АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тема: Определение хлорорганических соединений в воде, кормах и биологических объектах, методом тонкослойной хроматографии

Цель занятия: Ознакомить студентов с методами отбора проб, экстракцией, очистки и методом хроматографии в тонком слое.

Материальное обеспечение: Исследуемый пробы на ХОС, необходимые реактивы и посуды, хроматографические пластинки, пипетки, шприцы для нанесения на пластинку растворов, ртутно-кварцевая лампа.

Отбор проб. Из средней пробы отбирают: овощей, грибов, зерна, творога-500гр, сыра – 100 гр, мяса, рыбы 2520гр, масла сливочного, сливок 200гр, травы 200 гр, сухих грибов, сена 50 гр, вина, воды, молока 500 мл. Масло растапливают, овщи, фрукты и т.п. измельчают, тщательно перемешивают и анализируют навеску.

Экстракция препарата из пробы и очистки экстрактов. Вода, пробы воды и вина отбирают только в стеклянную посуду 200 мл пробы в колбе с притертой пробкой трижды экстрагируют в течение 15 минут на приборе для встряхивания гексаном или петролейным эфиром по 30 мл или диэтиловым эфиром порциями по 40-50 мл. Экстракты объединяют. Насыпают в экстракт: безводного натрия сульфата (около 10г) и оставляют на 15-20 минут для удаления влаги. Экстракт переносят в прибор для отгонки растворителей и доводят обьем до 0,1 мл.

Овощи, фрукты. 50 г измельченной пробы трижды экстрагируют в течение 15 минут по 30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракты объединяют, сушат и отгоняют до обьема 0,1.

Зерно. 10 г зерна размельчают, заливают гексаном или петролейным эфиром по 30 мл и ставят на 15 минут для встряхивания. Экстракты объединяют, прибавляют 10 мл насышенного раствора безводного натрия сульфата в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку пока кислота не станет бесцветной. Экстракт сушат и отгоняют до 0,1 мл.

Трава и сено. 10г травы или 5 г сена измельчают, заливают 50 мл ацетона, встряхивают в течение 2-3 минут, прибавляют охлажденной до 0 петролейного эфира дистиллированной воды и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Экстракт сливают и фильтруют, экстракцию повторяют. Ацетоно-водные вытяжки объединяют, отгоняют ацетон, а из водного слоя экстрагируют препарат гексаном илипетролейным эфиром порциями по 10 мл 2 раза в течение 10 минут. Очистку экстракта проводят также как и в случае с зерном.

Рыба и мясо. Мясо пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи и внутренних органов и измельчают. 25 г пробы заливают 40 мл гексана, взбалтывают 2 минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты объединяют в делительной воронке, сушат насыщенным раствором натрия сульфата в серной кислоте, отделяют органическийслой и отгоняют до обьема 0,1 мл.

Молоко. К 50 мл молока прибавляют концентрированную серную кислоту до полного почернения пробы. После охлаждения до 10-15°С переносят исследуемый раствор в делительную воронку и экстрагируют гексаном 2 раза по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты и оставляют на 30 минут, для полного разделения слоев. В случае образования эмульсии прибавляют 1-2 мл спирта. Экстракты объединяют в делительной воронке, прибавляют 10мл концентрированной серной кислоты, насыщенной безводным натрия сульфатом, встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и очистку повторяют пока кислота не будет бесцветной, сушат очищенный экстракт над серно-кислым натрием и отгоняют до небольшого объема.

Кровь, желчь, моча. 0,2-2 мл цельной крови, 2-4 мл желчи, 10-20 мл мочи помещают в пробирку с притертой пробкой и экстрагируют 3 раза порциями по 5-10 мл диэтилового эфира в течение 15 минут. Экстракт декантируют. Объединяют все порции, сушат и отгоняют растворитель до небольшого объема.

Кал. 5 г кала в колбе заливают концентрированной серной кислотой, насышенной безводным натрия сульфатом. Перемешивают и приливают 20 мл гексана, встряхивают 2 минуты и оставляют на 30 минут, периодически перемешивая. Экстракцию повторяют 2 раза. Объединенные экстракты очищают, сушат и отгоняют до 0,1 мл.

Хроматография. На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от нижнего края при помощи медицинского шприца или градуированной пипетки наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Колбачку экстрактом 3 раза смывают небольшими порциями (0,2 мл) деиэтилового эфира, которые затем также наносят на пластинку в центре пятна. С права и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартный растворы исследуемых препаратов, содержащих 1,5 или 10 мкг препарата.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой налит гексан за 30 минут до начало хроматографирования. Край пластинки с нанесенными растворами помещают в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.

После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку опрыскивают из пульверизатора проявляющим раствором и облучают ртутно - кварцевой лампой в течение 10-15 минут на расстоянии 20см от источника света. При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение производят путем сравнивания размеров пятна и стандарта визуально, либо путем измерения площадей. Расчет результатов анализа производят по формуле:

где Х- содержимое препарата в пробе, в мг/кг или мг/мл;

А- количество препарата, найденное путем визуального сравнивания со стандартным раствором, в мкг;

В- навеска исследуемой пробы в г или мл;

- содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

- площадь пятна стандартного раствора, в мм;

- площадь пятна пробы, мм;

В том случае, когда известно, какой из хлорорганических препаратов находится в пробе, параллельно с анализируемой пробой наносят стандартный раствор ДДТ. После проявления расcсчитывают величину Rf и Rc.

Rf- это отношение расстояния от точки нанесения пробы до центра пятна от точки нанесения пробы до линии фронта растворителя.

Rc- это отношение Rf неизвестного препарата к Rf ДДТ. По величине Rf и Rc идентифицируют исследуемое вещество.

Контрольные вопросы:

1 Назовите основные пути поступления ХОС в организм животных?

2 Какова персистентность ХОС во внешней среде?

3 Какие органы больше всего кумулируют ХОС?

4 Какие препараты применяют как инсектициды, гербициды и фунгициды?

5 Какова токсикодинамика ХОС в организме животных?

6 Назовите основные симптомы отравления ХОС?

7 Какие лечебные мероприятия проводят в случаях отравления ХОС?

8 Основные пути профилактики отравления ХОС?

Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 2050 | Нарушение авторских прав