АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема: Токсикологический анализ при отравлениях алкалоидами

Цель занятия: Изучить методы определения алкалоидов.

Методы определения алкалоидов. Исследование на ал­калоиды основано на реакции осаждения их и образо­вании солей алкалоидов с кислотами. Некоторые алка­лоиды образуют осадки, растворимые в избытке реак­тива. Для выделения алкалоидов из растений и патоло­гического материала пользуются растворимостью кислых и виннокислых солей алкалоидов в 90° спирте, подкис­ленном винной кислотой.

Реактивы: 1 5%-ный водный раствор танина.

2 1%-ный водный раствор пикриновой кислоты.

3 5%-нын водный раствор сулемы (HgCb).

4 Раствор Люголя.

5 Реактив Мейера.

6 Реактив Драгендорфа.

7 Реактив Фреде.

8 Реактив Марки.

9 Реактив Менделина.

10 Реактив Эрдмана

Извлечение алкалоидов. В колбу помещают 10 г су­хих растений, превращенных в мелкий порошок, и сме­шивают с 1%-ным раствором уксусной кислоты (можно с, 1%-ным раствором винной или щавелевой и другими слабыми кислотами). Смешивание производят из рас­чета 1: 10, т. е. одна часть растения и 10 частей кис­лоты. Колбу помещают в кипящую водяную баню и на­гревают до кипения, периодически 'взбалтывая. После водяной бани охлаждают, взбалтывая в течение 15 ми­нут, фильтруют через складчатый фильтр. В полученном фильтрате определяют наличие алкалоидов следующим образом.

На часовое стекло наносят каплю фильтрата и рядом каплю (меньшую по размеру) реактива на алкалоиды. Капли смешивают стеклянной палочкой. Для этой цели требуются 3—4 реактива, так как многие алкалоиды по-разному относятся к алкалоидным реактивам. Поэтому берут несколько часовых стекол, т. е. столько, сколько имеется реактивов. При наличии алкалоидов на часовом стекле после смешивания фильтрата с реактивом обра зуется осадок или муть разной окраски и консистенции. При отсутствии осадка или мути, что имеет значение как фактор, исключающий наличие алкалоидов, смесь реактива с извлечением остается прозрачной.

Определение алкалоидов при помощи индикаторной бумаги (по В. М. Серову). Метод основан на окрашивании индикаторной бумаги при на­личии алкалоидов.

Реактивы. 1 2%-ный водный раствор йодида калия.

2 10%-ный водный раствор платннохлористоводородой ки-

слоты.

3 Полоски хроматографической или фильтровальной бумаги, размером 3X7 см, пропитанные до половины смесью реактивов № 1 и № 2. Пропитывание производят смесью растворов: 1 мл йодида калия + 0,1 мл раствора платинохлористоводородной кислоты. Смесь платинохлористоводородной кислоты с йодидом калия нестойка, тогда как пропитанная и высушенная хроматографическая бумага сохраняет свою активность в течение месяца в склянке из темного стекла.

При исследовании окрашенную часть полоски инди­каторной бумаги разделяют простым карандашом на че­тыре равные части: на первой части пишут цифру 1, на второй —3 и далее 5 и 15. Указанные цифры соответ­ствуют количеству капель исследуемой вытяжки, нано­симой на указанный участок. На чистом конце хромато­графической бумаги пишут номер экспертизы, дату и объект исследования. Исследуемую вытяжку каплями с интервалами во времени (очередная капля наносится после испарения предыдущей) наносят на определенный участок индикаторной бумаги. При наличии алкалоидов на красном фоне индикаторной бумаги появляются цвет­ные пятна. Если содержание алкалоидов велико, то цвет­ИИ пятно появляется после нанесения первой капли исследуемой хлороформенной вытяжки.

При сомнительных данных индикаторную бумагу сле­дует отмывать дистиллированной водой в течение 2— 5 минут. Если алкалоид образовал красное пятно, кото­рое было слабо видно на общем красном фоне, то крас­ный цвет индикаторной бумаги исчезнет, а окрашенное красное пятно йодплатината алкалоида останется на бе­лом фоне индикаторной бумаги. Чувствительность этого метода в пределах 1: 10 000—1: 100 000.

Идентификация алкалоидов методом хроматографии. Метод хроматографии основан на различии коэффициентов распределения исследуемых веществ между двумя несмешивающимися жидкими фа­зами. Неподвижной фазой является вода ИИвляяафии ческой бумаги, а для подвижной фазы применяется Н-бутиловый спирт. Вместо Н-бутилового спирта можно применять пропиловый спирт, толуол, ацетон, бензол.

Реактивы. 1 Полоски.хроматографической или фильтроваль­ной бумаги размером 20X40 см.

2 Н-бутиловый спирт: 40 мл спирта + 60 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты или 100 мл спирта + 50 мл 20%-ного раствора ледяной уксус ной кислоты.

3 Реактив Драгендорфа; приготовляют два раствора: раствор А — 0,85 г основного нитрата висмута растворяют в 50 мл 25%-ного раствора уксусной кислоты; раствор Б —8 г йодистого калия растворяют в 20 мл дистиллированной воды.

Рабочий раствор готовят перед употреблением, для этого берут 120 мл 25%-ного раствора уксусной кислоты и в него добавляют 5 мл раствора А и 5 мл раствора Б.

Исследование проводят следующим образом. Хлоро форменной вытяжке, давшей положительную групповую реакцию на алкалоиды по индикаторной бумаге (стр. 182), -дают самоиспариться до густоты сиропа. Затем при по­мощи микропипетки 0,02 мл сиропа наносят на хрома-тографическую бумагу и оставляют до полного высыха­ния. Линия нанесения исследуемой вытяжки должна быть с интервалами 2—2,5 см, от нижнего края хромато­графической бумаги — на расстоянии 5—6 см и от боко­вого края —2 см. Как только исследуемый раствор вы­сохнет, хроматографическую бумагу помещают в сосуд вертикально, так, чтобы нижний край ее касался реак­тива № 2, который предварительно помещен в этот со­суд. Образовавшиеся пятна на бумаге после высыхания исследуемой вытяжки должны находиться от уровня ре­актива № 2 на расстоянии 3 см.

После закрепления хроматографической бумаги в со­суде реактив № 2 начнет подниматься по ней вверх, увлекая за собой соли алкалоидов. Скорость продвиже­ния солей алкалоидов по хроматографической бумаге различна, в результате чего происходит перераспределе­ние алкалоидов. Как только линия продвижения реак­тива № 2 достигнет высоты 30—40 см (для чего потре­буется от 12 до 48 часов), каждый алкалоид будет зани­мать подходящую для данного исследования высоту на хроматографической бумаге. После этого хроматографи­ческую бумагу извлекают из сосуда, отмечают простым карандашом линию, которой достиг реактив № 2, и вы­сушивают в потоке горячего воздуха. Высушенную бу­магу предварительно исследуют в ультрафиолетовых лучах, выдерживают в парах йода или обрабатывают реактивом № 3. При этом пятна различной окраски (красные, оранжевые, бледно-оранжевые и др.), образо­вавшиеся на бумаге, обводят простым карандашом и сравнивают с хроматограммами, полученными в анало­гичных условиях из ядовитых растений. Сравнение пятен производят с учетом окраски и места нахождения их на бумаге (расстояние от нижней границы реактива № 2). При сравнении делают заключение о наличии того или иного алкалоида.

Определение никотина биологическим методом. Лягушке вводят под кожу препарат нико­тина (яд различных видов табака), помещают се под стеклянный колпак и наблюдают постепенное развитие угнетения центральной нервной системы, которое обус­ловливает лягушке характерное (никотинное) положение. При сидячем положении передние ноги прижаты к жи­воту, в то же время задние конечности располагаются под прямым углом к позвоночнику, голени судорожно по­догнуты к бедрам. Если голени оттянуть, они вновь при­мут прежнее положение. При этом наблюдается ригид­ность передних лап.

Контрольные вопросы:

1 Извлечение алкалоидов?

2 Определение алкалоидов при помощи индикаторной бумаги?

3 Идентификация алкалоидов методом хроматографии?

4 Определение алкалоидов никотина биологическим методом?

Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 1622 | Нарушение авторских прав