НАПРАВЛЕНИЙ ОБСЛЕДОВАНИЯ НА БИЧ
В процедурном кабинете на пробу биологического материала, предназначенную для тестирования на ВИЧ-инфекцию, оформляется сопроводительный медицинский документ-направление. Направление составляют по форме 264/у - 88 в двух экземплярах. В направлении на исследование заполняются все графы. Записи делаются четко и аккуратно, без сокращений и исправлений. Зачеркивать, вносить в направления изменения и поправки категорически запрещено.
В направлении содержатся следующие данные: название лечебно-профилактического учреждения-отправителя (обязательно наличие штампа ЛПУ), номер пробы, цель исследования, фамилия, имя, отчество, пол, возраст пациента (дата рождения), гражданство, домашний адрес, место работы (учебы), код, дата взятия крови, а также должность, фамилия, имя отчество, подпись лица, направляющего материал на исследование. В случае анонимного обследования пациента в направлении вместо фамилии, имени, отчества указывается буквенный или буквенно-цифровой шифр. Направления помещают в полиэтиленовые пакеты и доставляют в лабораторию вместе с образцами крови.
ПРАВИЛА ЗАБОРА, ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ
БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ
НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ
Направившее ЛПУ
(штамп учреждения)
НАПРАВЛЕНИЕ
на исследование образца крови на антитела к ВИЧ
№ пробы
|
| Фамилия, имя, отчество (полностью)
|
| Пол
|
| Дата рождения
|
| Гражданство
|
| Код
|
| Домашний адрес
|
| Место работы
|
| Дата забора крови
|
| Должность, фамилия, имя, отчество, подпись лица, направляющего материал
Фамилия, имя, отчество, подпись медицинской сестры, забиравшей кровь.
Для серологического обследования на антитела к ВИЧ используется венозная кровь. Кровь в количестве 3-5 миллилитров забирают из локтевой вены (или любой другой вены - запястья, тыла ладони и т.д.). У новорожденных кровь берется из пупочной, височной, яремной вен.
Для забора используют одноразовые шприцы с иглами и стеклянные пробирки или одноразовые вакуумные системы. Стеклянные пробирки с венозной кровью сразу после взятия герметизируют резиновыми пробками. Отобранный биологический материал маркируется. На пробу оформляется сопроводительный медицинский документ - направление.
Если доставка проб крови в лабораторию в течение рабочего дня невозможна, полученный материал (цельную кровь) следует хранить не более 1 суток в холодильнике при +4-8°С.
Если проба не может быть доставлена в лабораторию в течение суток с момента забора, необходимо отделить сыворотку от сгустка. Кровь отстаивают при комнатной температуре (+18-22°С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. Затем пробирки центрифугируют. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер. Сыворотка отбирается одноканальной пипеткой с использованием одноразовых наконечников или одноразовыми индивидуальными шприцами. В крайнем случае используются индивидуальные пипетки, прошедшие дезинфекцию, предстерилизационную обработку и контроль предстерилизационной обработки. Проба может храниться при температуре +4-8°С до 7 дней, в замороженном виде - несколько лет.
Для транспортировки проб биологического материала в лабораторию используют термоконтейнеры. Пробы в лабораторию доставляет персонал, прошедший инструктаж, назначенный ответственным за транспортировку приказом по лечебно-профилактическому учреждению. Не допускается доставка в лабораторию проб биологического материала с гемолизом, хилезом, бактериальным проростом, хранившихся дольше установленных сроков.
У пациентов с установленным диагнозом «ВИЧ-инфекция» в процессе диспансерного наблюдения определяют концентрацию РНК ВИЧ в плазме крови (вирусную нагрузку) и проводят исследование иммунного статуса (мониторинг количества СБ4-лимфоцитов).
ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И
ТРАНСПОРТИРОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВИЧ
МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
Для проведения исследования по определению ДНК провируса ВИЧ (качественный тест ПЦР) используют кровь с антикоагулянтом К 3 ЭДТА. В исследовании по определению вирусной нагрузки ВИЧ может быть использована только плазма.
Взятие крови производится из локтевой вены в вакуумную пробирку (вакутейнер), содержащую антикоагулянт К3ЭДТА.После забора пробирка с кровью перемешивается переворачиванием 3-4 раза.
Пробирку маркируют с указанием номера пробы, фамилии обследуемого или эпидемиологического номера ВИЧ-инфицированного пациента. Дату и время забора крови указывать обязательно. Пробирки с кровью перед доставкой в лабораторию хранят при температуре +2-80С.
Биологический материал для определения ДНК провируса ВИЧ доставляется в лабораторию не позднее 24 часов с момента взятия крови. Для определения РНК ВИЧ (вирусной нагрузки) биоматериал должен быть доставлен в лабораторию в течение 6 часов с момента взятия крови.
Плазма крови должна быть отобрана не позднее б часов после забора крови. Для этого пробирку с кровью необходимо центрифугировать при 3000 оборотов в минуту в течение 20 минут. Затем отобрать плазму в количестве не менее 1 мл (отдельным наконечником с аэрозольным барьером) в одноразовую стерильную пробирку объемом 1,5-2 мл. Микропробирка с плазмой маркируется аналогично пробирке с кровью и хранится при температуре +2-8°С в течение 5 суток, при температуре -70°С - длительно.
Пробы биоматериала в лабораторию доставляет персонал, прошедший инструктаж, назначенный ответственным за транспортировку приказом по лечебно-профилактическому учреждению.
Транспортирование пробирок с кровью и микропробирок с плазмой осуществляют в специальном термоконтейнере с охлаждающим элементом, или в термосе со льдом при температуре +2-8°С.
ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И
ТРАНСПОРТИРОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО
СТАТУСА (ДЛЯ ПРОТОЧНОГО ПИТОМЕТРА)
Необходимо, чтобы образцы крови были правильно взяты и вовремя доставлены в лабораторию. Нарушения, допущенные на этом этапе, могут повлиять на результат исследования и его дальнейшую интерпретацию.
Забор крови необходимо осуществлять утром натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти не менее 12 часов). В день накануне взятия крови пациенту лучше воздержаться от употребления алкоголя, большого количества пищи, в особенности жирной, а также от чрезмерной физической нагрузки.
Забор крови необходимо осуществлять в положении пациента сидя или лежа. Жгут следует снять сразу же после попадания иглы в вену. Длительность наложения жгута не должна превышать 1 минуты. Взятие крови должно осуществляться до проведения диагностических и лечебных процедур. Необходимо не менее 4 мл крови. При проведении пациенту внутривенных вливаний, пункцию вены для взятия крови необходимо осуществлять па другой руке. При взятии пробы из артериальных или венозных катетеров, канюлю следует промыть изотоническим солевым раствором (физиологическим раствором), первые 5 мл крови следует выбросить, а затем взять пробу.
Кровь собирается в вакуумную пробирку, содержащую антикоагулянт. В качестве антикоагулянта лучше всего использовать K33DTA (1,5 +/- 0,15 мг на мл крови). Во избежание образования сгустков необходимо хорошо перемешивать кровь с антикоагулянтом. Перемешивание осуществляется путем переворачивания пробирки не менее 8 раз. Применение миксеров и встряхивание пробирок недопустимо, так как это приводит к гемолизу и получению неверных результатов. Необходимо соблюдать правильное соотношение крови и ант и коагулянта. Недостаточное количество крови или переполнение пробирки может привести к искажению результатов иммунофенотипирования.
На пробирке с образцом должны быть указаны идентифицирующие данные пациента и точное время забора крови. В сопроводительных документах должны быть указаны фамилия, имя и отчество пациента, возраст, пол, дата и время забора крови.
После забора пробирки с кровью хранят при температуре +18-25°С. Следует избегать замораживания или перегревания образцов, так как нарушение температурного режима может повлиять на результаты иммунофенотипирования. Образцы крови должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее, но не позднее 48 часов после взятия крови.
Транспортировку проб в лабораторию осуществляют в термоконтейнере (в штативе, в вертикальном положении) при комнатной температуре (+18-25°С), не допуская охлаждения ниже +18°С и перегрева выше +25°С. На контейнере должна быть маркировка «Не переворачивать, не встряхивать!».
Пробы биоматериала в лабораторию доставляет персонал, прошедший инструктаж, назначенный ответственным за транспортировку приказом по лечебно-профилактическому учреждению.
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используются различные методы обнаружения культуры ВИЧ, антител, антигенов и генного материала ВИЧ. Все эти методы обладают различной эффективностью, требуют различного оборудования и разного уровня подготовки.
Выделение и идентификация культуры ВИЧ является достоверным признаком инфицирования ВИЧ. Однако этот метод малодоступен, требует длительного времени, высокой квалификации исполнителей, специального оборудования. Кроме того, он достаточно дорог. Поэтому выделение вируса и его идентификация проводится только в научных целях или в исключительно сложных случаях.
Основные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции включают выявление вирусных антигенов и антител к ВИЧ. Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа. Этот метод очень надежен, его чувствительность составляет более 99,5%. Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело.
Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3-х месяцев после инфицирования, у 5-9% - через б месяцев и у 0,5-1% в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител - 2 недели с момента заражения. Скрытый период, «период окна», можно сократить на несколько дней, используя тесты для выявления антигена.
Иммуноферментные тесты, одновременно выявляющие как антиген, так и антитела, имеют высокую чувствительность и выявляют лиц как уже с выраженной инфекцией, так и лиц на ранних стадиях ВИЧ-инфекции.
Применение метода полимеразной цепной реакции для определения провирусной ДНК вируса еще на несколько дней сокращает «период окна». Поэтому «период окна» может иметь продолжительность 2-3 недели, если использовать всестороннюю стратегию выявления ВИЧ.
Хотя тесты, используемые для скрининга, являются чувствительными, у них отсутствует достаточная степень специфичности. Причинами ложноположительного результата ИФА могут быть наличие в сыворотке антител к аутоантигенам, болезни печени, онкозаболевания и так далее. Поэтому сыворотки, дающие воспроизводимо положительный результат в ходе скрининга, должны быть проверены с использованием подтверждающего метода (иммунный блот-Western blot).
Быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ - это тесты, которые можно выполнить менее чем за 30 минут. При правильном исполнении быстрые тесты на антитела к ВИЧ являются точными и имеют широкое применение в целом ряде ситуаций. Области их применения: трансплантология, эпидемиологический надзор - обследование труднодоступных групп населения, обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия обследованной на антитела к ВИЧ крови, тестирование па ВИЧ (если требуется немедленное начало медикаментозной профилактики ВИЧ в случае аварийной ситуации), тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде.
Иммунный блот (ИБ) - подтверждающий метод для выявления специфических антител к различным антигенам ВИЧ 1-го и 2-го типов.
Выявляют следующие группы антигенов: обозначение «gp» относится к гликопротеидам, «р» означает белки (протеины), а цифры обозначают молекулярный вес.
Вирусные антигены ВИЧ-1:
■ структурные белки оболочки (env): gpl60, gp 120, gp41;
■ белки ядра (сердцевины) (gag): p55, p24, р17;
■ ферменты вируса (pol): р66, р51, р31.
Вирусные антигены ВИЧ-2:
■ структурные белки оболочки (env): gpl40, gp105, gp36;
■ белки ядра (сердцевины) (gag): р5б, р25, р18;
■ ферменты вируса (pol) p68.
Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные.
Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 или 3 структурным белкам оболочки (гликопротеинам) ВИЧ.
Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антител ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ.
Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/ или каким-либо протеинам ВИЧ.
При получении положительного результата в подтверждающем тесте (ИВ) делается заключение о наличии в исследуемом материале антител к ВИЧ. При получении отрицательного результата анализа в подтверждающем тесте (ИБ) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ.
Можно использовать дополнительные методы диагностики, такие как определение р24 антигена или ПЦР исследования. Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ повторное обследование на наличие антител проводится через 2 недели после получения первого неопределенного результата, и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте.
Наличие неспецифической реакции не дает основания для постановки диагноза ВИЧ-инфекции, но доноров, имеющих такой результат, от донорства необходимо отстранить.
Результаты серологических исследований используются эпидемиологами и практическими врачами для ранней диагностики ВИЧ-инфекции, своевременного выявления источника инфекции, скорейшего проведения противоэпидемических мероприятий и оказания помощи зараженным лицам. На основании только лабораторного анализа диагноз не может быть выставлен. Для вынесения диагностического заключения необходимо учитывать данные эпидемиологического анамнеза, иммунологических тестов и результатов клинического обследования.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВИРУСА
ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА
Полимеразная цепная реакция - метод, позволяющий определять специфические (вирусные) нуклеиновые кислоты или их фрагменты с высокой степенью разрешения. В основе метода лежитмногоцикловои процесс, напоминающий естественную репликацию нуклеиновой кислоты.
Метод ПЦР не заменяет существующие методы диагностики, а дополняет их.
Выявление провирусной ДНК ВИЧ свидетельствует о наличии вируса в организме человека. ПНР позволяет определять генетический материал вируса даже в начальный период заболевания. Это исследование наиболее информативно в случае вертикальной трансмиссии, когда материнские антитела в крови ребенка до 18 месяцев присутствуют обязательно, а также у взрослых пациентов в инкубационном периоде. Оно позволяет в более короткие сроки подтвердить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции.
Количество свободных частиц вируса, циркулирующих в крови, получило название «вирусная нагрузка». Определение концентрации РНК ВИЧ в плазме крови ВИЧ-инфицированных пациентов считается одним из основных лабораторных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции. По концентрации вируса можно судить о прогнозе и риске развития СПИДа, а также об эффективности противовирусной терапии. Вирусная нагрузка 10 000-30 000 копий в 1 мл соответствует ВИЧ-инфекции в начальной стадии и при персистирующей лимфаденопатии, свыше 30 000-100 000 копий в 1 мл указывает па наличие симптомной стадии заболевания.
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 1564 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 |
|