 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Вирусные инфекции1. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. – М., 2007.– 384 с. 2. Сэнфорд Дж., Гилберт Д., Гербердинг Дж., Сэнде М. Антимикробная терапия. Карманный справочник. Пер. с англ. – М., 2006.– 324 с. 3. Нельсон Дж.Д. Антимикробная терапия в педиатрии. Справочник. Пер. с англ. – Витебск, 1997. – 128 с.
3.1.27. ТЕМА: Лабораторная диагностика бактериальных инфекций (д.м.н., профессор Ключарева А.А.)
УЧЕБНЫЕ ВОПРОСЫ: 1. Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций. 2. Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов. 3. Достоинства и недостатки различных методов лабораторной диагностики бактериальных инфекций.
1. Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций. Методы лабораторной диагностики инфекций делят на прямые (определение антигенов или нуклеиновых кислот возбудителя) и непрямые (определение антител к возбудителю). Основные методы, используемые для лабораторной диагностики бактериальных инфекций, – это прямая микроскопия, культуральный метод, иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Материалом для исследования являются биологические жидкости организма – чаще кровь, моча, ликвор, слизь из зева или носа, вагинальный или шеечный соскоб, соскоб из уретры, реже синовиальная жидкость, слюна. Прямая микроскопия (на стекле приготавливают мазок из материала и рассматривают его под микроскопом) предварительно позволяет быстро сориентироваться в этиологии патологического процесса. Культуральный метод (посев материала на среды с последующей идентификацией возбудителя в подросших колониях) является одним из самых точных методов лабораторной диагностики, но для его выполнения требуется значительное время (несколько дней, для выделения туберкулезной палочки – недели). Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале, а также определение его антибиотикорезистентности. При ИФА определяют находящиеся в биологической жидкости суммарные антитела и/или антигены бактерий путем связывания их со специфическими антигеном/антителом, сорбированными на твердой фазе и меченными ферментом, с последующим расщеплением хромогена и регистрацией результата. Выявляются как суммарные антитела, так и антитела различных классов (IgM, IgG, IgA). Возможно установление титра антител к возбудителю. При проведении РИФ определяют антигены возбудителя путем связывания их со специфическим антителом, меченным флюоресцентным агентом с последующей детекцией свечения под микроскопом. Из быстрых тестов для определения бактериальных возбудителей наиболее часто используют реакцию латекс-агглютинации. ПЦР подразумевает определение нуклеиновых кислот (РНК или ДНК) возбудителя в биологических жидкостях. Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале и определение его генетических характеристик (например, антибиотикорезистентности).
2. Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов. На результат лабораторного анализа влияют многие факторы, связанные как непосредственно с качеством лабораторной диагностики (диагностическая чувствительность и специфичность метода и используемых тест-систем), так и с правильным выбором метода лабораторной диагностики (исходя из представлений о биологии возбудителя и течения инфекции) и с правильными забором, хранением и транспортировкой материала в лабораторию. Ошибки лабораторной диагностики
Чувствительность – вероятность получения положительного результата теста у больных пациентов (истинно положительного результата). Рассчитывается как отношение количества людей с истинно положительной реакцией на этот тест при наличии у них какого-либо заболевания к общему числу больных этим заболеванием людей (имеющих и истинно положительные, и ложноотрицательные ответы). Специфичность – вероятность получения отрицательного результата теста у здоровых пациентов (истинно отрицательного результата). Рассчитывается как отношение количества здоровых людей, у которых имеет место отрицательная реакция на тест к общему числу здоровых людей (имеющих и истинно отрицательные, и ложно положительные ответы). Положительная предсказующая ценность – вероятность заболевания в процентах при положительном результате теста. Отрицательная предсказующая ценность – вероятность отсутствия заболевания при отрицательном результате теста. Интегральная оценка эффективности диагностики (диагностической чувствительности и специфичности) проводится по ROC-кривой (с вычислением AU ROC и 95% доверительных интервалов к ней). Особое значение имеет осуществление правильного забора, хранения и транспортировки материала. Наиболее требовательным является культуральный метод – необходима быстрая доставка материала в лабораторию и обязательное сохранение жизнеспособности возбудителя. Для постановки ИФА, ПЦР возможно хранение замороженной плазмы крови. В фиксированном препарате можно проводить микроскопию, в т.ч. флюоресцентную (РИФ). Ошибки на этапе забора, хранения и транспортировки материала
3. Достоинства и недостатки различных методов лабораторной диагностики бактериальных инфекций. Каждый из используемых методов лабораторной диагностики обладает определенными достоинствами и недостатками, и занимает свою нишу в диагностическом процессе. Зачастую для диагностики требуется комбинированное использование нескольких лабораторных методов.
Список литературы: 1. Камышников ВС. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. – М.: МЕДпересс-информ, 2004. – 920 с. 2. Антитела. Методы. В 2-х томах. Т.1 / Под ред. Д.Кетти.– М.: Мир, 1990.– С. 82. 3. Макреди Б.Дж., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами. Молекулярная клиническая диагностика. Методы.– М.: Мир, 1999.– С.496-506. 4. The ELISA guidebook (Methods in molecular biology; Vol. 149)/ Edited by J.R.Crowther.– Totowa: Humana Press, 2001.– 421 p. 5. PCR protocols (Methods in molecular biology; Vol. 788).– 2nd edition / Edited by J.M.Bartlett, D.Stirling.– Humana Press, 2002.– 556 p. Вирусные инфекции Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 764 | Нарушение авторских прав |