 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Тема: Определение кельта в органах и тканях животныхЦель занятия: Изучить методы определение кельта в плазме крови, мясе, внутренних органах и кале.
Принцип метода. Метод, основан на извлечении кельтана из биологических объектов гексаном: очистке экстракта из кала через слой сернокислого натрия, а из мышц и внутренних органов – через слой силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографии) с последующей элюацией смесью бензола с гексаном; концентрации экстракта и разделении его методом хроматографии в тонком слое, проявлении раствором аммиаката серебра в ацетоне с последующим ультрафиолетовым облучением. Количественное определение проводится путем измерения площадей пятен проб и стандартных растворов. Определение в плазме крови. В центрифужную пробиркус 1-2 каплями гепарина берут 6-8 мл крови и центрифугируют 10-15 мин при 8 тыс. об/мин 3-5 мл полученной плазмы подкисляют 0,1 N раствором соляной кислоты до рН 5-6, перемешивают с 2-3 мл гексана в течение 3-5 мин (избегать образования эмульсии). Гексановый слой отстаивают и отсасывают пипеткой со шприцем. Экстракцию повторяют второй раз, объединенный экстракт упаривают в токе воздуха до малого объема. Определение мяса, внутренних органов. 10 мг мяса, 5 г печени, почек тщательно измельчают ножницами, растирают в ступке с кварцевым песком, заливают дистиллированной водой, подкисленной 0,1 N раствором соляной кислоты до рН 5-6 (1:10). Смесь выдерживают 8-12 часов при комнатной температуре, периодически встряхивая. В делительной воронке смесь тщательно перемешивают 3-5 минут (не встряхивая). Гексановый слой отделяют, экстракцию повторяют второй раз. После этого объединенный экстракт фильтруют через воронку, в нижней части которой уложена вата (не более 50 мг), насыпан слой 3-4 см силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографии). Перед употреблением воронку промывают 20 мл гексана. Из воронки кельтан элюируют смесью бензола с гексаном (3:1) два раза порциями по 20 мл. Элюат упаривают в токе воздуха до малого объема или досуха. Определение в кале. 0,1 г кала заливают 15-20 мл гексана, интенсивно 1-2 минуты встряхивают и оставляют на 30 минут при периодическом помешивании. Экстракт фильтруют через бумажный складчатый фильтр, смоченный гексаном. После этого пропускают через воронку, в нижней части которой вата (не более 50 мг), сверху насыпан слой 2-3 безводного сернокислого натрия. Воронку перед употреблением промывают 20 мл гексана. Экстракт упаривают в токе воздуха до малого объема. В упаренном до малого объема экстракте из плазмы крови, мышечной ткани, внутренних органов, кала кельтан определяют методом хроматографии в тонком слое. Для этого пятна испытуемой пробы, полученной на хроматографической пластинке сравнивают со стандартным раствором препарата (10 мг кельтана хч растворяют в 100 мл гексана). В качестве подвижного растворителя используют смесь гексана с ацетоном (1:6).Реактив для проведения пятен пестицида готовят в день употребления по прописи: 0,1г азотнокислого серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном. К готовому реактиву прибавляют 2 мл раствора аммиака (уд вес 0,9). После проявления пластинки подвергают действию ультрафиолетовых лучей в течение 10-15 минут. Rf кельтана при гексано-ацетоновом подвижном растворителе равен 0,4. Контрольные вопросы: 1 Определение кельта в плазме крови и в кале? 2 Определение кельта в мясе и внутренних органах? Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 1090 | Нарушение авторских прав |