АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема: Определение гликозидов и сапонинов

Цель занятия: Ознакомить студентов с методами качественного обнаружения гликозидов и сапонинов в кормах и патматериале.

Материальное обеспечение: Пробы кормов, содержимое желудка кролика предварительно отравленного листьями наперстянки, необходимый набор реактивов и посуды.

Извлечение гликозидов из растений. 100-200 г измельченного материала помещают в колбу, заливают 96 °С спиртом и подкисляют спиртовым раствором винно-каменной кислоты. Содержимое колбы сбалтывают и через час проверяют её реакцию лакмусовой бумажкой. При щелочной реакции в жидкость добавляют ещё раствор винно-каменной кислоты и через час снова проверяют реакцию. Если реакция кислая, то колбу закрывают ватной пробкой и оставляют на сутки при температуре 25-30 °С время от времени взбалтывая содержимое. Проверяют вытяжку на наличие кислой реакции и осторожно сливают, оставшийся в колбе материал снова заливают спиртом и оставляют на вторые сутки. Спиртовые вытяжки объединяют и фильтруют. Остаток пробы переносят из колбы на фильтр и дважды промывают спиртом, который присоединяют к вытяжкам. Полученную вытяжку выпаривают в фарфоровой чашке на водяной бане при температуре 40°С до состояния жидкого сиропа.

К упаренной вытяжке для осаждения белков приливают по каплям, при помешивании, этиловый спирт (96°) до прекращения образования осадка. После отстаивания жидкость фильтруют и выпаривают до густы жидкого сиропа. Осаждение белков проводят до тех пор, пока прибавление спирта не будет давать мути. После этого жидкость упаривают до полного удаления спирта, а осадок растворяют в 50 мл воды. Если раствор получается мутным, его фильтруют. Для группового обнаружения гликозидов используют следующие реакции:

1 Реакция с фелинговой жидкостью. Испытуемый раствор кипятят с какой-либо оразведенной кислотой (серной или соляной) и фильтруют. К фильтрату добавляют фелинговую жидкость. При наличии гликозидов в растворе фильтрат восстанавливает фелинговую жидкость, так как происходящий при кипячении с кислотой гидролиз приводит к образованию глюкозы или иного сахара, обладающих восстановительными свойствами.

Фелинговая жидкость, представляющая собой смесь растворов медного купороса, сегнетовой соли и едкой щелочи, имеет синий цвет; при восстановлении же ее синий цвет исчезает и при этом появляется желтый осасдок гидрата закиси меди, который при нагревании становится красным.

2 Реакция с бычьей желчью. Растворяют в 1 мл воды в пробирке немного бычьей желчи, прибавляет равный объем концентрированной серной кислоты и осторожно наслаивают на эту смесьиспытуемый раствор. При наличии гликозидов в месте соприкосновения жидкостей образуется кроваво-красное кольцо, а при взбалтывании вся жидкость становится красной.

3 Биологическая проба. Берут обездвиженную лягушку, прикалывают ее к доске и обнажают сердце. Подсчитывают количество сердечных сокращений за минуту, а затем в область лимфатического мешка вводят 0,5-1 мл исследуемого отвара или настоя. Наблюдение ведут в течение часа периодический подсчитывая сердечные сокращения. При наличии гликозидов наблюдают урежение сердечных сокращений с последующей остановкой сердца в стадии систолы.

Обнаружение сапонинов. Сапонины извлекают из растений горячим спиртом (метиловым), из которого они выпадают при охлаждении в виде белого порошка.

1 Концентрированная серная кислота окрашивает их в красный цвет. Для них характерна так называемая дегиталиновая проба, которая заключается в том, что при нагревании со смесью равных объемов концентрированной серной кислоты и спирта и прибавлении одной капли раствора сернорй закиси железа сапонины дают сине-зеленое окрашивание.

2 Реакция пенообразования. Исследуемый материал в еоличестве 1-2 мл помещают в пробирку, приливают 5 мл воды и сильно встрахивают. Образование большой устойчивой пены указывает на присутствие сапонинов.

3 Гемолитическая проба. Готовят 5%-ую взвесь эритроцитов.

Берут две пробирки, в одну помещают 2 мл фильтрата, а в другую – 2 мл физиологического раствора. В обе пробирки добавляют по 0,5 мл 5%-ую взвесь эритроцитов. Встряхивают и оставляют на 5 –10 минут. При наличии сапонины в пробирке с фильтратом наступает гемолиз, а в контрольной пробирке изменений не наблюдается.

Контрольные вопросы:

1 Назовите гликозидо- и сапониноносные растения?

2 В какую стадию вегетации наиболее опасны гликозидо- и

сапониноносные растения?

3 Как влияют условия заготовки корма на содержание гликозидов и сапо

нинов?

4 Какая должна быть помощь при подозрении на отравлении гликозидами и сапонинами?

5 Назовите экспресс-методы по обнаружению гликозидов и сапонинов в кор-

мах?

Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 1667 | Нарушение авторских прав