АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

СОЦИАЛЬНАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ 5 страница

Әдістің принципі.

Әдіс Манчини әдісіне негізделген (алдын ала адамның секреторлық А иммуноглобулиніне (sIgA) қарсы моноспецификалық сары су диспергирленген агар қабатындағы ойыққа зерттелетін сілекейді енгізгенде пайда болатын преципитат сақинасының диаметрін өлшеу). Моноспецификалық сары судың құрамында секреторлық IgA және еркін секреторлық компонентке қарсы антиденелер бар. Преципитат сақинасының диаметрі зерттелетін sIgA1 концентрациясын тура пропорционалды. Зерттелетін сынамалардағы sIgA құрамы белгілі концентрацияда секреторлық А иммуноглобулині бар бақылау үлгісіне байланысты анықталады.

Реактивтер мен жабдықтар:

· су моншасы;

· горизонталді стол;

· агарды құюға арналған шынылар;

· агарда ойықтарды оюға арналған ойғыш (диаметрі – 2 мм);

· ылғал камера;

· секреторлық IgA қарсы диагностикалық моноспецификалық сары су (дайын);

· бақылау материалы - құрамында белгілі концентрацияда ақуыз бар иммундық химиялық таза секреторлық А иммуноглобулині (дайын, коммерциялық);

· веронал;

· мединал;

· ВМБ-дағы 2% агар;

· бинокулярлық лупа.

Стимуляцияланбаған аралас сілекейді зерттеу үшін арналған биоматериалды алу және өңдеу:

· таңғы астан 1 сағаттан соң ауызды қайнаған сумен шайып, 10 минут бойы стерилді пробиркаға сілекейді жинау керек. Сілекейдің жалпы көлемін өлшеу керек;

· сынаманы алу үшін зерттеу мақсатында 1 мл сілекейді таза пробиркаға салып, 20 минут бойы 1500-2000 айн/мин айналдырылады;

· 500 мкл тұнба үстінгі сұйықтық пипеткамен «эппендорф» типті пробиркаға салынады. Егер сынаманы алған күні пайдалану мүмкін болмаса оны -4 -8ºС сақтау керек; ұзақ сақталса – 20ºС.

Реактивтерді анализ үшін дайындау:

· веронал-мединалды буферді дайындау (ВМБ): 1,28 г мединалды, 0,23 г вероналды өлшеп, 125 мл дистиллирленген су қосу керек. ВМБ-ң рН өлшенеді (рН 8,36±0,04);

· 2% агарды дайындау: 2 г құрғақ агарға 100 мл ВМБ және 0,1% 1 мл мертиолят ерітіндісі қосылады. Су моншасында ерігенше қыздырылады. Агарды ыстық күйінде центрфуганың пробиркаларына құйып, мұздатқышта -4 -8ºС температурада пайдаланғанға дейін сақтау керек;

· 2 мл дистиллирленген суда секреторлық А иммуноглобулиніне қарсы моноспецификалық сары суды еріту керек;

· 0,5 мл дистиллирленген суда белгілі концентрацияда 2 мг/мл ақуызы бар бақылау сары суын еріту керек. – 20ºС тоңазытқышта пайдаланғанға дейін сақтау керек. Егер ұзақ сақтау кезінде мақта тәрізді тұнба пайда болса, қайтадан 2000 айн/мин айналдыру қажет.

· жұмыс қоспасын дайындау: 2% агарды және (2,7 мл) және моноспецификалық қарсы сарысуды (0,3 мл) 55-57ºС температурада араластыру қажет.

· агарды құю үшін таза майсыздандырылған шыныларды дайындау керек.

РИД жүргізу техникасы:

· шыныны үстелдің үстіне қойып, агар ағып кетпеуі үшін оның шеттерін стеклографпен сызып шығу керек, кейін шыныға 3 мл жұмыс қоспасын құйып қою керек. Агардың қабаты 1-2 мл;

· шыныдағы агар қатқанша келесі ара қатыста секреторлық IgА бақылау үлгісінің араласпасын дайындау қажет: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8;

· қатқан агарда ара қашықтығы 1,5 мм болатын ойықтар жасау керек;

· ойықтардың бірінші қатарына келесі ара қатыста 2 мкл бақылау үлгілерін салу керек: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8;

· қалған ойықтарға 2 мкл зерттелетін үлгілерді құю қажет;

· шыныларды 24 сағат ылғал камерада бөлме температурасында ұстау керек;

· сонымен қатар осы ережелерді сақтай отырып, сары сулық Ig (IgA, IgM, IgG) анықтау үшін дайын иммунодиффузиялық планшеттердің ойықтарына науқастардың үлгілері және сары сулық IgA₂ арналған стандарттардың бақылау араласпалары (араластыру титрі флаконда көрсетілген) салынады. Инкубациялау уақыты – 24 сағат.

Нәтижелерді есептеу:

· инкубациядан кейін бинокулярлық лупамен преципитаттардың сақинасын санау керек. Секреторлық және сары сулық Ig концентрациясы калибрлік қисықпен анықталады;

· преципитат диаметрінің (Д) Ig секреттерінің концентрациясына байланысының калибрлік қисығын құру. Абсцисс осі бойынша преципитат сақыналарының диаметрі, ал ординат осі бойынша sIgA бақылау үлгілерінің концентрациясы көрсетіледі;

· секреторлық IgA₁ және сары сулық IgA₂ қатынастарын есептеу керек.

Нәтижелерді талдау. Араласқан сілекейдің құрамында сары сулық ақуыздар, атап айтқанда Ig бар. Сары сулық және секреторлық IgA ара қатысын және мөлшерін анықтау үшін екі түрлі қарсы сары суларға зерттеулер жүргізіледі: секреторлық sIgA₁ және сары сулық IgA₂. Бұл қосымша көрсеткішті анықтауға мүмкіндік береді – секреторлық және сары сулық иммуноглобулин концентрациялары нәтижелерінің айырмашылығына тең еркін секреторлық компонент. Секреторлық IgA транссудациясы ауыз қуысының шырышты қабықтарының қабынуында жоғарылайды.

Сау адамдарда sIgA₁ – 0,27-0,70 г/л; sIgA₂ – 0,29-0,60 г/л; sIgG – 0,6 г/л дейін; sIgM – жоқ; sIgA₁/sIgA₂ – 0,8 – 1,2 шартты бірлік.

Сапаны бақылау. Секреторлық иммуноглобулиннің бақылау көрсеткіштерін алдын ала дайындалған Шухарт картасына қою керек. Нәтижелері есептеледі.

Тәжірибелік сабақ 5

ТАҚЫРЫП: Бейспецификалық қорғаныс факторлары. Диффузия әдісімен агарда лизоцим деңгейін анықтау.

Сабақтың жоспары:

1. Лизоцимді анықтау әдісінің принципі. Клиникалық маңызы.

2. Реактивтер мен жабдықтарды дайындау.

3. Анализді жүргізу техникасы.

4. Нәтижелерді есептеу, калибрлік қисықты сызу.

5. Сапаны бақылау.

Тәжірибелік дағдылар:

· су моншасымен және сараптама таразылармен жұмыс істей білу;

· Дифко агарын дайындай алу;

· жұмыс ерітіндісін дайындай білу (агар+фталат буферінің ерітіндісі+микрококк культурасы);

· Петри табақшасына агарды құю техникасын игеру,

· лизоцимнің бақылау ерітінділерін дайындай білу;

· ойықтарға үлгілерді дұрыс сала білу;

· калибрлік қисықтарды сызу техникасын игеру;

· әдістің сапасына бақылау жүргізе білу.

Сабақты өтуге арналған нұсқау.

Лизоцим – бірқатар патогендік бактериялар мен вирустардан организмнің бейспецификалық қорғаныс факторларының бірі болып табылады. Әртүрлі биологиялық сұйықтықтарда (көз жасы жолында, тыныс алу жолдарының және ішектердің шырышты қабаттарында, теріде, сүтте, бүйректе, қанның сары суында және т.б.) және ұлпаларда болады.

Лизоцим бактериялардың мембранасын зақымдап, олардың өзіндік және IgA бірге жойылуына алып келеді. Лизоцимнің белсенділігін анықтау жұқпалы аурулардың ағымының ауырлығын анықтау, емдеу динамикасын зерттеу үшін маңызды. Иммундық жүйенің шеткі тізбегінің бұзылуының дәрежесін бағалауға мүмкіндік береді.

Әдістің принципі.

Лизоцимнің деңгейін анықтау үшін агарда диффузиялау әдісі қолданылады. Жасушалардың лизистену аймағы өлшеніп, зерттелуші үлгілердегі лизоцимнің концентрациясы анықталады.

Реактивтер мен жабдықтар:

· калий бифталаты;

· Дифко агары;

· микрококктың ацетондық ұнтағы (micrococcus lysodeikticus);

· лизоцимнің кристалды ұнтағы;

· ионометр;

· фарфор пиала;

· су моншасы;

· Петри табақшасы;

· мұздатқыш;

· тот баспайтын болаттан жасалған шыны Д= 8 мм;

· өлшегіш колба.

Реактивтерді дайындау:

· 0,1 М калий бифталатының ерітіндісі: 20,42 г құрғақ калий бифталаты 1 л дистиллирленген суда ерітіледі. Буфердің бастапқы рН – 3,9-4,0. 10 моль/л NaOH-мен, кейін 1 моль/л NaOH-мен жаймен тамшылып рН-ты қажетті көрсеткішке (6,2) дейін жеткізу керек;

· агар қоспасын дайындау: 100 мл 0,1 моль/л фталат буферінің ерітіндісіне (рН 6,2) 1 г Дифко агары қосылады. Агарды балқыту үшін қоспасы бар қолба су моншасына қойылады;

· құрғақ микрококк культурасының 150 мг өлшеп, фарфор пиалада мұқият ұнтақтап, 10 мл 0,1 моль/л калий бифталатынің ерітіндісімен (рН – 6,2) араластыру керек;

· дайындалған суспензияны t=45-50ºC дейін мұздатылған 100 мл агарға құйып, араластырып, 15 мл-ден Петри табақшаларына құйып шығу керек. Агар жақсы қату үшін мұздатқышқа қойылады;

· лизоцимнің бақылау ерітінділерін дайындау: лизоцимнің 10 г кристалл ұнтағын өлшеп, көлемі 50 мл өлшегіш колбаға жайымен салып, белгіге дейін дистиллирленген су құю керек. Концентрациясы 200 мкг/мл дайындалған лизоцимнің жұмыс ерітіндісі қолданғанға дейін тоңазытқышта сақталады;

· концентрациясы 8 мкг/мл лизоцим ерітіндісін алу үшін дайындалған жұмыс ерітіндісінің 2 мл құрғақ колбаға құйып, белгіге дейін 50 мл дистиллирленген сумен жеткізу қажет;

· концентрациясы 1 мкг/мл бақылау ерітінділерін алу үшін концентрациясы 8 мкг/мл 0,25 мл лизоцим ерітіндісін пробиркаға құйып, 1,75 мл натрий бифталатын қосу керек; 2 мкг/мл – 0,5 мл лизоцим және 1,5 мл натрий бифталаты; 4 мкг/мл – 1 мл лизоцим және 1 мл натрий бифталаты.

Анализді жүргізу техникасы:

· қатқан агарда ойғышпен диаметрі 8 мм 5 ойық жасау керек: 3 ойық лизоцимнің бақылау ерітінділері үшін; 2 ойық зерттелетін үлгілер үшін;

· әр ойыққа 0,15 мл-ден бақылау және зерттелуші үлгілерден тамызу керек;

· табақшаларды 18-20 сағат бойы t=37ºC инкубирлеу қажет. Инкубациядан кейін ойықтардың айналасында лизистену аймақтары пайда болады.

Нәтижелерді есептеу.

Ойықтардың айналасындағы лизистену аймақтарын өлшеп, калибрлік қисықтың көмегімен зерттелетін ерітінділердегі лизоцимнің концентрациясын анықтау керек. Калибрлік қисық лизоцимнің бақылау араласпаларымен жасалады. Абсцисс осі бойынша лизис аймақтарының көлемі, ординат осі бойынша лизоцимнің бақылау ерітінділерінің концентрациялары қойылады.

Сапаны бақылау.

Алдын ала дайындалған Шухарт картасына бақылау көрсеткіштері белгіленеді. Нәтижелерді есептеу керек.

Тәжірибелік сабақ 6

ТАҚЫРЫП: Бейспецификалық қорғаныс факторлары. Комплемент жүйесі. Комплементтің жалпы гемолиздік белсенділігі.

Сабақтың жоспары:

1. 50% гемолизин бойынша комплементтің жалпы гемолиздену белсенділігін анықтау әдісінің принципі. Клиникалық маңызы.

2. Реактивтер дайындау.

3. Үлгілер мен жабдықтарды дайындау.

4. Анализді жүргізу техникасы.

5. Нәтижелерді есептеу, калибрлік қисықты сызу.

Тәжірибелік дағдылар:

· веронал-мединал буферін дайындай білу;

· Олсвер ерітіндісін дайындай білу;

· қой эритроциттерінің стнадартты 5% қоспасын дайындай білу;

· гемолиздік жүйені дайындай білу;

· ионометрмен, сараптама таразылармен, спектрофотометрмен жұмыс жасай білу;

· калибрлік қисық сыза білу.

Сабақты өтуге арналған нұсқау.

Комплементтің белсенділігін бағалаудың екі жолы бар: 1) жалпы гемолиздік белсенділікті титр бойынша анықтау (50 немесе 100% гемолиз); 2) комплемент белсенділігінің дәрежесіне толық сипаттама беру үшін – комлементтік компоненттерін (С3, С4, С5 және т.б.) РИД, ИФТ, турбодиметрия әдістерімен анықтау.

Әдістің принципі.

Комплементтің жалпы белсенділігі комплементті байланыстырушы реакцияда (қой эритроциттері + спецификалық қарсы сары су) қолданылатын гемолиздік системада анықталады. Құрамында комплемент бар сары су мен антикомплементарлық сары су өзара әсерлескенде эритроциттер гемолизденеді. Комплементтің гемолиздік белсенділігі 1 мл стандартты гемолиздік жүйенің құрамында болатын 50% эритроциттердің лизистенуі үшін қажетті жаңа сары судың ең төмен мөлшерімен 37º 1 сағат ішінде белгіленеді. Комплементтің белсенділігі 50% гемолиздік бірлікте (НС₅₀) көрсетіледі. Сау адамда бұл жүйе белсенді емес және сары судағы комплементтің деңгейі 40-80 НС₅₀ тең болады. Комплементтің белсенуі иммундық комплектердің және бактериялардың фагоцитозының күшеюіне, лизосомалардан ферменттердің көп бөлінуіне, капиллярлардың өткізгіштігі жоғарылауымен жүретін гистамин бөлінуінің күшеюіне, хемотаксистің жылдамдауына, комплемент орналасқан жасушалардың лизистенуіне алып келеді. Комплементтің белсенуінде кальций және магний иондары қатысады.

Реактивтер мен жабдықтар:

· веронал;

· мединал;

· глюкоза;

· натрий цитраты;

· натрий хлориді;

· гемолиздік сары су (дайын);

· қой эритроциттері,

· қалыңдығы 5 мм кюветасы бар фотоэлектрофолориметр немесе спектрофотометр;

· центрифуга, центрифуганың пробиркалары;

· мұздатқыш;

· су моншасы,

· ионометр;

· сары суды жинауға және сақтауға арналаған пластмасса пробиркалар.

Реактивтерді дайындау:

· құрамында кальций және магний бар бес еселік веронал-медианл буфер: 5,75 г вероналды 500 мл ыстық дистиллирленген суда ерітіп, 20º дейін суыту қажет, кейін 3,75 г мединал қосылады; 85 г NaCl; 0,22 г CaCl₂ x 2H₂O; 1г MgCl₂ x 6H₂O, ерітіндінің жалпы көлемі 2 л болуы тиіс. Ерітіндінің рН – 7,3-7,4, қолданғанға дейін t=+4ºC сақтау қажет.

· Олсвер ерітіндісі: 0,8 г натрий цитраты, 2,05 г глюкоза, 0,4 г натрий хлоридін 80 мл дистиллирленген суда ерітіп, 100 мл көлемге дейін жеткізу керек. Ерітіндінің рН 1 моль/л NaOH ерітіндісімен 6,1-ге жеткізу керек. Дайындалған ерітіндіні су моншасында 3 рет 15 минуттан қайнатып стерилдеу қажет;

· қой эритроциттері: таза фибриннен тазартылған қойдың қанын бірдей мөлшердегі Олсвер ерітіндісімен араластыру керек, t=+4ºC сақталады, 3-4 күн тұрақтанғаннан кейін 4-8 апта арасында қолдану қажет;

· гемолиздік сары су ерітіндісі: лиофилизденген сары суды дистиллирленген сумен араластыру керек. t=+4ºC қолданғанға дейін сақтау қажет.

Зерттеу күні дайындау қажет:

· веронал-мединал жұмыс ерітіндісін Ca⁺⁺⁺ және Mg⁺⁺⁺ иондарымен (ВМБ⁺⁺⁺): ВМБ 1 көлеміне 4 көлемде дистиллирленген су қосылады. 12 сағат бойы сақталады;

· сараптама жүргізу үшін гемолиздік сары суды ВМБ үш еселік титрмен оның титрі флаконда көрсетілген жұмыс титрінен 3 есе жоғары етіп араластыру қажет;

· қой эритроциттерінің 5% стандартты қорытпалары (қажет болса): эритроциттерді ВМБ жуу үшін 3000 айн/мин 5 минуттан бірнеше рет айналдыру керек. Алынған тұнбадан (100% деп есептелген) 5% эритроциттер қоспасын дайындау керек: тұнбаның 1 көлеміне ВМБ⁺⁺ 17 көлемін қосу керек. Стандарттау үшін 1 мл 5% эритроциттер қоспасы 3 мл дистиллирленген сумен араластырылады. Эритроциттер центрифугалауда лизистенеді. Алынған гемоглобиннің оптикалық тығыздығы (ОТ) 1,1 болуы тиіс. Егер ОТ бұл көрсеткішке сәйкес болмаса ВМБ қажетті көлемі стандартты 5% эритроциттер қоспасын дайындау үшін V_соңғы =V_{бастапқы} x ОТ/1,1 формуласы бойынша сәйкестендіріледі;

· гемолиздік жүйе ерітіндісі: дайын болған эритроциттер қорытпасының стандартты жүйесіне жаймен, араластыра отырып дайын гемолиздік сары суды бірдей көлемде үш еселік титрде қосу керек. Эритроциттерді сенсибилизациялау үшін қоспаны 30 минут t=+37ºC термостатта инкубирлеу қажет. Қоспа 2-3 сағат сақталады.

Анализді жүргізу техникасы:

· зерттелетін сары суды 1:10 ара қатыста ВМБ⁺⁺ (0,5 мл + 4,5 мл) араластыру керек:

· 10 пробиркаға 0,05 мл-ден 0,5 мл аралықтағы көлемдерде құйып шығу керек, әр пробирканың арасындағы айырмашылық 0,05 мл;

· сары суды буферлік ерітіндімен 1,0 мл көлемге дейін жеткізу керек, кейін әрбір пробиркаға 1,0 мл гемолиздік жүйенің стандартты ерітіндісін қосу керек;

· пробиркаларды шайқап, 60 минут t=+37ºC термостатта инкубирлеу қажет, кейін 10 минут тоңазытқышта t=+2 +4ºC салқындатып, 1500-2000 айн/мин 10 минут айналдыру қажет;

· бір уақытта гемолиздің болмауына бақылау қою керек (1,0 мл сенсибилизацияланған эритроциттердің ерітіндісі + 1,0 мл ВМБ⁺⁺⁺).

Нәтижелерді есептеу.

Гемолиздену дәрежесі қалыңдығы 5 мм кюветасы бар ФЭК-те (толқын ұзындығы 400-800 нм) немесе спектрофотометрде (541 нм) анықталады. Гемолиздену пайызы экстинцияның сандық көрсеткіштері бойынша төмендегі формуламен есептеледі:

Гемолиздену % = Тәж Е х 100,

БЕ

Бұл жерде ТәжЕ– тәжірибе экстинциясының көрсеткіші, БЕ- бақылау экстинциясының көрсеткіші (100% гемолиз).

Комплементтің гемолиздік белсенділігінің (СН₅₀) бірлігі ретінде оның 0,5 мл сенсибилизацияланған эритроциттердің 50% лизистенуіне ықпал болған саны алынады. 1 мл зерттелуші ары судағы (Х) комплементтің 50% гемолиздік бірлігін есептеу үшін мына формула қолданылады: Х=1/V₁, бұл жерде V₁ – 1 СН₅₀ сәйкес келетін сары судың көлемі (1:10).

Гемолиз пайызын калибрлік қисықтың көмегімен де есептеуге болады. Әрбір ФЭК үшін өзінің калибрлік қиысығын сызу керек және оны комплементтің келесі титрлеуінде қолдану қажет.

Гемолидің шкаласын дайындау үшін 4 мл стандартты 5% эритроциттер қоспасын дайындау керек. Бұл сұйықтықты 12 мл дистиллирленген сумен араластыру керек. Эритроциттердің лизистенуі нәтижесінде оның құрамындағы барлық гемоглобин ерітіндіге (100%) бөлініп шығады. Дайындалған гемоглобин ерітіндісінен гемолиз шкаласы дайындалады (7 кесте).

7 кесте

Алынған араласпалар ФЭК-те 400-800 нм толқын ұзындығында қалыңдығы 0,5 см кюветада өлшеніп, оптикалық тығыздық көрсеткішінің «гемолиз пайызынан» айырмашылығы графигі сызылады. Абсцесс осіне гемолиз пайызы, ординат осіне сол гемолиз пайызына сәйкес оптикалық тығыздық көрсеткіші бейнеленеді.

Сапаны бақылау.

Әрбір сараптамада алдын ала сызылған Шухарт картасында гемолиздену белсенділігінің стандартты көрсеткіші бейнеленеді.

Тәжірибелік сабақ 7

ТАҚЫРЫП: Бейспецификалық қорғаныс факторлары. Комплемент жүйесі. РИД әдістері. Комплементтің С3 компонентін анықтау.

Сабақтың жоспары:

1. Комплемент жүйесінің компоненттері. Комплемент компоненттерін анықтауға арналған РИД.

2. Комплементтің С3 компонентінің құрамын анықтау.

3. Реактивтер мен жабдықтарды дайындау.

4. Анализді жүргізу техникасы.

5. Нәтижелерді есептеу, калибрлік қисықты сызу.

6. Сапаны бақылау.

Тәжірибелік дағдылар:

· сараптама таразыларымен, бинокулярлық микроскоппен, су моншасымен жұмыс істей білу;

· реактивтер мен жұмыс қоспаларын (агар+қарсы сары су) дайындай білу;

· шыныға және ойықтарға үлгілерді құйып білу;

· гемолиздік жүйені дайындай білу;

· калибрлік қисық сыза білу және сапасын бақылау.

Сабақты өтуге арналған нұсқау.

Комплемен жүйесі – организмнің жетекші қорғаныс факторларының бірі және иммундық және қабыну реакцияларының, жұқпалы ауруларға қарсы төзімділіктің дамуында маңызды болып табылады. Комплементтің компоненттері ішінде С3 белсенуі негізгі болып есептеледі, ол плазмада өте жоғары мөлшерде болады және оның белсенуі С3а ыдырауынан түзілетін өнімдердің пайда болуына және комплементтің басқа компоненттерінің белсенуне алып келеді. Сау адамдарда С3 концентрациясы 0,8-1,8 г/л құрайды.

Әдістің принципі моноспецификалық сары суларды (РИД) қолдана отырып преципитация реакциясын қоюмен негізделеді.

Адамның сары суын агар және С3 қарсы қарсысарысу қоспасына қосқанда Аг және Ад өзара диффузиялануы кезінде преципитациялану сақинасы пайда болады, оның диаметрі сары судағы С3 концентрациясына байланысты.

Реактивтер мен жабдықтар:

· С3 қарсы қарсысарысу (дайын, коммерциялық);

· құрамында С3 бар стандартты сары су (дайын, коммерциялық);

· Дифко агары;

· веронал;

· мединал;

· су моншасы;

· агарды құюға арналған шынылар;

· ойықтарды оюға арналған ойғыш;

· ылғал камера;

· бинокулярлық микроскоп;

· сараптама мәліметтерін есептеуге арналған компьютерлік бағдарлама (қажет болса).

Реактивтерді дайындау:

· веронал-мединал буферін дайындау: 1,28 г мединал, 0,23 г веронал, 125 мл дистиллирленген су (рН 8,36±0,04);

· 2% агар дайындау: 2 г құрғақ агарға 100 мл веронал-мединал буферін, кейін 1 мл 0,1% мертиолят қосу керек;

· агарды су монашасында балқығанша ерітіп, пробиркаларға 4 мл-ден құйып шығу керек. Тоңазытқышта t=+4ºC қолданғанға дейін сақтау керек;

· дайын С3 қарсы қарсысары суды дистиллирленген суда немесе физерітіндіде еріту қажет;

· шыныларды дайындау керек (таза, майсыздандыру үшін 70% спиртпен сүртіледі);

· жұмыс қоспасын дайындау: t=+48-50ºC жылытылған 2,8 мл агарды осы температурада жылытылған 0,2 мл қарсысары сумен (екеуін бірге су монашсында жылыту керек) араластыру керек;

· жаймен, көпіршіктер пайда етпей, дайындалған 3 мл жұмыс ерітіндісін шыныға құю қажет, алдын ала шеттерін стеклографпен агар ағып кетпес үшін сызу қою керек. Агар қабатының қалыңдығы – 1-2 мм;

· агар қату үшін шыныны 20 минут қою керек;

· агар қатқанша, дистиллирленген сумен құрамында С3 бар дайын стандартты сары суды еріту керек.

РИД жүргізу техникасы:

· агар қабатында ара қашықтығы 15 мм диаметрі 2 мм ойықтар жасау керек;

· бірінші қатардағы алдыңғы үш ойыққа пипеткалық дозатормен 8-10 мкл стандартты сары суды әртүрлі араласпада құю қажет. Мысалы: араласпаған, 1:2, 1:4 араласпада. Қалған ойықтарға 8-10 мкл зерттелуші араласпаған үлгілерді (науқастардың сары сулары) салу керек. Үлгілері құйылған шыныларды бөлме температурасында 24 сағат бойы ылғал 8-10 мклкамерада ұстау қажет. Радиалды иммунодиффузия реакциясында гелде преципитация сақиналары пайда болады, олардың диаметрлері С3 санына (г/л) пропорционалды болады.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 934 | Нарушение авторских прав