АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Материале

Цель занятия: Освоить методы определение сапонинов в растениях и кормах.

Качественная проба. Гемолитическая проба. Проба основана на гемолизе эритроцитов.

Реактивы:

1 Физиологический раствор хлористого натрия: 9 г хлористого натрия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды.

2 5%-ная взвесь эритроцитов.

Кровь берут из яремной вены любого животного в стеклянный стаканчик, дефибринируют ее круговым помешиванием деревянной палочкой в течение 10-15 минут. Фибрин с палочкой удаляют, а плазму с эритроцитами с дефибринированной крови фильтруют через 2 слоя марли. Фильтрат смешивают с 2-3 объемами физиологического раствора поваренной соли и производят центрифугирование в течение 8-10 минут. Во время центрифугирования эритроциты оседают на дно пробирки, а сверху остается слегка окрашенная в розовый цвет жидкость. Затем прозрачную розовую жидкость осторожно отсасывают, стараясь не задевать слоя эритроцитов, после чего к нему доливают до первоначального уровня физиологический раствор поваренной соли и снова центрифугируют. Если после второго промывания жидкость над эритроцитами стала бесцветной и прозрачной, то на этом заканчивают промывку эритроцитов, в противном случае промывку повторяют третий раз. Затем берут 0,5 осадка отмытых эритроцитов и к ним добавляют 9,5 мл физиологического раствора.

Исследование материала проводят следующим образом. В колбочку помещают 1 г измельченного сена или муки, или отрубей и добавляют 10 мл физиологического раствора поваренной соли, измельченное сегно ставят на 10 минут в кипящую водяную баню, а муку или отруби экстрагируют 15 минут при комнатной температуре, периодически встряхивая. После этого фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат в количестве 2 мл помещают в пробирку. Такое же количество физиологического раствора хлористого натрия наливают в другую пробирку. Затем добавляют по 0,5 мл 5%-ной Взвесм эритроцитов в обе пробирки, встряхивают и оставляют их в штативе. Через 5-10 минут учитывают результат. При наличии сапонинов в исследуемом извлечении наступает гемолиз эритроцитов, тогда как в контрольной пробирке гемолиза не бедет.

Контрольные вопросы:

1 Приготовление 5%-ной взвеси эритроцитов?

2 Исследование патматериала на сапонины?

Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 784 | Нарушение авторских прав