—300 мкг/л. У здо­ровых женщин, по данным Cook с соавт., содержание ферритина в среднем составляет около 34 мкг/л, а у мужчин — около 94 мкг/л. А. А. Замчий с соавт. (1979), исследовав 50 здоровых лиц, представил сле­дующие нормы: у мужчин —106±21,5 мкг/л и у жен­щин —65±18,6 мкг/л.

По данным Siimes с соавт., при железодефицитной анемии содержание ферритина сыворотки колеблется от 1,5 до 9 мкг/л.

Метод определения ферритина сыворотки в настоя­щее время считается одним из лучших методов опреде­ления запасов железа в организме. Он пока не нашел широкого применения из-за отсутствия в широкой ме­дицинской сети необходимых реактивов и оборудова­ния. Содержание ферритина сыворотки не всегда от­ражает запасы железа. Оно зависит также от скорос­ти освобождения ферритина из тканей и скорости освобождения ферритина из плазмы.

При железодефицитных анемиях повышено содер­жание протопорфирина эритроцитов. Это по­вышение связано прежде всего с тем, что при низком уровне железа протопорфирину не с чем связываться и он накапливается в эритроцитах. Кроме того, при железодефицитной анемии несколько увеличен синтез протопорфирина [Идельсон Л. И., 1968; Lichtman, Feldman. 1963].

В норме содержание протопорфирина эритроцитов колеблется от 18 до 89 мкмоль/л (10—50 мкг%). При железодефицитной анемии, по нашим данным, содер­жание протопорфирина в среднем составляло 191±18 мкмоль/л (106±10 мкг%). У большинства боль­ных содержание протопорфирина повышено, но у 20% больных было в пределах нормы. Кроме того, этот тест не строго специфичен. Содержание протопорфирина повышено при свинцовом отравлении в связи с на­рушением активности фермента гемсинтетазы, связы­вающего железо с протопорфирином. Повышено содер­жание протопорфирина при различных формах гемоли­тических анемий в связи с тем, что в ретикулоцитах идет повышенный синтез порфиринов. Резко повыше­но содержание протопорфирина при наследственном заболевании — эритропоэтической протопорфирии [Идельсон Л. И., 1968].

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 701 | Нарушение авторских прав