 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Методы определения сапонинов в растениях и кормахКачественная проба. Гемолитическая проба. Проба основана на гемолизе эритроцитов. Реактивы. 1 Физиологический раствор хлористого натрия: 9 г хлористого натрия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. 2 5%-ная взвесь эритроцитов. Кровь берут из яремной вены любого животного в стеклянный стаканчик, дефибринируют ее круговым помешиванием деревянной палочкой в течение 10—^минут. Фибрин с палочкой удаляют, а плазму с эритроцитами дефибринированной крови фильтруют через 2 слоя марли. Фильтрат смешивают с 2—3 объемами физиологического раствора поваренной соли и производят центрифугирование в течение 8—10 минут. Во время центрифугирования эритроциты оседают на дно пробирки, а сверху остается слегка окрашенная в розовый цвет жидкость. Затем прозрачную розовую жидкость осторожно отсасывают, стараясь не задевать слоя эритроцитов, после чего к нему доливают до первоначального уровня физиологический раствор поваренной соли и снова центрифугируют. Если после второго промывания жидкость над эритроцитами стала бесцветной и прозрачной, то на этом заканчивают промывку эритроцитов, в противном случае промывку повторяют третий раз. Затем берут 0,5 мл осадка отмытых эритроцитов и к ним добавляют 9,5 мл физиологического раствора. Исследование материала проводят следующим образом. В колбочку помещают 1 г измельченного, сена или муки, или отрубей и добавляют 10 мл физиологического раствора поваренной соли, измельченное сено ставят на 10 минут в кипящую водяную баню (при частом помешивании), а муку или отруби экстрагируют 15 минут при комнатной температуре, периодически встряхивая. После этого фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат в количестве 2 мл помещают в пробирку. Такое же количество физиологического раствора хлористого натрия наливают в другую пробирку. Затем добавляют по 0,5 мл 5%-ной взвеси эритроцитов в обе пробирки, встряхивают и оставляют их в штативе. Через 5—10 минут учитывают результат. При наличии сапонинов в исследуемом извлечении (первая пробирка) наступит гемолиз эритроцитов, тогда как в контрольной (второй) пробирке гемолиза не будет
Контрольные вопросы: 1 Приготовления 5%-ой взвеси эритроцитов? 2 Определение сапонинов качественной пробой? Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 826 | Нарушение авторских прав |