АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

С чего начинается... эксперимент

Главное в эксперименте — это материал, подлежа­щий исследованию. В данном случае главными были «специальная линия лимфоидных» клеток МТ4 (Япо­ния), которая предназначена для накопления ВИЧ, и трихомонады. В качестве контроля использовались опухолевые клетки карценомы шейки матки HeLa. Ротовая трихомонада была получена от здоровых лю­дей в возрасте от 21 цо 57 лет стоматологом В. Гонча­ровой в МСЧ № 12 г. Москвы. Вагинальная трихомо­нада отбиралась с шейки матки и из вагины женщин в этой же медсанчасти Л. Кацеповой и В. Афанасьевой. Лабораторный штамм вагинальной трихомонады был получен в Центральном НИ кожно-венерологическом институте, а кишечная трихомонада мыши от белых мышей — в НИИ вирусологии им. Ивановского.

Все эти клетки помещались в различные питатель­ные среды, в том числе и в питательную среду для три­хомонад с агар-агаром и факторами роста для трихо­монад, неприемлемую для нормальных клеток. Но ис­следуемые культуры хорошо росли и размножались, некоторые из них переходили в амебовидную форму или создавали колонии. Притом возникли следующие разногласия. Ученые, с которыми я сотрудничала, счи­тали, что работа идет с тремя видами клеток: клетка­ми крови МТ4, трансформированными клетками тка­ни HeLa и одноклеточным организмом — паразитом трихомонадой. Я же была уверена, что все это различ­ные штаммы трихомонад. Как это доказать?

Для начала вспомним, что лимфоидные клетки кро­ви и клетки тканей, если даже они «трансформирова­лись» и стали называться карценомой шейки матки HeLa, вне человеческого организма — мертвые клет­ки. Поэтому продолжать дальнейшую жизнь в пита­тельной среде, тем более размножаться и увеличиваться в размерах они просто не способны. А у нас это проис­ходило на глазах. Следовательно, мы имели возможность провести эксперимент. Далее вспомним: всем любителям строганины из мороженого мяса или рыбы и бифштек­сов с кровью известно, что проглоченные белковые тка­ни животных великолепно перевариваются с помощью наших пищеварительных ферментов пепсина и трипси­на за короткое время и снова появляется аппетит.

Исходя из этих известных всем предпосылок, а так­же утверждения известного ученого Д. Нортропа, ав­тора книги «Кристаллические ферменты», который писал: «Живые организмы не перевариваются пепси­ном или трипсином в отличие от мертвых.

Это объяс­няется изменением проницаемости клетки», все кле­точные культуры были помещены в активные раство­ры трипсина концентрацией 0,125% и химопсина концентрацией 0,25% на 24 часа при температуре тела 37°С. Все штаммы хорошо выдержали испытание, не пере­варились, а после переноса в питательную среду продолжали размножаться почкованием, переходить в амебовидную формуй образовывать колонии. Анало­гичная картина наблюдалась после облучения рентге­новскими лучами дозой 600 рад в НИИ эпидемиоло­гии и микробиологии им. Гамалеи, хотя известно, что клетки млекопитающих гибнут при облучении дозой 100-400 рад. Трихомонады же не гибнут и при облуче­нии 7000 рад, а бактерии выдерживают дозу до 1000-2500 рад. Облучение клеточных культур не разрушило клетки, а интенсифицировало их рост, появились круп­ные полиморфные клетки, в том числе и делящиеся. В вагинальной трихомонаде, содержащей сопутству­ющую микрофлору, наблюдался быстрый рост бакте­рий. В результате этого трихомонады на дне флакона образовали монослой из ядерных и безъядерных кле­ток, а над ним плавала многочисленная микрофлора. И это объяснимо: на деление трихомонады требуется 3-3,5 часа, а бактериям — 40-50 минут.

Итак, первая задача была решена: так называемые лимфоидные клетки МТ4 и трансформированные клетки HeLa, как и живые организмы трихомонады, достойно выдержали летальные химические и физи­ческие воздействия, а проводимые при этом сравне­ния морфологии клеток, их размеров, способов раз­множения и образования колоний подтвердили в со­ответствии с требованиями генетического анализа, что все исследуемые клетки — трихомонады.

Успешное решение первой задачи позволило перей­ти к решению следующей: выявлению у ротовых и ва­гинальных трихомонад рецепторов СД4 —основно­го маркера клеток, доказывающего их принадлежность к «лимфоидным клеткам», в которые проникает и раз­множается ВИЧ.

Большинство из читателей не являются ни микро­биологами, ни цитологами. Их разум не замутнен ме­дицинскими догмами, и они не поверят тому, что мож­но взять лимфоциты крови — нежнейшие клетки, жиз­ненный цикл которых исчисляется несколькими дня­ми в естественных для них условиях, и превратить в бессмертные — «специальную линию Т-лимфоцитов», способную к замораживанию и размораживанию, ин­кубации в питательной среде для трихомонад, много­численным пересевам и смертельным испытаниям пищеварительными ферментами и радиационным облучением. И будут правы. Их жизненный опыт и азы биологии, полученные со школьной скамьи, достаточ­ны, чтобы понять: кровь освежеванного животного годна только на кровяную колбасу, а замороженное мясо — на жаркое, иначе мертвые клетки этих тканей просто протухнут и разложатся. Другое дело живые микроорганизмы—жгутиконосцы трихомонады: они со своими свободно живущими собратьями просущес­твовали сотни миллионов лет, пережили два леднико­вых периода и им не страшны замораживание и раз­мораживание. А питательная среда для трихомонад — это просто подарок судьбы, и пересевы с добавлением свежей порции питательных веществ не позволяют накопиться ядовитым веществам обмена и сделать среду токсичной.

Итак, мы убедили себя и, может быть, некоторых ученых в том, что «специальные Т-лимфоциты»—это трихомонады. А теперь подойдем к этой проблеме с другой стороны: проверим, есть ли у трихомонад мар­керы-рецепторы СД4. Таким образом, решим вторую задачу данного эксперимента: при обнаружении рецеп­торов СД4 экспериментально подтвердим идентич­ность «специальных Т-лимфоцитов», в данном случае лимфоидных клеток МТ4 (Япония), и ротовых и ваги­нальных трихомонад.

С этой целью в МСЧ № 12 от четырех здоровых лю­дей было взято содержимое десневых карманов и сра­зу же помещено в пробирки с питательной средой. Просмотр проб под микроскопом показал наличие трихомонад во всех пробирках. Но в двух из них были обнаружены также грибы Кандида, что помешало бы чистоте эксперимента. Поэтому эти пробы были автоклавированы, а вместо них использовано содержи­мое десневых карманов от женщины 55 лет, взятое 2 недели назад и хранившееся при 37°С без пересе­вов. Возраст остальных людей, чья ротовая трихомонада была использована в эксперименте, состав­лял 24 и 26 лет.

Вагинальная трихомонада была получена при ос­мотре женщин — пациенток гинекологического каби­нета МСЧ № 12. Возраст их составлял 36, 32 и 17 лет. В качестве контроля был использован штамм лимфо­идных клеток МТ4 (Япония). Анализ исследуемых три­хомонад на наличие рецепторов СД4 был проведен в одной из лабораторий ВОНЦа. Он показал, что все трихомонады, ротовые и вагинальные, имеют рецеп­торы СД4 Более того, если процентное содержание клеток, имеющих рецепторы СД4, в контрольной линии лимфоидных клеток МТ4 составило 62,2%, то в ротовой трихомонаде 24-летней женщины, культиви­рованной в течение суток, 77,4%. А в ротовой трихо­монаде 55-летней женщины, которая инкубировалась в питательной среде в течение двух недель, процент­ное содержание клеток, имеющих рецепторы СД4, со­ставило 83,6%.

Таким образом было доказано, что ро­товые и вагинальные трихомонады имеют рецепторы СД4, с которыми ВИЧ может связываться и проникать внутрь простейшего. А это уже серьезный аргумент и для ученых, которые, к сожалению, даже не подозре­вают о существовании трихомонад в крови, принимая их за лимфоциты (малые, атипические). Поэтому, «вы­ведя» из крови «специальные Т-лимфоциты», они не сравнили их с трихомонадами и не убедились в их иден­тичности. В этом ошибка ученых и причина неудач борьбы со СПИДом, так как не учитывается серьез­ный фактор: хозяином ВИЧ является жизнестойкий паразит трихомонада — возбудитель рака.

«Счастливый» конец эксперимента

Щ

Итак, вначале мы убедились, что «специальная ли­ния лимфоидных клеток МТ4» (Япония) — это цистоподобная трихомонада в виде округлых клеток. Затем доказали, что трихомонады имеют маркеры-ре­цепторы СД4, присущие только тем клеткам, в кото­рые способен проникать ВИЧ. Осталось провести за­ключительную часть эксперимента: доказать, что ви­рус иммунодефицита человека действительно прони­кает в трихомонады и, отпочковываясь, выходит за пределы клетки — своего хозяина, чтобы найти но­вую жертву и поселиться в ней.

С этой целью было осуществлено восемь моделей со культивирования ротовых и вагинальных трихомо­над с вирусом иммунодефицита человека HiVl. Наиболее удачной оказалась модель № 8, где условия сущест­вования трихомонад в части сохранения сопутствую­щей микрофлоры были приближены к естественным. Культуры клеток не центрифугировались, чтобы не уплотнялась наружная мембрана, и не добавлялись некоторые факторы роста трихомонад, чтобы не по­высилась их сопротивляемость проникновению БИЧ. В качестве исследуемых клеток использовались рото­вая и вагинальная трихомонады человека и кишечная трихомонада белой беспородной мыши, в качестве контроля — лимфоидные клетки МТ4.

Электронно-микроскопическое тестирование сре­зов клеточных осадков при увеличении в 30 и 60 ты­сяч раз показало наличие вирусов в ротовой и ваги­нальной трихомонадах (фото 7-10). На одном снимке видна часть трихомонады, наружная мембрана кото­рой имеет уплотнения — вирусы готовятся к отпоч­кованию. Как другом фотоснимке они уже отпочковы­ваются, на третьем — вышли за пределы трихомонад, а на четвертом фотоснимке — ВИЧ в разрушенной трихомонаде. Интересно, что ВИЧ не был обнаружен в трихомонаде мыши и в контрольных лимфоидных клетках МТ4. В отношении кишечной трихомонады мыши понятно: она способна образовывать цисту — плотную оболочку, защищающую ее от внешних фак­торов, в том числе и биологических.

Отсутствие ВИЧ в контрольных клетках МТ4 можно объяснить неудач­ными срезами осадка, в которые ВИЧ не попал. Но это свидетельствует и о том, что, как и в эксперименте по определению рецепторов СД4, трихомонады, взятые непосредственно от людей, более активно взаимодей­ствуют с ВИЧ, чем их сородичи, подвергавшиеся за­мораживанию и размораживанию и вдобавок назван­ные «лимфоидными клетками МТ4».

Кроме электронно-микроскопического тестирова­ния исследуемые культуры клеток подвергались также анализу непрямой иммунофлуоресценции и иммуно - ферментному анализу. Суть метода непрямой имму­нофлуоресценции состоит в выявлении антител к ВИЧ. Использование этого метода в эксперименте показало наличие их у ротовой и вагинальной трихомонад. Иммуноферментный анализ надосадочных жидкос­тей клеток, культивируемых вместе с ВИЧ, показал, что жидкости над ротовой и кишечной трихомонадами содержат в несколько раз больше антигена, способного связываться с иммуноглобулинами, вы­деленными из сыворотки крови больного СПИДом, чем клетки МТ4.Итак, эксперименты закончены. Они показали, что не в клетках крови, а в трихомонадах обитает ВИЧ. Это значит не с клетками крови, а с паразитами нужно бо­роться медикам, чтобы добраться до ВИЧ и победить СПИД. Но результаты этих исследований 3 года оста­ются невостребованными, а угроза СПИДа растет.. Кому это выгодно?

Дата добавления: 2015-02-05 | Просмотры: 1114 | Нарушение авторских прав