АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

НАПРАВЛЕНИЙ ОБСЛЕДОВАНИЯ НА БИЧ

В процедурном кабинете на пробу биологического материала, предназначенную для тестирования на ВИЧ-инфекцию, оформля­ется сопроводительный медицинский документ-направление. На­правление составляют по форме 264/у - 88 в двух экземплярах. В направлении на исследование заполняются все графы. Записи дела­ются четко и аккуратно, без сокращений и исправлений. Зачерки­вать, вносить в направления изменения и поправки категорически запрещено.

В направлении содержатся следующие данные: название лечебно-профилактического учреждения-отправителя (обязательно наличие штам­па ЛПУ), номер пробы, цель исследования, фамилия, имя, отчество, пол, возраст пациента (дата рождения), гражданство, домашний адрес, место работы (учебы), код, дата взятия крови, а также должность, фамилия, имя отчество, подпись лица, направляющего материал на исследование. В слу­чае анонимного обследования пациента в направлении вместо фамилии, имени, отчества указывается буквенный или буквенно-цифровой шифр. Направления помещают в полиэтиленовые пакеты и доставляют в лабора­торию вместе с образцами крови.

ПРАВИЛА ЗАБОРА, ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ

НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ

Направившее ЛПУ

(штамп учреждения)

НАПРАВЛЕНИЕ

на исследование образца крови на антитела к ВИЧ

Должность, фамилия, имя, отчество, подпись лица, направляющего материал

Фамилия, имя, отчество, подпись медицинской сестры, забиравшей кровь.

Для серологического обследования на антитела к ВИЧ используется венозная кровь. Кровь в количестве 3-5 миллилитров забирают из лок­тевой вены (или любой другой вены - запястья, тыла ладони и т.д.). У новорожденных кровь берется из пупочной, височной, яремной вен.

Для забора используют одноразовые шприцы с иглами и стеклянные пробирки или одноразовые вакуумные системы. Стеклянные пробирки с венозной кровью сразу после взятия герметизируют резиновыми пробка­ми. Отобранный биологический материал маркируется. На пробу оформ­ляется сопроводительный медицинский документ - направление.

Если доставка проб крови в лабораторию в течение рабочего дня невозможна, полученный материал (цельную кровь) следует хра­нить не более 1 суток в холодильнике при +4-8°С.

Если проба не может быть доставлена в лабораторию в течение суток с момента забора, необходимо отделить сыворотку от сгустка. Кровь отстаивают при комнатной температуре (+18-22°С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. Затем пробирки центрифугируют. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше сте­рильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер. Сыворотка отбирается одноканальной пипеткой с использованием одноразовых наконечников или одноразовыми индивидуальными шприцами. В крайнем случае используются индивидуальные пипетки, прошедшие дезинфекцию, предстерилизационную обработку и контроль предстерилизационной обработки. Проба может храниться при темпера­туре +4-8°С до 7 дней, в замороженном виде - несколько лет.

Для транспортировки проб биологического материала в лабора­торию используют термоконтейнеры. Пробы в лабораторию достав­ляет персонал, прошедший инструктаж, назначенный ответствен­ным за транспортировку приказом по лечебно-профилактическому учреждению. Не допускается доставка в лабораторию проб биоло­гического материала с гемолизом, хилезом, бактериальным проро­стом, хранившихся дольше установленных сроков.

У пациентов с установленным диагнозом «ВИЧ-инфекция» в про­цессе диспансерного наблюдения определяют концентрацию РНК ВИЧ в плазме крови (вирусную нагрузку) и проводят исследование иммунного статуса (мониторинг количества СБ₄-лимфоцитов).

ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И

ТРАНСПОРТИРОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВИЧ

МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Для проведения исследования по определению ДНК провируса ВИЧ (качественный тест ПЦР) используют кровь с антикоагулянтом К ₃ ЭДТА. В исследовании по определению вирусной нагрузки ВИЧ может быть использована только плазма.

Взятие крови производится из локтевой вены в вакуумную про­бирку (вакутейнер), содержащую антикоагулянт К₃ЭДТА.После забо­ра пробирка с кровью перемешивается переворачиванием 3-4 раза.

Пробирку маркируют с указанием номера пробы, фамилии обследуе­мого или эпидемиологического номера ВИЧ-инфицированного пациен­та. Дату и время забора крови указывать обязательно. Пробирки с кро­вью перед доставкой в лабораторию хранят при температуре +2-8⁰С.

Биологический материал для определения ДНК провируса ВИЧ достав­ляется в лабораторию не позднее 24 часов с момента взятия крови. Для определения РНК ВИЧ (вирусной нагрузки) биоматериал должен быть доставлен в лабораторию в течение 6 часов с момента взятия крови.

Плазма крови должна быть отобрана не позднее б часов после за­бора крови. Для этого пробирку с кровью необходимо центрифуги­ровать при 3000 оборотов в минуту в течение 20 минут. Затем ото­брать плазму в количестве не менее 1 мл (отдельным наконечником с аэрозольным барьером) в одноразовую стерильную пробирку объ­емом 1,5-2 мл. Микропробирка с плазмой маркируется аналогично пробирке с кровью и хранится при температуре +2-8°С в течение 5 суток, при температуре -70°С - длительно.

Пробы биоматериала в лабораторию доставляет персонал, про­шедший инструктаж, назначенный ответственным за транспорти­ровку приказом по лечебно-профилактическому учреждению.

Транспортирование пробирок с кровью и микропробирок с плаз­мой осуществляют в специальном термоконтейнере с охлаждающим элементом, или в термосе со льдом при температуре +2-8°С.

ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И

ТРАНСПОРТИРОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО

СТАТУСА (ДЛЯ ПРОТОЧНОГО ПИТОМЕТРА)

Необходимо, чтобы образцы крови были правильно взяты и во­время доставлены в лабораторию. Нарушения, допущенные на этом этапе, могут повлиять на результат исследования и его дальнейшую интерпретацию.

Забор крови необходимо осуществлять утром натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти не менее 12 часов). В день накануне взятия крови пациенту лучше воздержаться от употребле­ния алкоголя, большого количества пищи, в особенности жирной, а также от чрезмерной физической нагрузки.

Забор крови необходимо осуществлять в положении пациента сидя или лежа. Жгут следует снять сразу же после попадания иглы в вену. Длительность наложения жгута не должна превышать 1 минуты. Взятие крови должно осуществляться до проведения диагностических и лечебных процедур. Необходимо не менее 4 мл крови. При проведении пациенту внутривенных вливаний, пункцию вены для взятия крови необходимо осуществлять па другой руке. При взятии пробы из арте­риальных или венозных катетеров, канюлю следует промыть изотони­ческим солевым раствором (физиологическим раствором), первые 5 мл крови следует выбросить, а затем взять пробу.

Кровь собирается в вакуумную пробирку, содержащую анти­коагулянт. В качестве антикоагулянта лучше всего использовать K₃3DTA (1,5 +/- 0,15 мг на мл крови). Во избежание образования сгустков необходимо хорошо перемешивать кровь с антикоагулян­том. Перемешивание осуществляется путем переворачивания про­бирки не менее 8 раз. Применение миксеров и встряхивание про­бирок недопустимо, так как это приводит к гемолизу и получению неверных результатов. Необходимо соблюдать правильное соотно­шение крови и ант и коагулянта. Недостаточное количество крови или переполнение пробирки может привести к искажению резуль­татов иммунофенотипирования.

На пробирке с образцом должны быть указаны идентифицирую­щие данные пациента и точное время забора крови. В сопроводи­тельных документах должны быть указаны фамилия, имя и отче­ство пациента, возраст, пол, дата и время забора крови.

После забора пробирки с кровью хранят при температуре +18-25°С. Следует избегать замораживания или перегревания образцов, так как нарушение температурного режима может повлиять на ре­зультаты иммунофенотипирования. Образцы крови должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее, но не позднее 48 ча­сов после взятия крови.

Транспортировку проб в лабораторию осуществляют в термо­контейнере (в штативе, в вертикальном положении) при комнат­ной температуре (+18-25°С), не допуская охлаждения ниже +18°С и перегрева выше +25°С. На контейнере должна быть маркировка «Не переворачивать, не встряхивать!».

Пробы биоматериала в лабораторию доставляет персонал, про­шедший инструктаж, назначенный ответственным за транспорти­ровку приказом по лечебно-профилактическому учреждению.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используются различные методы обнаружения культуры ВИЧ, ан­тител, антигенов и генного материала ВИЧ. Все эти методы облада­ют различной эффективностью, требуют различного оборудования и разного уровня подготовки.

Выделение и идентификация культуры ВИЧ является достовер­ным признаком инфицирования ВИЧ. Однако этот метод малодо­ступен, требует длительного времени, высокой квалификации ис­полнителей, специального оборудования. Кроме того, он достаточно дорог. Поэтому выделение вируса и его идентификация проводится только в научных целях или в исключительно сложных случаях.

Основные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции включают выявление вирусных антигенов и антител к ВИЧ. Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа. Этот метод очень наде­жен, его чувствительность составляет более 99,5%. Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело.

Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3-х ме­сяцев после инфицирования, у 5-9% - через б месяцев и у 0,5-1% в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител - 2 недели с момента заражения. Скрытый период, «период окна», можно сократить на несколько дней, используя тесты для выявления антигена.

Иммуноферментные тесты, одновременно выявляющие как ан­тиген, так и антитела, имеют высокую чувствительность и выяв­ляют лиц как уже с выраженной инфекцией, так и лиц на ранних стадиях ВИЧ-инфекции.

Применение метода полимеразной цепной реакции для опреде­ления провирусной ДНК вируса еще на несколько дней сокращает «период окна». Поэтому «период окна» может иметь продолжитель­ность 2-3 недели, если использовать всестороннюю стратегию вы­явления ВИЧ.

Хотя тесты, используемые для скрининга, являются чувствительны­ми, у них отсутствует достаточная степень специфичности. Причинами ложноположительного результата ИФА могут быть наличие в сыворот­ке антител к аутоантигенам, болезни печени, онкозаболевания и так далее. Поэтому сыворотки, дающие воспроизводимо положительный результат в ходе скрининга, должны быть проверены с использованием подтверждающего метода (иммунный блот-Western blot).

Быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ - это тесты, которые можно выполнить менее чем за 30 минут. При правильном исполнении быстрые тесты на антитела к ВИЧ являются точными и имеют широкое применение в целом ряде ситуаций. Об­ласти их применения: трансплантология, эпидемиологический над­зор - обследование труднодоступных групп населения, обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсут­ствия обследованной на антитела к ВИЧ крови, тестирование па ВИЧ (если требуется немедленное начало медикаментозной профилактики ВИЧ в случае аварийной ситуации), тестирование беременных жен­щин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде.

Иммунный блот (ИБ) - подтверждающий метод для выявления специ­фических антител к различным антигенам ВИЧ 1-го и 2-го типов.

Выявляют следующие группы антигенов: обозначение «gp» отно­сится к гликопротеидам, «р» означает белки (протеины), а цифры обозначают молекулярный вес.

Вирусные антигены ВИЧ-1:

■ структурные белки оболочки (env): gpl60, gp 120, gp41;

■ белки ядра (сердцевины) (gag): p55, p24, р17;

■ ферменты вируса (pol): р66, р51, р31.

Вирусные антигены ВИЧ-2:

■ структурные белки оболочки (env): gpl40, gp105, gp36;

■ белки ядра (сердцевины) (gag): р5б, р25, р18;

■ ферменты вируса (pol) p68.

Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпрети­руются как положительные, неопределенные и отрицательные.

Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 или 3 структурным белкам оболочки (гликопротеинам) ВИЧ.

Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антител ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ.

Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки, в ко­торых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/ или каким-либо протеинам ВИЧ.

При получении положительного результата в подтверждающем тесте (ИВ) делается заключение о наличии в исследуемом материале антител к ВИЧ. При получении отрицательного результата анализа в подтверждающем тесте (ИБ) выдается заключение об отсутствии анти­тел к ВИЧ. При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ.

Можно использовать дополнительные методы диагностики, такие как определение р24 антигена или ПЦР исследования. Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ повторное обследование на наличие антител проводится через 2 недели после получения первого неопреде­ленного результата, и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте.

Наличие неспецифической реакции не дает основания для по­становки диагноза ВИЧ-инфекции, но доноров, имеющих такой ре­зультат, от донорства необходимо отстранить.

Результаты серологических исследований используются эпиде­миологами и практическими врачами для ранней диагностики ВИЧ-инфекции, своевременного выявления источника инфекции, скорейше­го проведения противоэпидемических мероприятий и оказания помощи зараженным лицам. На основании только лабораторного анализа диа­гноз не может быть выставлен. Для вынесения диагностического заклю­чения необходимо учитывать данные эпидемиологического анамнеза, иммунологических тестов и результатов клинического обследования.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВИРУСА

ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА

Полимеразная цепная реакция - метод, позволяющий опреде­лять специфические (вирусные) нуклеиновые кислоты или их фраг­менты с высокой степенью разрешения. В основе метода лежитмногоцикловои процесс, напоминающий естественную репликацию нуклеиновой кислоты.

Метод ПЦР не заменяет существующие методы диагностики, а дополняет их.

Выявление провирусной ДНК ВИЧ свидетельствует о наличии вируса в организме человека. ПНР позволяет определять генетический материал вируса даже в начальный период заболевания. Это исследование наиболее информативно в случае вертикальной трансмиссии, когда материнские ан­титела в крови ребенка до 18 месяцев присутствуют обязательно, а также у взрослых пациентов в инкубационном периоде. Оно позволяет в более короткие сроки подтвердить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции.

Количество свободных частиц вируса, циркулирующих в крови, по­лучило название «вирусная нагрузка». Определение концентрации РНК ВИЧ в плазме крови ВИЧ-инфицированных пациентов считается одним из основных лабораторных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции. По концентрации вируса можно судить о прогнозе и риске развития СПИДа, а также об эффективности противовирусной терапии. Вирусная нагрузка 10 000-30 000 копий в 1 мл соответствует ВИЧ-инфекции в начальной стадии и при персистирующей лимфаденопатии, свыше 30 000-100 000 копий в 1 мл указывает па наличие симптомной стадии заболевания.

Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 1572 | Нарушение авторских прав